本发明属于植物提取领域，具体涉及一种从芒果叶中提取分离芒果苷的方法。
背景技术：
芒果苷(mangiferin)为一种四羟基吡酮的碳酮苷，分子式C19H18O11，结构式见式1，广泛存在于芒果、知母、茵陈、獐牙菜等多种植物中。在我国药典及多种中药材、中成药的质量标准中，芒果苷含量被广泛用作质量控制指标。现代医学研究证明，芒果苷具有抗氧化、抗炎、抗辐射、防治皮肤老化、降血糖、降尿酸、抗肿瘤、免疫调节等多方面的药理作用，具有极高的开发利用前景。
芒果(Mangifera indica L.)为我国南方地区常见热带水果。四川攀西地区芒果种植面积达30多万亩，具有产量高、品质好的特点，占据国内晚熟芒果市场，芒果产业成为当地农业的龙头产业。我们长期的测定分析表明，攀西地区芒果叶中芒果苷含量高达2～8％，远高于知母等其他植物中的含量，也远高于我国其他产区芒果叶中芒果苷的含量。从当地丰富的芒果叶资源中高效提取分离芒果苷，不仅可以大幅度提高当地芒果产业的经济效益，而且对降低芒果苷原料药的成本、促进芒果苷的进一步开发利用具有重要意义。
目前已有的从芒果叶中提取分离芒果苷的方法，普遍工艺较为复杂，一般都要经过色谱分离才能得到纯度80％以上的产品，提取成本也较高。发明人欲提供一种简易的方法获得高纯度的芒果苷。
技术实现要素：
本发明所解决的技术问题是提供一种全新的从芒果叶中提取分离芒果苷的方法，该方法简单易操作，而且可以获得较高纯度的芒果苷。
本发明从芒果叶中提取分离芒果苷的方法，包括如下步骤：
A、原料准备：以芒果叶为原料，干燥，粉碎过20-40目筛，得芒果叶粉；
B、酯提除杂：称取芒果叶粉，按每千克芒果叶粉加入2-4L乙酸乙酯，密封浸泡≥4h，室温震摇≥10min，过滤；反复提取3-5次，直到提取液绿色基本消失得芒果叶残渣；
C、甲醇提取：取步骤B提取后的芒果叶残渣，按每千克芒果叶残渣加入2-4L甲醇，30～40℃密封浸泡≥4h，50～60℃搅拌提取0.5～1h，趁热过滤，反复提取4～6次，将各次提取液合并，室温沉淀≥8h,过滤，得滤液；
D、浓缩洗涤：将步骤C所得的滤液，浓缩成浓浸膏，按每千克浸膏加入2～4L甲醇，在50～60℃下搅拌洗涤，放冷，过滤，反复洗涤3-5次，直到滤渣呈黄白色颗粒；干燥滤渣，得到纯度60～70％的芒果苷粗品。
进一步的，为了获得更高纯度的芒果苷，可以将步骤D获得的芒果苷粗品进行结晶纯化。如E、结晶纯化：取步骤D得到的芒果苷粗品，按每千克芒果苷粗品加入3～5L浓度为40～60％(Vol)的乙醇，50～60℃下搅拌洗涤10min，4～10℃下冷却≥4h，过滤，反复3～5次；干燥滤渣，得到纯度90～98％的芒果苷纯品。
上述技术方案中，步骤A所述芒果叶采用新鲜芒果叶；尤其的，步骤A所述芒果叶采用新鲜的芒果嫩叶。但是鉴于原料的收集情况，一般采用芒果的嫩叶、枝条基部的老叶，以及它们的混合物。这是因为发明人检测发现：不同品种和老嫩程度的芒果叶中芒果苷含量差别极大，如种植面积较大的凯特、海顿、吉禄等品种的含量一般在2～4％，而乳芒等传统老品种的含量可高达6～8％，同一品种的梢尖嫩叶的含量远高于枝条基部的老叶。因此，本发明提取方法中所使用的原料主要为各种芒果的嫩叶、枝条基部的老叶，以及它们的混合物，一般可在疏花疏果的时候或芒果采收后修枝的时候采集新鲜芒果叶作为混合原料。
上述技术方案中，步骤A所述干燥为自然晒干或45-65℃烘干至水分含量<8％。
上述技术方案中，步骤C所述室温沉淀≥8h的过滤，采用≥200目的滤网精细过滤。
上述技术方案中，步骤D所述滤液浓缩采用5～65℃真空旋转蒸发进行浓缩。
上述技术方案中，步骤D所述在50～60℃下搅拌洗涤10-20min。
上述技术方案中，步骤D所述过滤采用≥200目的滤网过滤。
上述技术方案中，步骤D所述干燥为在50～60℃下烘干。
上述技术方案中，步骤E结晶纯化所述过滤采用≥200目的滤网的过滤。
上述技术方案中，步骤E所述干燥滤渣为在50～60℃下烘干滤渣。
本发明的关键步骤及其作用如下：步骤B的目的是通过乙酸乙酯提取去除芒果叶中的脂溶性成分，这些脂溶性成分会严重妨碍后续步骤中芒果苷产品的析出，本步骤中芒果苷的损失率<2％。步骤C利用芒果苷溶于热甲醇的特性进行提取，产率≥95％。步骤D用芒果苷溶于热甲醇，而在冷甲醇中溶解度极低的原理，对浓浸膏里面的芒果苷进行洗涤，可得到纯度≥60％的芒果苷粗品，本步骤的产率≥90％。步骤E利用芒果苷溶于热的稀乙醇、而在冷的稀乙醇中溶解度极低的原理，进行结晶纯化，可得到纯度≥90％的芒果苷纯品，本步骤的产率≥80％。
本发明的有益效果为，本发明提取方法只需采用几步简单的提取分离手段，就可以获得较高纯度的芒果苷，操作简便，成本大大降低。本发明提取方法可分别得到纯度为60～70％的芒果苷粗品和纯度为90～98％的芒果苷纯品，芒果苷粗品的产率≥83％，纯品的产率≥65％。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，说明但不限制本发明。
发明人采用高效液相色谱精密测定发现：攀西地区芒果叶中芒果苷含量高达2～8％，远高于知母等其他植物中的含量，也远高于我国其他产区芒果叶中芒果苷的含量。不同品种和老嫩程度的芒果叶中芒果苷含量差别极大，如种植面积较大的凯特、海顿、吉禄等品种的含量一般在2～4％，而乳芒等传统老品种的含量可高达6～8％，同一品种的梢尖嫩叶的含量远高于枝条基部的老叶。
以下通过本发明制备实例说明本发明的有益效果。
实施例1
A、原料准备：以新鲜芒果叶为原料，自然晒干或50℃烘干，粉碎过20目筛。
B、酯提除杂：称取1000g芒果叶粉，加入3L乙酸乙酯，密封浸泡5h，室温震摇提取15min，过滤；反复提取4次，提取液绿色基本消失。
C、甲醇提取：取步骤B提取后的残渣，加入2.5L甲醇，30℃密封浸泡5h后，55℃搅拌提取0.5h，趁热过滤，反复提取5次，将各次提取液合并，室温沉淀9h,用200目的滤网精细过滤。
D、浓缩洗涤：将步骤C的滤液，50℃真空旋转蒸发浓缩得浓浸膏约50g，加入150mL甲醇，在55℃下搅拌洗涤10min，放冷，用200目的滤网过滤，反复洗涤4次，滤渣呈黄白色颗粒。将滤渣在55℃下烘干，得到纯度62.5％的芒果苷粗品,产率约为84.5％。
实施例2
A、原料准备：以新鲜芒果叶为原料，自然晒干，粉碎过30目筛。
B、酯提除杂：称取1000g的芒果叶粉，加入4L乙酸乙酯，密封浸泡4h，室温震摇10min，过滤；反复提取3次，提取液绿色基本消失。
C、甲醇提取：取步骤B提取后的残渣，加入4L甲醇，40℃密封浸泡4h后，60℃搅拌提取0.5h，趁热过滤，反复提取4次，将各次提取液合并，室温沉淀10h,用200目的滤网精细过滤。
D、浓缩洗涤：将步骤C的滤液，65℃真空旋转蒸发浓缩成浓浸膏，加入200mL甲醇，在50℃下搅拌洗涤20min，放冷，用200目的滤网过滤，反复洗涤5次，滤渣呈黄白色颗粒。将滤渣在50℃下烘干，得到纯度67.6％的芒果苷粗品43.4g。
E、结晶纯化：取步骤D得到的芒果苷粗品，加入45％乙醇160mL，55℃下搅拌洗涤10min，冰箱中4～6℃冷却4h，用200目的滤网过滤，反复3次。将滤渣在50℃下烘干，得到纯度92.4％的芒果苷纯品26.5g，产率为71.2％。
实施例3
A、原料准备：以新鲜芒果叶为原料，65℃烘干，粉碎过40目筛。
B、酯提除杂：称取1000g芒果叶粉，加入2L乙酸乙酯，密封浸泡6h，室温震摇20min，过滤；反复提取5次，提取液绿色基本消失。
C、甲醇提取：取步骤B提取后的残渣，加入2L甲醇，30℃密封浸泡6h后，60℃搅拌提取1h，趁热过滤，反复提取6次，将各次提取液合并，室温沉淀12h,用200目的滤网精细过滤。
D、浓缩洗涤：将步骤C的滤液，65℃真空旋转蒸发浓缩成浓浸膏，加入130mL甲醇，在50℃下搅拌洗涤20min，放冷，用200目的滤网过滤，反复洗涤5次，滤渣呈黄白色颗粒。将滤渣在60℃下烘干，得到纯度66.5％的芒果苷粗品48.2g。
E、结晶纯化：取步骤D得到的芒果苷粗品，按照重量体积比加入20mL 40～60％乙醇，60℃下搅拌洗涤10min，6～10℃下冷却8h，用200目的滤网过滤，反复5次。将滤渣在60℃下烘干，得到纯度97.7％的芒果苷纯品25.9g,产率为65.8％。