从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法与流程

文档序号:15469583发布日期:2018-09-18 19:57阅读:来源:国知局

技术特征:

1.从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:将鱼鳞胶原蛋白中加入去离子水,经复合蛋白酶酶解,酶解过程中超滤得超滤液,超滤液经纳滤、凝胶层析,然后选择流动相为乙腈和酒石酸水溶液,经RP-HPLC纯化,冷冻干燥即得胶原蛋白多肽。

2.根据权利要求1所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述酶解的具体步骤为:按底物浓度为8-10%向鱼鳞胶原蛋白中加入去离子水,调节pH至7.4-8.6,按加酶量为4-5.5%加入复合蛋白酶,然后在温度为30-40℃下酶解10-15h,酶解间隔1-2h用截留分子量为8-12kDa的超滤膜超滤10-20min,即得超滤液。

3.根据权利要求2所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述复合蛋白酶中胶原酶和风味蛋白酶的重量比为1:0.45-0.8。

4.根据权利要求2所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述去离子水含有0.2-0.4M氯化钾和3-5mM羧甲基纤维素钠。

5.根据权利要求1所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述纳滤的具体步骤为:将超滤液经1-1.2kDa的纳滤膜纳滤,控制压力在0.3-0.5MPa,获得1-1.2kDa以上的浓缩多肽液,即为胶原蛋白多肽粗提液。

6.根据权利要求1所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述凝胶柱层析的具体步骤为:将浓缩多肽液溶于双蒸水配成浓度为45-55mg/mL的溶液,在2-5℃、10000-15000r/min下离心15-23min,去除不溶性杂质,上清液上样至柱子内进行层析分离,用双蒸水进行洗脱,根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,其中,具有最高自由基清除活性的峰为凝胶柱层析酶解物。

7.根据权利要求1所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述RP-HPLC纯化的具体步骤为:将凝胶柱层析酶解物用双蒸水配成溶液,利用高效液相色谱进行分离,流动相为乙腈和酒石酸水溶液,将属于同一峰的收集液混合,除去乙腈和酒石酸,冻干,即得胶原蛋白多肽。

8. 根据权利要求7所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述色谱条件为:溶液的浓度为80-100μg/mL、进样量为4-6μL、色谱柱为Agilent C18(250mm×4.6mm,5μm)、柱温为25-35℃、洗脱速度为0.8-1.2mL/min。

9.根据权利要求1所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述酒石酸水溶液浓度为0.08-0.12%,所述乙腈和酒石酸水溶液的体积比为20-70:1。

10.根据权利要求1所述的从鱼鳞中提取胶原蛋白多肽的方法,其特征在于:所述酒石酸中L-酒石酸和D-酒石酸的比例为86-93:1。

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