一种氟苯尼考胺人工抗原的合成方法与流程

技术特征：

1.一种氟苯尼考胺人工抗原的合成方法，其特征在于其由氟苯尼考与4-溴丁酸苄酯、20% H₂SO₄、K₂CO₃、NH₃.CH₃OH反应得到具有羧基的产物，即半抗原FFA-2，用碳二亚胺法将半抗原FFA-2与载体蛋白偶联，即得到氟苯尼考胺人工抗原；步骤为：

（1）半抗原FFA-2的合成：

合成路线如下：

称取10.0g FF溶于150mL乙酸中, 在10℃下逐滴地加入120 mL、20% H₂SO₄溶液中，然后在110℃下搅拌3h，再冷却至室温，并调节pH至14，混合物通过萃取吸收技术提取, 再用Na₂SO₄浓缩干燥，得到白色固体FFA 5.0g；

称取500.0mg FFA和335mg K₂CO₃溶于5mL乙腈中,加入624 mg 4-溴丁酸苄酯，在50℃下搅拌过夜，然后将混合物倒入水中, 通过萃取吸收技术提取, 再用Na₂SO₄浓缩干燥，得到粗产物；再将粗产物用硅胶柱纯化，得到白色固体FFA-1 805mg；

称取805 mg FFA-1，用8.00 mL、2 M NH₃.CH₃OH溶解，在室温下搅拌过夜，混合物用DCM清洗浓缩，得到白色固体FFA-2 271 mg；

（2）完全抗原的制备：步骤（1）制备的半抗原FFA-2，与KLH偶联得到偶联物完全抗原FFA-2-KLH；或与BSA偶联得到偶联物完全抗原FFA-2-BSA。

2.如权利要求1所述氟苯尼考胺人工抗原的合成方法，其特征在于：步骤（2）所述完全抗原FFA-2-KLH制备方法如下：

a、称取步骤（1）中制得的2.2mg FFA-2，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐5mg，N-羟基琥珀酰亚胺3mg，用400μL无水N,N-二甲基甲酰胺溶解，室温搅拌反应4-5h，称为A液；取匙孔血蓝蛋白KLH 0.735mL，6.8mg/mL， FFA-2与KLH摩尔比为6000︰1，加入等体积硼酸缓冲溶液，称为B液；在室温条件，逐滴将A液加入到B液中，室温反应过夜，即得偶联物FFA-2-KLH混合液；

b、透析：取8cm的透析袋，于沸水中煮沸10min，再用50℃的去离子水冲洗2min，保存在4℃去离子水中备用；将偶联物FFA-2-KLH混合液装入透析袋于0.01mol/L的PBS中透析3天，每天换液3次，即得完全抗原FFA-2-KLH。

3.如权利要求1所述氟苯尼考胺人工抗原的合成方法，其特征在于：步骤（2）所述完全抗原FFA-2-BSA制备方法如下：

a、称取步骤（1）制得的1.5mg FFA-2，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐4mg，N-羟基琥珀酰亚胺2.5mg，用250μL无水N,N-二甲基甲酰胺溶解，室温搅拌反应4-5h，称为A液；称取5mg 牛血清蛋白BSA，FFA-2与BSA摩尔比为60︰1，溶解于1mL碳酸钠/碳酸氢钠缓冲溶液中，加入等体积硼酸缓冲溶液，称为B液；在室温条件，逐滴将A液加入到B液中，室温反应过夜，即得偶联物FFA-2-BSA混合液；

b、透析：取8cm的透析袋，于沸水中煮沸10min，再用50℃的去离子水冲洗2min，保存在4℃去离子水中备用；将偶联物FFA-2-BSA混合液放入透析袋于0.01mol/L的PBS中透析3天，每天换液3次，即得完全抗原FFA-2-BSA。