胞苷二磷酸胆碱的晶体及其制造方法与流程

本发明涉及品质优良的胞苷二磷酸胆碱的晶体及其制造方法。

背景技术：

胞苷二磷酸胆碱是具有脑功能改善效果的生理活性物质，在日本被作为医疗用药品广泛使用，在日本以外被作为健康食品原材料广泛使用(专利文献1)。作为胞苷二磷酸胆碱的晶体，已知一水合物的晶体(专利文献3)，作为其制造方法，公开了向溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中添加有机溶剂的方法(专利文献2和3)。

如果向溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中添加乙醇等有机溶剂，则在常温下分离为有机层和水层这两层，结晶需要长时间。因此，为了稳定地得到胞苷二磷酸胆碱的晶体，如专利文献3所示需要50～70℃的高温。

另一方面，如果使用与溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液的溶混性高的甲醇，则在低温条件下一水合物的晶体也能够快速地起晶(专利文献2和后述的比较例1)。

根据非专利文献1，甲醇作为应限制在药品中的残留量的溶剂而被指定为第2类溶剂，另外，在医师的处方管理范围之外的食品中也是不希望残留的。因此，作为药品、食品中使用的原材料，强烈要求降低胞苷二磷酸胆碱的晶体中的残留甲醇，并且为了配合成型为片剂等而要求具有良好的粉体物性。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第6166786号公报

专利文献2：日本特公昭51-32630号公报

专利文献3：日本专利第647367号公报

专利文献4：日本专利第3369236号公报

专利文献5：日本专利第4977608号公报

非专利文献

非专利文献1：医藥品の残留溶媒ガイドラインについて(关于药品的残留溶剂指南)

技术实现要素：

发明所要解决的问题

但是，当在结晶工序中使用乙醇时，如专利文献3所记载的那样，想要在50～70℃的高温下由溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液得到胞苷二磷酸胆碱的晶体时，胞苷二磷酸胆碱容易分解，分解所生成的杂质在制品中以高浓度残留(专利文献3和后述的表3的比较例3)。

与此相对地，在即使接受结晶需要长时间这一点也使结晶温度降低时，虽然可以抑制胞苷二磷酸胆碱的分解，但此次得到的晶体的比容积显著增大，粉体物性劣化(后述的表2的比较例4)。

另外，就专利文献2中记载的方法而言，即使在滤出晶体时的清洗工序中不使用甲醇，结晶工序中使用的甲醇也以高浓度残留在晶体中(后述的表4的比较例1和2)。

目前市场上流通的胞苷二磷酸胆碱的晶体无一例外地残留有甲醇(后述的表4的a～c公司制品)，迄今为止不含甲醇且粉体物性优良的胞苷二磷酸胆碱的晶体尚属未知。

因此，本发明的目的在于，提供不含甲醇且粉体物性得到改善的胞苷二磷酸胆碱的晶体及其制造方法。

用于解决问题的方法

本发明涉及以下的(1)～(11)。

(1)一种胞苷二磷酸胆碱的晶体，其中，不含甲醇且松装比容为4.1ml/g以下。

(2)根据上述(1)所述的晶体，其中，安息角为57度以下。

(3)根据上述(1)或(2)所述的晶体，其中，崩溃角为50度以下。

(4)根据上述(1)～(3)中任一项所述的晶体，其中，致密比容为2.1ml/g以下。

(5)根据上述(1)～(4)中任一项所述的晶体，其中，不含除选自由乙醇、丙酮、1-丙醇、2-丙醇、乙酸乙酯、1-丁醇、2-丁醇、庚烷、乙酸异丙酯、甲乙酮、乙酸丙酯和四氢呋喃组成的组中的至少一种有机溶剂以外的有机溶剂。

(6)根据上述(1)～(5)中任一项所述的晶体，其中，不含除选自由乙醇、丙酮、1-丙醇和2-丙醇组成的组中的至少一种有机溶剂以外的有机溶剂。

(7)根据上述(1)～(6)中任一项所述的晶体，其中，不含除乙醇以外的有机溶剂。

(8)一种胞苷二磷酸胆碱的晶体的制造方法，其包括下述工序：使溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液析出胞苷二磷酸胆碱的晶体的工序；收集该析出的胞苷二磷酸胆碱的晶体的工序；和将该收集的胞苷二磷酸胆碱的晶体用含水量为5～50体积％的含有除甲醇以外的有机溶剂的水溶液清洗的工序。

(9)根据上述(8)所述的制造方法，其中，除甲醇以外的有机溶剂为选自由乙醇、丙酮、1-丙醇、2-丙醇、乙酸乙酯、1-丁醇、2-丁醇、庚烷、乙酸异丙酯、甲乙酮、乙酸丙酯和四氢呋喃组成的组中的至少一种有机溶剂。

(10)根据上述(8)或(9)所述的制造方法，其中，除甲醇以外的有机溶剂为选自由乙醇、丙酮、1-丙醇和2-丙醇组成的组中的至少一种有机溶剂。

(11)根据上述(8)～(10)中任一项所述的制造方法，其中，除甲醇以外的有机溶剂为乙醇。

发明效果

本发明提供不含甲醇且粉体物性得到改善的胞苷二磷酸胆碱的晶体及其制造方法。

附图说明

图1示出比较例3和4以及实施例1～4中得到的胞苷二磷酸胆碱的晶体的、松装比容与晶体清洗中使用的乙醇水溶液的乙醇浓度的相关性。纵轴表示松装比容(ml/g)，横轴表示乙醇浓度(体积％)。黑色菱形表示70℃结晶的结果，白色菱形表示30℃结晶的结果。

图2示出比较例3和4以及实施例1～4中得到的胞苷二磷酸胆碱的晶体的、致密比容与晶体清洗中使用的乙醇水溶液的乙醇浓度的相关性。纵轴表示致密比容(ml/g)，横轴表示乙醇浓度(体积％)。黑色菱形表示70℃结晶的结果，白色菱形表示30℃结晶的结果。

具体实施方式

1.本发明的晶体

本发明的晶体是不含甲醇且松装比容为4.1ml/g以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇且松装比容优选为3.6ml/g以下、更优选为3.1ml/g以下、最优选为2.6ml/g以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

松装比容小的晶体的填充性优良，在各种加工工序中容易处理，另外在输送方面的成本也低。因此，作为胞苷二磷酸胆碱的晶体，优选松装比容小，作为松装比容的下限值，可列举通常1.0ml/g以上、优选为1.2ml/g以上。

在此，松装比容是指：在容器中填充粉体并测定其质量时，粉体所占的容积除以该质量而得到的值。

松装比容可以基于第十七次修订日本药典使用多功能测试仪mt-1001t型(清新企业公司制)按照附带的手册在以下的条件下进行测定。

[松装比容的测定条件]

使用设备：多功能测试仪mt-1001t型(清新企业公司制)

筛：1.18mm

振幅：0.7～0.8mm

晶体容量：100ml

松装比容的测定方法的具体例子：一边使晶体经由以0.7～0.8mm的幅度振动的1.18mm的筛下落，一边填充到不锈钢制的100ml圆筒形容器中。从容器的上面将过量的粉体小心地刮掉，通过减去预先测定出的空的测定容器的质量而测定粉体的质量。测定独立地进行3次并求出平均值。

本发明的晶体不含甲醇这一点可以按照以下的使用气相色谱法的分析例中记载的方法来确认。

本发明的晶体不含甲醇是指：按照以下的使用气相色谱法的分析例进行分析时，甲醇在检测限以下。

[使用气相色谱法的分析例]

使用设备：gc-2014(岛津制作所公司制)

柱填充剂：adsorbp-160/80mesh(西尾工业公司制)

柱温：120℃

气化室温度：150℃

氦气流速：30ml/分钟

检测器温度：200℃

试样制备方法：称量约1.0g胞苷二磷酸胆碱的晶体，使其溶解于蒸馏水中并调整为10ml后作为试样。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇、松装比容为4.1ml/g以下且安息角优选为57度以下、更优选为55度以下、进一步优选为53度以下、最优选为50度以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

就安息角大的晶体而言，在从料斗排出时，如果料斗底部的倾斜角不大于安息角的角度则不能从料斗底部完全排出，因此装置受限，处理变得烦杂。另外，安息角大的晶体的流动性差。因此，作为胞苷二磷酸胆碱的晶体，优选安息角小，作为安息角的下限，可列举通常30度以上、优选为35度以上。

在此，安息角是指：利用漏斗之类的装置使粉体静静地下落到水平的面上时，由粉体形成的圆锥体的母线与水平面所成的角。

安息角例如可以使用多功能测试仪mt-1001t型(清新企业公司制)按照附带的手册在以下的测定条件下进行测定。

[安息角的测定条件]

使用设备：多功能测试仪mt-1001t型(清新企业公司制)

筛：1.18mm

振幅：0.7～0.8mm

安息角的测定方法的具体例子：一边使晶体经由以0.7～0.8mm的幅度振动的1.18mm的筛下落，一边使其堆积在安息角工作台(部件编号：mt-1028)上。以不对安息角工作台施加振动的方式使其旋转，在三处读取角度，将它们的算术平均值作为安息角。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇、松装比容为4.1ml/g以下且崩溃角优选为50度以下、更优选为48度以下、进一步优选为46度以下、最优选为44度以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。作为崩溃角的下限值，可列举通常30度以上、优选为35度以上。

在此，崩溃角是指：对利用漏斗之类的装置使粉体静静地下落到水平的面上时由粉体形成的圆锥体间接地施加一定的撞击时形成的、圆锥体的母线与水平面所成的角。

崩溃角例如可以使用多功能测试仪mt-1001t型(清新企业公司制造)按照附带的手册在以下的测定条件下进行测定。

[崩溃角的测定方法的具体例子]

在测定安息角之后，将安息角工作台单元(部件编号：mt-1028)的下方附带的重物缓慢地抬起至敲击工作台的下方并使其下落。重复进行三次该操作。通过与安息角的测定方法同样的方法在三处读取角度，将它们的算术平均值作为崩溃角。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇、松装比容为4.1ml/g以下且致密比容优选为2.1ml/g以下、更优选为2.0ml/g以下、进一步优选为1.9ml/g以下、最优选为1.7ml/g以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

致密比容小的晶体的填充性优良，在输送方面的成本也低。因此，作为胞苷二磷酸胆碱的晶体，优选致密比容小，作为致密比容的下限值，可列举通常0.8ml/g以上、优选为1.0ml/g以上。

在此，致密比容是指：向容器中填充粉体并施加一定的撞击后测定其质量时，粉体所占的容积除以该质量而得到的值。

致密比容例如可以基于第十七修订日本药典使用多功能测试仪mt-1001t型(清新企业公司制)按照附带的手册在以下的条件下进行测定。

[致密比容的测定条件]

使用设备：多功能测试仪mt-1001t型(清新企业公司制)

筛：1.18mm

振幅：0.7～0.8mm

晶体容量：100ml

衬垫(スぺーサー)：32mm

敲击速度：1次/秒

敲击次数：400次

致密比容的测定方法的具体例：一边使晶体经由以0.7～0.8mm的幅度振动的1.18mm的筛下落，一边填充到安装有辅助圆筒的不锈钢制的100ml圆筒形容器中。隔着32mm的衬垫重复进行400次的1次/秒的敲击后，拆下辅助圆筒，从容器的上面将过量的粉体小心地刮掉，通过减去预先测定出的空的测定容器的质量而测定粉体的质量。测定独立进行3次并求出平均值。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇、松装比容为4.1ml/g以下且安息角与崩溃角之差优选为9.0以下、更优选为8.5以下、进一步优选为7.0以下、更进一步优选为5.0以下、最优选为4.0以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

安息角与崩溃角之差大的晶体的射流性高而难以控制。因此优选安息角与崩溃角之差小。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇、松装比容为4.1ml/g以下且优选不含除选自由乙醇、丙酮、1-丙醇、2-丙醇、乙酸乙酯、1-丁醇、2-丁醇、庚烷、乙酸异丙酯、甲乙酮、乙酸丙酯和四氢呋喃组成的组中的至少一种有机溶剂以外的有机溶剂、更优选不含除选自由乙醇、丙酮、1-丙醇和2-丙醇组成的组中的至少一种有机溶剂以外的有机溶剂、最优选不含除乙醇以外的有机溶剂的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇、松装比容为4.1ml/g以下且晶体中所含的上述有机溶剂的含量分别优选为1000质量ppm以下、更优选为800质量ppm以下、进一步优选为600质量ppm以下、最优选为500质量ppm以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

本发明的晶体中的有机溶剂的含量例如可以通过上述使用气相色谱法的分析进行测定。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇、松装比容为4.1ml/g以下且在高效液相色谱(以下称为hplc)分析中、5’胞苷酸的峰面积相对于胞苷二磷酸胆碱的峰面积100优选为0.27以下、更优选为0.20以下、进一步优选为0.15以下、最优选为0.10以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

5’胞苷酸是通过依赖于加热或ph的变动的胞苷二磷酸胆碱的分解而生成的化合物。

hplc分析是指：将作为分析对象的化合物溶解于溶剂中并供于利用hplc的分析。

作为hplc分析，只要是可以同时检测胞苷二磷酸胆碱、5’胞苷酸和尿苷二磷酸胆碱的分析方法则对分析条件等没有特别限定，可列举优选检测、测定254nm的吸光度的hplc分析方法。

作为hplc分析方法的例子，可列举以下记载的hplc分析例。

[hplc分析例]

使用设备：检测器(l-7405)、泵(l-7100)、自动进样器(l-7200)、柱温箱(l-2350)(均为日立制作所公司制)、chromatopac(c-r8a)、数据分析(pacsolution)(均为岛津制作所公司制)

检测器：紫外吸光光度计(测定波长254nm)

柱：将2根partisil10sax粒径10μm4.0×250mm串联连接(hichrom)

流动相：将用磷酸调节为ph3.5的0.06mol/l的磷酸二氢钾水溶液(将磷酸二氢钾40.83g溶解于蒸馏水中，加入磷酸调节到ph3.5后，用蒸馏水调整到5000ml)

柱温：30℃

流速：0.4～0.5ml/分钟(以使胞苷二磷酸胆碱的保留时间达到约26分钟的方式进行调节)

进样量：20μl

试样制备方法：称量约0.1g胞苷二磷酸胆碱的晶体，使其溶解于蒸馏水中并调整为100ml后作为试样。

本申请说明书中，hplc分析中的峰面积为在上述的hplc分析例所记载的hplc分析条件下进行测定时的值。但是，与该分析条件同等的分析条件也包含在本申请说明书的hplc分析条件中。

峰面积是指进行hplc分析时基线与峰线所包围的部分的面积，可以对通过hplc分析检测到的各个化合物求出。

作为本发明的晶体的一个方式，可列举不含甲醇、松装比容为4.1ml/g以下且在hplc分析中尿苷二磷酸胆碱的峰面积相对于胞苷二磷酸胆碱的峰面积100优选为0.56以下、更优选为0.30以下、进一步优选为0.10以下、最优选为0.06以下的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

尿苷二磷酸胆碱是通过依赖于加热或ph的变动的胞苷二磷酸胆碱的分解而生成的化合物。

2.本发明的晶体的制造方法

本发明的晶体的制造方法为胞苷二磷酸胆碱的晶体的制造方法，包括下述工序：使溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液析出胞苷二磷酸胆碱的晶体的工序；收集该析出的胞苷二磷酸胆碱的晶体的工序；和将该收集的胞苷二磷酸胆碱的晶体用含水量为5～50体积％的含有除甲醇以外的有机溶剂的水溶液清洗的工序。

以下对各工序进行说明。

(使溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液析出胞苷二磷酸胆碱的晶体的工序)

溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中所含的胞苷二磷酸胆碱可以利用发酵法、酶法、由天然物提取的提取法、化学合成法等中的任一制造方法制造。

作为获得溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液的方法，可列举例如：使上述得到的胞苷二磷酸胆碱溶解于水的方法、从培养具有生产胞苷二磷酸胆碱的能力的微生物而得到的含有胞苷二磷酸胆碱的培养物[日本专利第3369236号公报(专利文献4)]等中除去不溶物的方法、和日本专利第4977608号公报(专利文献5)中记载的方法。

当溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中包含妨碍结晶的固态物时，可以使用离心分离、过滤或陶瓷过滤器等将固态物除去。

另外，当溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中包含妨碍结晶的水溶性的杂质、盐时，可以通过在填充有离子交换树脂等的柱中过柱等除去水溶性的杂质、盐。

另外，当溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中包含妨碍结晶的疏水性的杂质时，可以通过在填充有合成吸附树脂、活性炭等的柱中过柱等除去疏水性的杂质。

溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中的胞苷二磷酸胆碱的浓度可以按照达到优选为200g/l以上、更优选为250g/l以上、进一步优选为300g/l以上的方式来进行调整。

为了将溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液的胞苷二磷酸胆碱的浓度设为上述的浓度，可以将该水溶液利用加热浓缩法或减压浓缩法等常规的浓缩方法进行浓缩。

作为使溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液析出胞苷二磷酸胆碱的晶体的方法，可列举例如将该水溶液冷却的方法、将该水溶液减压浓缩的方法、向该水溶液中添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液的方法、或将这些方法中的一种以上组合的方法等，优选向该水溶液中添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液的方法，更优选将向该水溶液中添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液的方法与将该水溶液冷却的方法组合的方法。

作为将溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液冷却的方法中的该水溶液的温度，可列举优选为0～35℃、更优选为0～30℃、最优选为0～25℃。

作为将溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液冷却的方法中的冷却时间，可列举优选为2～100小时、更优选为2～70小时、最优选为2～50小时。

作为将溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液减压浓缩的方法中的该水溶液的温度，可列举优选为0～50℃、更优选为5～45℃、最优选为10～40℃。

作为将溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液减压浓缩的方法中的减压时间，可列举优选为2～100小时、更优选为3～70小时、最优选为5～50小时。

作为向溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液的方法中的除甲醇以外的有机溶剂，可列举例如：优选为选自由乙醇、丙酮、1-丙醇、2-丙醇、乙酸乙酯、1-丁醇、2-丁醇、庚烷、乙酸异丙酯、甲乙酮、乙酸丙酯和四氢呋喃组成的组中的至少一种有机溶剂；更优选为选自由乙醇、丙酮、1-丙醇和2-丙醇组成的组中的至少一种有机溶剂；最优选为乙醇。另外，这些有机溶剂也可以将多种组合使用。

作为向溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中添加或滴加的含有除甲醇以外的有机溶剂的水溶液中的该有机溶剂的浓度，可列举优选为30体积％以上、更优选为40体积％以上、进一步优选为50体积％以上、最优选为60体积％以上。

作为添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液时的温度，可列举优选为0～70℃、更优选为0～50℃、进一步优选为5～45℃、最优选为10～35℃。

作为除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液的添加或滴加所需要的时间，可列举优选为1～10小时、更优选为2～8小时。

作为添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液的量，可列举为溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液的优选1～10倍量、更优选2～7倍量。

在通过向溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液而使胞苷二磷酸胆碱的晶体析出的方法中，可以在添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液之后、胞苷二磷酸胆碱的晶体析出之前添加籽晶。

作为籽晶，可以使用例如通过日本专利第647367号公报(专利文献3)中记载的方法获得的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

作为添加该籽晶的时间，可列举例如：从开始滴加或添加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液起优选0～12小时以内、更优选0～8小时以内、最优选为0～4小时以内。

上述籽晶可以按照在添加籽晶的水溶液中的浓度达到优选为0.1～5.0g/l、更优选为0.2～1.0g/l的方式来添加。

在如上所述地使胞苷二磷酸胆碱的晶体析出后，可以通过将包含该晶体的水溶液在优选0～70℃、更优选3～50℃、最优选5～35℃下搅拌或放置优选0.5～48小时、更优选0.5～24小时、最优选0.5～12小时而使其熟化。

使晶体熟化是指：中断或停止除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液的添加以使晶体生长。

使晶体生长是指：以析出的晶体为基础使晶体增大。

晶体的熟化主要是为了使晶体生长而进行的，但在晶体生长的同时也可以发生新晶体的析出。

在使晶体熟化后，可以再次开始使胞苷二磷酸胆碱的晶体析出的工序。

(收集析出的胞苷二磷酸胆碱的晶体的工序)

作为收集析出的胞苷二磷酸胆碱的晶体的方法，可列举例如过滤、加压过滤、抽滤、离心分离等。

(将收集的胞苷二磷酸胆碱的晶体用含水量为5～50体积％的含有除甲醇以外的有机溶剂的水溶液清洗的工序)

本发明的制造方法的一个方式为：将收集的胞苷二磷酸胆碱的晶体用含水量为5～50体积％、优选为10～40体积％、更优选为20～30体积％的含有除甲醇以外的有机溶剂的水溶液清洗。通过该工序，可以减少母液对晶体的附着，提高晶体的品质，此外还可以控制晶体的粉体物性。

晶体清洗中使用的含有除甲醇以外的有机溶剂的水溶液的温度只要为胞苷二磷酸胆碱不分解的温度则可以为任意温度，可列举优选为40℃以下、更优选为30℃以下、进一步优选为20℃以下、最优选为15℃以下。作为温度的下限值，可列举通常0℃以上、优选为5℃以上。

作为清洗胞苷二磷酸胆碱的晶体的工序中使用的除甲醇以外的有机溶剂，可以使用与上述向溶解有胞苷二磷酸胆碱的水溶液中添加或滴加除甲醇以外的有机溶剂或含有该有机溶剂的水溶液的方法中的、除甲醇以外的有机溶剂同样的有机溶剂。

作为清洗晶体的方法，可列举例如向晶体层喷射或喷雾包含上述含有除甲醇以外的有机溶剂的水溶液的晶体清洗溶液的方法、将晶体层浸渍于该晶体清洗溶液中的方法。

在将晶体层浸渍于晶体清洗溶液中的方法中，还可以从浸渍有晶体层的晶体清洗溶液中取出晶体层，再次悬浮于晶体清洗溶液并搅拌，再次进行过滤、加压过滤、抽滤、离心分离等操作。

作为晶体清洗中使用的晶体清洗溶液的量，可列举：以相对于胞苷二磷酸胆碱的晶体重量的体积比率计，优选为0.5～10倍量、更优选为1～9倍量、进一步优选为2～8倍量。

通过使这样得到的湿晶体干燥，可以获得本发明的晶体。作为干燥条件，只要是可以保持胞苷二磷酸胆碱的晶体形态的方法则可以为任一方法，例如可以应用减压干燥、真空干燥、流化床干燥、通风干燥等。

作为干燥温度，只要是可以除去附着水分、溶剂的范围则可以为任一温度，可列举优选为80℃以下、更优选为70℃以下、最优选为60℃以下。作为干燥时间，只要是可以除去附着水分、溶剂的范围则可以为任一时间，可列举优选为1～48小时、更优选为1～24小时。

[比较例1]

按照日本特公昭51-32630号公报(专利文献2)的实施例1，将760g的胞苷二磷酸胆碱(协和发酵生物公司制：lot.160325)溶解于蒸馏水中并制成1600ml，制备以450g/l的浓度包含胞苷二磷酸胆碱的水溶液。对于其中的400ml，在20℃下用20分钟添加1600ml的甲醇。在甲醇的添加过程中观察到白浊的时刻，添加0.8g的胞苷二磷酸胆碱作为籽晶。

确认胞苷二磷酸胆碱起晶后，用3小时添加800ml的乙酸乙酯，然后在20℃下进行2小时的搅拌。对这样得到的约2500ml的晶体浆料中的2000ml实施离心分离，滤出晶体，用640ml的甲醇进行清洗。将得到的湿晶体在减压条件下、25℃下干燥3小时，进一步在减压条件下、60℃下干燥3小时，得到100.9g的晶体。

[比较例2]

对比较例1中得到的晶体浆料的剩余部分实施离心分离，滤出晶体，将得到的湿晶体悬浮于160ml的99.5体积％的乙醇中并进行搅拌，由此将附着于晶体表面的甲醇完全洗掉。将该湿晶体在减压条件下、25℃下干燥3小时，进一步在减压条件下、60℃下干燥3小时，得到13.2g的晶体。

[比较例3]

按照日本专利第647367号公报(专利文献3)的实施例3，将以干物质换算计为639.9g的胞苷二磷酸胆碱(协和发酵生物公司制：lot.160325)加入到1300ml的蒸馏水中溶解，结果成为1690ml的水溶液。对于其中的832ml，在70℃下混合640ml的99.5体积％的乙醇。然后，在使该混合液保持于70℃的状态下用2小时添加1280ml的80体积％的含水乙醇。

然后，添加1.28g的胞苷二磷酸胆碱作为籽晶，在持续搅拌30分钟后，用2小时添加1280ml的99.5体积％的乙醇。然后，一边将溶液由70℃缓慢冷却到25℃，一边持续搅拌10小时。将这样得到的晶体浆料三等分，对其中的一份实施离心分离，在滤出晶体后，用533ml的99.5体积％的乙醇进行清洗。将得到的湿晶体在减压条件下、30℃下干燥3小时，进一步在减压条件下、60℃下干燥3小时，得到65.8g的晶体。

[比较例4]

使通过与比较例3同样的方法制备的胞苷二磷酸胆碱的水溶液1040ml保持于30℃，混合800ml的99.5体积％的乙醇。对于该混合液，在30℃下用2小时添加1600ml的99.5体积％的乙醇。然后，添加1.6g的胞苷二磷酸胆碱作为籽晶，在确认起晶之后，用2小时添加1600ml的99.5体积％的乙醇。

然后，在使溶液保持于30℃的状态下持续搅拌3小时后，用3小时冷却至20℃。将这样得到的晶体浆料三等分，对其中的一份实施离心分离，在滤出晶体之后，用670ml的99.5体积％的乙醇进行清洗。将得到的湿晶体在减压条件下、30℃下干燥3小时，进一步在减压条件下、60℃下干燥3小时，得到116.6g的晶体。

[预备试验]

在50～80体积％的含水乙醇(含水量20～50体积％)中溶解胞苷二磷酸胆碱(协和发酵生物公司制：lot.160325)直至不再溶解为止，在30℃、35℃或40℃下充分搅拌。然后，将各溶液用过滤器过滤，测定所得到的各滤液中的胞苷二磷酸胆碱浓度(g/l)。将结果示于表1。

[表1]

如表1所示，可知：在任一温度下，均是含水乙醇中的含水量越高则胞苷二磷酸胆碱的溶解度越高。

实施例

以下示出实施例，但本发明不受下述实施例限定。

[实施例1]

对比较例3中得到的晶体浆料的1/3份实施离心分离，在滤出晶体之后，用冷却到10℃的533ml的85体积％的含水乙醇(含水量15体积％)进行清洗。将得到的湿晶体在减压条件下、30℃下干燥3小时，进一步在减压条件下、60℃下干燥3小时，得到68.2g的晶体。

[实施例2]

对比较例3中得到的晶体浆料的1/3份实施离心分离，在滤出晶体之后，用冷却到10℃的533ml的70体积％的含水乙醇(含水量30体积％)进行清洗。将得到的湿晶体在减压条件下、30℃下干燥3小时，进一步在减压条件下、60℃下干燥3小时，得到82.5g的晶体。

[实施例3]

对比较例4中得到的晶体浆料的1/3份实施离心分离，在滤出晶体之后，用冷却到10℃的670ml的85体积％的含水乙醇(含水量15体积％)进行清洗。将得到的湿晶体在减压条件下、30℃下干燥3小时，进一步在减压条件下、60℃下干燥3小时，得到109.6g的晶体。

[实施例4]

对比较例4中得到的晶体浆料的1/3份实施离心分离，在滤出晶体之后，用冷却到10℃的670ml的70体积％的含水乙醇(含水量30体积％)进行清洗。将得到的湿晶体在减压条件下、30℃下干燥3小时，进一步在减压条件下、60℃下干燥3小时，得到105.8g的晶体。

对于目前市场上流通的胞苷二磷酸胆碱的晶体、和用上述的方法得到的胞苷二磷酸胆碱的晶体，测定松装比容、致密比容、安息角和崩溃角，将结果分别示于图1、图2和表2。

[表2]

如图1、图2和表2所示，显示出：在30℃和70℃中的任一结晶温度下，均可以使胞苷二磷酸胆碱的晶体的比容积(松装比容和致密比容)随着晶体清洗中使用的乙醇溶液的含水量的提高而降低。特别是在低温条件即30℃结晶时，提高该乙醇溶液的含水量所带来的比容积的降低效果更显著。另外显示出：使用含水乙醇清洗胞苷二磷酸胆碱的晶体的结果是，与使用99.5体积％的乙醇进行晶体清洗时相比，可以使安息角和崩溃角降低。

另外，对于所得到的胞苷二磷酸胆碱的晶体，将用hplc分析测定晶体中所含的5’胞苷酸和尿苷二磷酸胆碱的量的结果示于表3。表3中的各值表示将胞苷二磷酸胆碱的峰面积设为100时的各峰面积的值。

[表3]

如表3所示，显示出：在低温下进行结晶的方式可以使晶体中残留的5’胞苷酸和尿苷二磷酸胆碱的含量减少。

接着，对于目前市场上流通的胞苷二磷酸胆碱的晶体、和所得到的胞苷二磷酸胆碱的晶体，将用气相色谱法测定晶体中所含的残留溶剂的结果示于表4。表4中，“ppm”表示质量ppm。另外，“n.d.”表示为检测限以下。

在此，关于比较例1、2，称量约0.5g胞苷二磷酸胆碱的晶体，使其溶解于蒸馏水中并调整为10ml后作为试样。另一方面，关于比较例3、4和实施例1～4，称量约1g胞苷二磷酸胆碱的晶体，使其溶解于蒸馏水并调整为10ml后作为试样。

[表4]

如表4所示，可知目前市场上流通的胞苷二磷酸胆碱的晶体均含有甲醇。另外，由比较例1和2的结果可知，即使利用乙醇进行晶体清洗，在胞苷二磷酸胆碱的晶体中也以高浓度检测到结晶工序中所添加的甲醇。由此可知，胞苷二磷酸胆碱的晶体具有容易带入甲醇的性质，在结晶工序中添加而被带入晶体中的甲醇不能通过晶体清洗而除去。

另一方面可知，实施例1～4中在结晶工序和晶体清洗工序中没有使用甲醇，因此所得到的胞苷二磷酸胆碱的晶体中未检测到甲醇。

综上可知，利用本发明的晶体的制造方法可以获得不含甲醇且与现有的胞苷二磷酸胆碱的晶体相比显示出同等以上的粉体物性的胞苷二磷酸胆碱的晶体。

参考特定的方式对本发明详细地进行了说明，但是，对于本领域技术人员而言显而易见的是，在不脱离本发明的意图和范围的情况下能够进行各种变更和变形。需要说明的是，本申请基于2016年10月6日提出的日本专利申请(日本特愿2016-197695号)，通过引用方式援引其整体。另外，本申请中引用的全部参照作为整体引入本申请。

产业上的可利用性

根据本发明，可提供兼顾了降低杂质和残留溶剂与改善粉体物性的胞苷二磷酸胆碱的晶体及其制造法。