技术特征：
技术总结
本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9体系的同源修复载体构建方法，属于基因工程技术领域；其步骤为：以质粒PCBC与野生型拟南芥基因组为模板，通过PCR分别扩增含打靶序列的目的条带AS‑gRNA与AS同源修复模板片段，电泳、切胶回收目的条带；将质粒PHDE‑mCH用Bsa1酶切；将酶切完全的PHDE‑mCh载体与ASgRNA经同源重组酶组装连接，形成重组质粒PHDE‑ASgRNA，转化和测序鉴定，再将测序正确的PHDE‑ASgRNA质粒用EcoR1酶切后与AS同源修复模板片段同源重组酶连接，经转化和测序鉴定，构建PHDE‑ASgRNA‑AS同源修复载体，本发明技术能真正实现对目标生物基因组的定点编辑功能的CRISPR/Cas9系统的方法，载体构建只需通过一步PCR，简单易行，无需对酶切载体与PCR产物纯化回收，组装效率高。
技术研发人员：欧阳乐军;李莉梅;徐锡荣;刘雅丽;柳镜炬;梁裕华
受保护的技术使用者：广东石油化工学院
技术研发日：2017.10.20
技术公布日：2018.04.20