一种快速构建CRISPR/Cas9基因编辑载体库的方法与流程

本发明涉及一种快速构建基因编辑载体库的方法，具体涉及一种快速构建的crispr/cas9基因编辑载体库的方法，属于分子生物学领域。

背景技术：

自2012年以来，一种基于crispr/cas9的基因编辑技术（下称基因编辑）得到广泛应用，它原理简单、编辑高效、成本低廉，已成为动植物基础研究及应用上的主流生物技术。

基因编辑技术的关键是插入20bp的sgrna向导序列。目前主流的插入方法包括重叠pcr法和双链退火法两种。重叠pcr法已经在多篇文献中报道，然而，pcr扩增过程中均一性差，极易出现偏好扩增，使部分sgrna数量占优势，导致低丰度sgrna打靶基因的编辑十分困难。

双链退火法不经过扩增步骤，因此理论上均一性高于重叠pcr法，是一种很好的建库方式。然而，由于双链退火法产生的双链dna长度过短，建库时连接效率低。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明提供一种利用双链退火原理快速构建crispr/cas9基因编辑载体库的方法。本发明的技术方案具体如下：

一种快速构建crispr/cas9基因编辑载体库的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤（1）、基于编辑位点设计特异性sgrna，并以g碱基开头ngg碱基（n代表任意碱基）结尾避免polyt结构的出现。

步骤（2）、人工合成步骤（1）中成对互补的寡核苷酸dna，并分别在上下游引物的5’端加入粘性末端dna碱基；

步骤（3）、将步骤（2）中的上下游dna寡核苷酸双链退火，形成双链sgrna；

步骤（4）、利用t4/t7dna连接酶将双链sgrna连接至酶切线性crispr/cas9质粒中；

步骤（5）、将步骤（4）的连接产物转化大肠杆菌，得到可用于后续实验的大肠杆菌菌体库和编辑载体库。

进一步地，步骤（3）中，双链退火具体如下：

用无菌超纯水稀释到100ng/μl，上下游引物各吸取5-200μl的pcr管中，移至pcr仪退火，退火完成后加无菌超纯水稀释稀释10倍；

退火程序为：95℃5min，-0.1℃/5-10s，退火至25℃。

进一步地，步骤（4）中的crispr/cas9质粒包括cas9和sgrna的表达框。

本发明还涉及的上述的方法得到的编辑载体库。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

（1）本发明首次建立了基于双链退火原理的建库方法，实现了各sgrna之间高度的均一性，是一种高效的基因编辑载体库构建方法。

（2）本发明可实现通过一次连接构建规模性的载体库，同时保证高度的均一性，解决目前的基因编辑载体构建方法单个进行，当构建成百上千的编辑载体时需要重复操作，造成时间和资源的浪费的问题，对于动植物及微生物基因功能研究和种质资源开发都具有重要意义。

附图说明

图1是基因编辑载体库构建的流程图；

图2是本发明构建的载体骨架图谱；

图3是本发明的基因编辑菌体库单克隆测序统计结果。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。

实施例1crispr/cas9基因编辑载体库构建。

如图1所示，本实施例的crispr/cas9基因编辑载体库构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤（1）、针对201个编辑位点人工合成402条dna寡核苷酸（seqidno.1-402），每条序列长度为25nt。

步骤（2）、将人工合成的402条dna寡核苷酸双链退火，具体如下：

将402条dna寡核苷酸用无菌超纯水稀释到100ng/μl，上下游引物各吸取5μl至200μl的pcr管中，移至pcr仪退火，随后加无菌超纯水稀释至100μl。

退火程序为：95℃5min，-0.1℃/8s，退火至25℃。随后将其按1：1比例转移至一个离心管中，形成sgrna库。

步骤（3）、bsai酶切基因编辑骨架载体，琼脂糖凝胶电泳回收得到具有相应粘性末端的线性骨架载体。

步骤（4）、取50-100ngbsai酶切线性化的骨架载体，1-5μlsgrna库，利用t4dna连接酶体系16℃连接2小时，形成sgrna连接库。

步骤（5）、利用dna回收试剂盒（e.z.n.a.®gelextractionkit）得到sgrna连接库高纯度dna。

步骤（6）、将步骤（5）中高纯度dna与大肠杆菌超级感受态（全式金生物trans1-t1phageresistantchemicallycompetentcell）混合，电转化，形成基因编辑菌体库，随后将其全部涂布在lb抗性培养基中，恒温培养箱中37℃培养24小时。

步骤（7）、刮取培养基中全部菌落提取质粒（序列如：seqidno.403），获得最终基因编辑载体库。本实施例构建的载体图谱如图2所示。

步骤（8）、步骤（6）随机挑取一皿大肠杆菌菌斑进行一代dna测序，测序引物为全式金克隆载体peasy-blunt-zero的通用引物m13-r序列为：caggaaacagctatgac（seqidno.404），共检测大肠杆菌样本677个，正确率为89.9%，对201个载体的覆盖度达90.5%，重复测到10次以下样本占97%，结果如图3所示，表明该方法构建的基因编辑载体库有很高的正确率、覆盖度和均一性。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110>云南中烟工业有限责任公司

<120>一种快速构建crispr/cas9基因编辑载体库的方法

<160>404

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>1

gattggtagattccgcgaaggtcac25

<210>2

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>2

aaacgtgaccttcgcggaatctacc25

<210>3

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>3

gattgagaacttcgtaccggaactc25

<210>4

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>4

aaacgagttccggtacgaagttctc25

<210>5

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>5

gattgaccaagcgtgagatctccaa25

<210>6

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>6

aaacttggagatctcacgcttggtc25

<210>7

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>7

gattcgaatacttgaaagagaagaa25

<210>8

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>8

aaacttcttctctttcaagtattcg25

<210>9

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>9

gattgtcatcggagattgtagattc25

<210>10

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>10

aaacgaatctacaatctccgatgac25

<210>11

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>11

gattgtctccgaagtagagaaatgg25

<210>12

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>12

aaacccatttctctacttcggagac25

<210>13

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>13

gattgaatcgcggtccgcgaacccg25

<210>14

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>14

aaaccgggttcgcggaccgcgattc25

<210>15

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>15

gattcgaggtgtctccctcctctgt25

<210>16

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>16

aaacacagaggagggagacacctcg25

<210>17

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>17

gattcgacgtcgtcgcatggtgcga25

<210>18

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>18

aaactcgcaccatgcgacgacgtcg25

<210>19

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>19

gattcgtctctcgcgcttcgcacca25

<210>20

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>20

aaactggtgcgaagcgcgagagacg25

<210>21

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>21

gattcgtgaacaaccccgacaggcg25

<210>22

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>22

aaaccgcctgtcggggttgttcacg25

<210>23

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>23

gattcggcgctgagatcctcactgt25

<210>24

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>24

aaacacagtgaggatctcagcgccg25

<210>25

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>25

gattgatcacgtgtgtactgtcgta25

<210>26

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>26

aaactacgacagtacacacgtgatc25

<210>27

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>27

gattgtttggacgctcgtagaacag25

<210>28

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>28

aaacctgttctacgagcgtccaaac25

<210>29

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>29

gattgcgagggtcctctgttctacg25

<210>30

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>30

aaaccgtagaacagaggaccctcgc25

<210>31

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>31

gattgcgcccctccttcctctaacc25

<210>32

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>32

aaacggttagaggaaggaggggcgc25

<210>33

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>33

gattggaggtccaagacgccctcca25

<210>34

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>34

aaactggagggcgtcttggacctcc25

<210>35

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>35

gattgacgacctccaaggaacaaga25

<210>36

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>36

aaactcttgttccttggaggtcgtc25

<210>37

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>37

gattggaggtccaagacgacctcca25

<210>38

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>38

aaactggaggtcgtcttggacctcc25

<210>39

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>39

gattgaagatgatacttgggaacgc25

<210>40

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>40

aaacgcgttcccaagtatcatcttc25

<210>41

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>41

gattgaatgcggttaagttaagcgg25

<210>42

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>42

aaacccgcttaacttaaccgcattc25

<210>43

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>43

gattgcgtcgaatcttggacgcgtc25

<210>44

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>44

aaacgacgcgtccaagattcgacgc25

<210>45

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>45

gattgcgggatgtagcgcctctgac25

<210>46

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>46

aaacgtcagaggcgctacatcccgc25

<210>47

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>47

gattgagagattatatgtcgtgaga25

<210>48

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>48

aaactctcacgacatataatctctc25

<210>49

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>49

gattgtggatccgaggatagtgaac25

<210>50

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>50

aaacgttcactatcctcggatccac25

<210>51

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>51

gattgcgtaaaccctgtgtatcttg25

<210>52

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>52

aaaccaagatacacagggtttacgc25

<210>53

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>53

gattgtctcctgcgctaagggacca25

<210>54

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>54

aaactggtcccttagcgcaggagac25

<210>55

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>55

gattgagaagtatgggaggttgaag25

<210>56

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>56

aaaccttcaacctcccatacttctc25

<210>57

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>57

gattcgaggagaaatctgtaggcgg25

<210>58

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>58

aaacccgcctacagatttctcctcg25

<210>59

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>59

gattcgttcattcgctcgaataata25

<210>60

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>60

aaactattattcgagcgaatgaacg25

<210>61

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>61

gattgtgtgatccatcaagtcccaa25

<210>62

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>62

aaacttgggacttgatggatcacac25

<210>63

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>63

gattggtatagagaaccggacaacg25

<210>64

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>64

aaaccgttgtccggttctctatacc25

<210>65

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>65

gattggtactatgtgatcgtgaggt25

<210>66

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>66

aaacacctcacgatcacatagtacc25

<210>67

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>67

gattgaattcatagacgttcgctct25

<210>68

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>68

aaacagagcgaacgtctatgaattc25

<210>69

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>69

gattgaggagattatggacggttac25

<210>70

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>70

aaacgtaaccgtccataatctcctc25

<210>71

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>71

gattcgactgaactccacgaataca25

<210>72

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>72

aaactgtattcgtggagttcagtcg25

<210>73

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>73

gattggaacgatgagacacgtaaca25

<210>74

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>74

aaactgttacgtgtctcatcgttcc25

<210>75

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>75

gattgtcaacaggtagaagaacagt25

<210>76

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>76

aaacactgttcttctacctgttgac25

<210>77

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>77

gattgacgaagtttaacgtcgatta25

<210>78

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>78

aaactaatcgacgttaaacttcgtc25

<210>79

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>79

gattgcgatgaaggaaattcttgag25

<210>80

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>80

aaacctcaagaatttccttcatcgc25

<210>81

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>81

gattggaccccggtcatagagagaa25

<210>82

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>82

aaacttctctctatgaccggggtcc25

<210>83

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>83

gattcgtttttcaaagagaagaaga25

<210>84

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>84

aaactcttcttctctttgaaaaacg25

<210>85

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>85

gattgggtttgtaggtagagatcga25

<210>86

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>86

aaactcgatctctacctacaaaccc25

<210>87

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>87

gattgtgtcctgaagtgagaccaac25

<210>88

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>88

aaacgttggtctcacttcaggacac25

<210>89

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>89

gattgcgtactggattcgagttacc25

<210>90

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>90

aaacggtaactcgaatccagtacgc25

<210>91

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>91

gattggcgatagaaacggcgcgtga25

<210>92

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>92

aaactcacgcgccgtttctatcgcc25

<210>93

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>93

gattgtatctccattgtctggggcg25

<210>94

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>94

aaaccgccccagacaatggagatac25

<210>95

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>95

gattgtgtactctcaaccgttccca25

<210>96

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>96

aaactgggaacggttgagagtacac25

<210>97

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>97

gattggggaagttaacgctacgcgt25

<210>98

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>98

aaacacgcgtagcgttaacttcccc25

<210>99

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>99

gattgttcgccgcgcggtccaagag25

<210>100

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>100

aaacctcttggaccgcgcggcgaac25

<210>101

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>101

gattgttcggggcgaaactcgaagg25

<210>102

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>102

aaacccttcgagtttcgccccgaac25

<210>103

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>103

gattgcgccctgacgaacccagaaa25

<210>104

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>104

aaactttctgggttcgtcagggcgc25

<210>105

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>105

gattgtaaattacaacatctctctg25

<210>106

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>106

aaaccagagagatgttgtaatttac25

<210>107

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>107

gattgagtgttattcctcgtcaggg25

<210>108

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>108

aaacccctgacgaggaataacactc25

<210>109

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>109

gattgttctcctataccggcgccct25

<210>110

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>110

aaacagggcgccggtataggagaac25

<210>111

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>111

gattcgattgaacttctctgagtga25

<210>112

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>112

aaactcactcagagaagttcaatcg25

<210>113

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>113

gattgacatgttagcgccaacacgt25

<210>114

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>114

aaacacgtgttggcgctaacatgtc25

<210>115

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>115

gattgaaaccgtcgatggaatcccg25

<210>116

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>116

aaaccgggattccatcgacggtttc25

<210>117

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>117

gattgatctcagaggtcctacgcgt25

<210>118

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>118

aaacacgcgtaggacctctgagatc25

<210>119

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>119

gattgtgtgggtggtgggtcatccg25

<210>120

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>120

aaaccggatgacccaccacccacac25

<210>121

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>121

gattgcgctcagatgagaacagacc25

<210>122

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>122

aaacggtctgttctcatctgagcgc25

<210>123

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>123

gattggatctagttacctcaacaat25

<210>124

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>124

aaacattgttgaggtaactagatcc25

<210>125

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>125

gattcgcttctcgttctgtctctgt25

<210>126

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>126

aaacacagagacagaacgagaagcg25

<210>127

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>127

gattgaaccgtcggaccagaccgat25

<210>128

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>128

aaacatcggtctggtccgacggttc25

<210>129

<211>28

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>129

gattgtcgattcgtgaacttctcagagg28

<210>130

<211>28

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>130

aaaccctctgagaagttcacgaatcgac28

<210>131

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>131

gattgatgatcgttgaaaacgaagg25

<210>132

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>132

aaacccttcgttttcaacgatcatc25

<210>133

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>133

gattgagaacaatcaaccaagacaa25

<210>134

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>134

aaacttgtcttggttgattgttctc25

<210>135

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>135

gattgaacagtttccaaatcacctc25

<210>136

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>136

aaacgaggtgatttggaaactgttc25

<210>137

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>137

gattgggaatgtgaagttttctccg25

<210>138

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>138

aaaccggagaaaacttcacattccc25

<210>139

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>139

gattcgagatgacgatattctacgg25

<210>140

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>140

aaacccgtagaatatcgtcatctcg25

<210>141

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>141

gattgaccaagcgtgagatctccaa25

<210>142

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>142

aaacttggagatctcacgcttggtc25

<210>143

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>143

gattgaaagtcgcaaatgaactctg25

<210>144

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>144

aaaccagagttcatttgcgactttc25

<210>145

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>145

gattgaaaatgaccacgttaacgca25

<210>146

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>146

aaactgcgttaacgtggtcattttc25

<210>147

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>147

gattgtctccgaagtagagaaatgg25

<210>148

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>148

aaacccatttctctacttcggagac25

<210>149

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>149

gattgtccatgaagagatctttcga25

<210>150

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>150

aaactcgaaagatctcttcatggac25

<210>151

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>151

gattgatgaacgacgaacttcttgg25

<210>152

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>152

aaacccaagaagttcgtcgttcatc25

<210>153

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>153

gattgacaactgtcaactccatctg25

<210>154

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>154

aaaccagatggagttgacagttgtc25

<210>155

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>155

aaacctgttcgtgatttaccaattc25

<210>156

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>156

aaacctgttcgtgatttaccaattc25

<210>157

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>157

gattgtacccgagttttgaaccaac25

<210>158

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>158

aaacgttggttcaaaactcgggtac25

<210>159

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>159

gattcgtttaagtttgaggtaacgg25

<210>160

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>160

aaacccgttacctcaaacttaaacg25

<210>161

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>161

gattcgaaatgacaatcttctacag25

<210>162

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>162

aaacctgtagaagattgtcatttcg25

<210>163

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>163

gattggtatctacgacgaatatcga25

<210>164

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>164

aaactcgatattcgtcgtagatacc25

<210>165

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>165

gattggagtcggaagaatggaaatg25

<210>166

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>166

aaaccatttccattcttccgactcc25

<210>167

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>167

gattgacgttgaccatattctacat25

<210>168

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>168

aaacatgtagaatatggtcaacgtc25

<210>169

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>169

gattgacacgtagcgcataccaaca25

<210>170

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>170

aaactgttggtatgcgctacgtgtc25

<210>171

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>171

gattgtcattcttaaccgctacgtc25

<210>172

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>172

aaacgacgtagcggttaagaatgac25

<210>173

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>173

gattcgtaccccgggatatgaaata25

<210>174

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>174

aaactatttcatatcccggggtacg25

<210>175

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>175

gattggaacgttacatggacggaaa25

<210>176

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>176

aaactttccgtccatgtaacgttcc25

<210>177

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>177

gattcgatgtaacgttctttcagac25

<210>178

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>178

aaacgtctgaaagaacgttacatcg25

<210>179

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>179

gattgacgacggagtccgaattttc25

<210>180

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>180

aaacgaaaattcggactccgtcgtc25

<210>181

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>181

gattgcgtcctccttcgtgtttggt25

<210>182

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>182

aaacaccaaacacgaaggaggacgc25

<210>183

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>183

gattgcgtagtcgtactagtggacg25

<210>184

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>184

aaaccgtccactagtacgactacgc25

<210>185

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>185

gattcgtcaatccaagtcatttctt25

<210>186

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>186

aaacaagaaatgacttggattgacg25

<210>187

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>187

gattgtgtggattcagaaacccggt25

<210>188

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>188

aaacaccgggtttctgaatccacac25

<210>189

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>189

gattgatgtggattcagaaacccgg25

<210>190

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>190

aaacccgggtttctgaatccacatc25

<210>191

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>191

gattgtcttcgccaacagttggggt25

<210>192

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>192

aaacaccccaactgttggcgaagac25

<210>193

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>193

gattcgacaaatggggaaccatcaa25

<210>194

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>194

aaacttgatggttccccatttgtcg25

<210>195

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>195

gattcgttcatcaggactacaacat25

<210>196

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>196

aaacatgttgtagtcctgatgaacg25

<210>197

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>197

gattggtaagcgtccaaatccttgt25

<210>198

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>198

aaacacaaggatttggacgcttacc25

<210>199

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>199

gattggaggtgttaacaagagatcg25

<210>200

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>200

aaaccgatctcttgttaacacctcc25

<210>201

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>201

gattgtgtacccattgtcacccaca25

<210>202

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>202

aaactgtgggtgacaatgggtacac25

<210>203

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>203

gattgactcggtaagtgactagttc25

<210>204

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>204

aaacgaactagtcacttaccgagtc25

<210>205

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>205

gattcgtcggtaagtgactagttca25

<210>206

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>206

aaactgaactagtcacttaccgacg25

<210>207

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>207

gattggaatggagggacagaatatt25

<210>208

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>208

aaacaatattctgtccctccattcc25

<210>209

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>209

gattcgtcgatatgttactacgtca25

<210>210

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>210

aaactgacgtagtaacatatcgacg25

<210>211

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>211

gattgaatacggcggacgttctcgg25

<210>212

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>212

aaacccgagaacgtccgccgtattc25

<210>213

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>213

gattgttggttcgaggaagttcggg25

<210>214

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>214

aaaccccgaacttcctcgaaccaac25

<210>215

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>215

gattggtagtgtctcgtcgtgtacg25

<210>216

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>216

aaaccgtacacgacgagacactacc25

<210>217

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>217

gattgggaatcactctttcgaacta25

<210>218

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>218

aaactagttcgaaagagtgattccc25

<210>219

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>219

gattgacacggttaatcttatcgac25

<210>220

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>220

aaacgtcgataagattaaccgtgtc25

<210>221

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>221

gattggatccgtcgtcgttttgcgc25

<210>222

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>222

aaacgcgcaaaacgacgacggatcc25

<210>223

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>223

gattgacgtgtttctcactgtgaac25

<210>224

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>224

aaacgttcacagtgagaaacacgtc25

<210>225

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>225

gattgcgaatccccgtcaccgcgcg25

<210>226

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>226

aaaccgcgcggtgacggggattcgc25

<210>227

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>227

gattcggtcttcaaaccctcattga25

<210>228

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>228

aaactcaatgagggtttgaagaccg25

<210>229

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>229

gattcgatcatagaaacgttgtcat25

<210>230

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>230

aaacatgacaacgtttctatgatcg25

<210>231

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>231

gattgcgttacccaccatgaatttg25

<210>232

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>232

aaaccaaattcatggtgggtaacgc25

<210>233

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>233

gattcgttcccactcggaacggcgt25

<210>234

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>234

aaacacgccgttccgagtgggaacg25

<210>235

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>235

gattcggacgccctttgtgttgagg25

<210>236

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>236

aaaccctcaacacaaagggcgtccg25

<210>237

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>237

gattgggatcgactgttcgagtgaa25

<210>238

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>238

aaacttcactcgaacagtcgatccc25

<210>239

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>239

gattgatccccacgatcttcagaga25

<210>240

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>240

aaactctctgaagatcgtggggatc25

<210>241

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>241

gattgacgtactcctgatgaggtcg25

<210>242

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>242

aaaccgacctcatcaggagtacgtc25

<210>243

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>243

gattggtgactcggatataactaaa25

<210>244

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>244

aaactttagttatatccgagtcacc25

<210>245

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>245

gattgcgatttaacgaggggtctaa25

<210>246

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>246

aaacttagacccctcgttaaatcgc25

<210>247

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>247

gattgagaagcgagagtaaagacag25

<210>248

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>248

aaacctgtctttactctcgcttctc25

<210>249

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>249

gattgaactcgttacaactaagaca25

<210>250

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>250

aaactgtcttagttgtaacgagttc25

<210>251

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>251

gattgttacaactaagacaagggga25

<210>252

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>252

aaactccccttgtcttagttgtaac25

<210>253

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>253

gattcggtccattacgtcgaaaact25

<210>254

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>254

aaacagttttcgacgtaatggaccg25

<210>255

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>255

gattgaaatcgtaaattaattattc25

<210>256

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>256

aaacgaataattaatttacgatttc25

<210>257

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>257

gattgtgcgaaattacggatcttac25

<210>258

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>258

aaacgtaagatccgtaatttcgcac25

<210>259

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>259

gattgcgatgcgattattgtacgca25

<210>260

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>260

aaactgcgtacaataatcgcatcgc25

<210>261

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>261

gattcgggtaaaggagatgaacaag25

<210>262

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>262

aaaccttgttcatctcctttacccg25

<210>263

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>263

gattggcgcaccctccgggaatttt25

<210>264

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>264

aaacaaaattcccggagggtgcgcc25

<210>265

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>265

gattcgaccgaaaattcccggaggg25

<210>266

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>266

aaacccctccgggaattttcggtcg25

<210>267

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>267

gattgtctcccgtagaacgcatcgt25

<210>268

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>268

aaacacgatgcgttctacgggagac25

<210>269

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>269

gattgtaccaccgaaaatccccgga25

<210>270

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>270

aaactccggggattttcggtggtac25

<210>271

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>271

gattcgccggagggtgcgcggtaat25

<210>272

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>272

aaacattaccgcgcaccctccggcg25

<210>273

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>273

gattcgttacgtgacaaatacgcgc25

<210>274

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>274

aaacgcgcgtatttgtcacgtaacg25

<210>275

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>275

gattgtcgagcgataacaatacgta25

<210>276

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>276

aaactacgtattgttatcgctcgac25

<210>277

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>277

gattgtagggttactcgtcctacaa25

<210>278

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>278

aaacttgtaggacgagtaaccctac25

<210>279

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>279

gattggaatcggtttaaggatttta25

<210>280

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>280

aaactaaaatccttaaaccgattcc25

<210>281

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>281

gattgatggtcccgtcttcacattc25

<210>282

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>282

aaacgaatgtgaagacgggaccatc25

<210>283

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>283

gattgttgatgtggtcgtttctaag25

<210>284

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>284

aaaccttagaaacgaccacatcaac25

<210>285

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>285

gattgacgaacgaacatcttgcgga25

<210>286

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>286

aaactccgcaagatgttcgttcgtc25

<210>287

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>287

gattgttacacctccgctcgctcct25

<210>288

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>288

aaacaggagcgagcggaggtgtaac25

<210>289

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>289

gattgtattccgttgtttaagtggg25

<210>290

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>290

aaaccccacttaaacaacggaatac25

<210>291

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>291

gattgacccacttaaacaacggaat25

<210>292

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>292

aaacattccgttgtttaagtgggtc25

<210>293

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>293

gattgagatcattcctcggtcactg25

<210>294

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>294

aaaccagtgaccgaggaatgatctc25

<210>295

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>295

gattgtaatgatgacgttgagaacg25

<210>296

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>296

aaaccgttctcaacgtcatcattac25

<210>297

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>297

gattgaaatggaggttaatcgacaa25

<210>298

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>298

aaacttgtcgattaacctccatttc25

<210>299

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>299

gattgaccacgcatagaagttggtc25

<210>300

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>300

aaacgaccaacttctatgcgtggtc25

<210>301

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>301

gattgttcgcgacttggttataata25

<210>302

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>302

aaactattataaccaagtcgcgaac25

<210>303

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>303

gattgtatcccatttccccgaatat25

<210>304

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>304

aaacatattcggggaaatgggatac25

<210>305

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>305

gattgtctatgcgtggtgaaacgat25

<210>306

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>306

aaacatcgtttcaccacgcatagac25

<210>307

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>307

gattgagcggtttggtcatcgtgtc25

<210>308

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>308

aaacgacacgatgaccaaaccgctc25

<210>309

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>309

gattgcgtcgtgtacctcaacgtcg25

<210>310

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>310

aaaccgacgttgaggtacacgacgc25

<210>311

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>311

gattgttacatcctcgcaatatccg25

<210>312

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>312

aaaccggatattgcgaggatgtaac25

<210>313

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>313

gattgtccgaggatcaccacccaat25

<210>314

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>314

aaacattgggtggtgatcctcggac25

<210>315

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>315

gattcgacgtcgaggtcaaccatcg25

<210>316

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>316

aaaccgatggttgacctcgacgtcg25

<210>317

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>317

gattgtactgatgattctcgtcaat25

<210>318

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>318

aaacattgacgagaatcatcagtac25

<210>319

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>319

gattgtgtcgagggaacgttaatcg25

<210>320

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>320

aaaccgattaacgttccctcgacac25

<210>321

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>321

gattgagcgtcgtcaatgggtcgaa25

<210>322

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>322

aaacttcgacccattgacgacgctc25

<210>323

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>323

gattgtactgatgagcgtcgtcaat25

<210>324

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>324

aaacattgacgacgctcatcagtac25

<210>325

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>325

gattcgtcccattgtatctcaccaa25

<210>326

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>326

aaacttggtgagatacaatgggacg25

<210>327

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>327

gattggggtttgagagattccgcgg25

<210>328

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>328

aaacccgcggaatctctcaaacccc25

<210>329

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>329

gattgtccaaagatgacgtttcccg25

<210>330

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>330

aaaccgggaaacgtcatctttggac25

<210>331

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>331

gattgcgcgcgggaaacgtcatctt25

<210>332

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>332

aaacaagatgacgtttcccgcgcgc25

<210>333

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>333

gattgtgaacgggttcagaggatta25

<210>334

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>334

aaactaatcctctgaacccgttcac25

<210>335

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>335

gattggaacgggttcagaggattac25

<210>336

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>336

aaacgtaatcctctgaacccgttcc25

<210>337

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>337

gattggcgatcggagcgaatgagaa25

<210>338

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>338

aaacttctcattcgctccgatcgcc25

<210>339

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>339

gattgggcgatcggagcgaatgaga25

<210>340

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>340

aaactctcattcgctccgatcgccc25

<210>341

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>341

gattgatcgagcgttctcagatctc25

<210>342

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>342

aaacgagatctgagaacgctcgatc25

<210>343

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>343

gattgttccgcgcggcgaaattctt25

<210>344

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>344

aaacaagaatttcgccgcgcggaac25

<210>345

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>345

gattcgtggacaaggacgaggtcgg25

<210>346

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>346

aaacccgacctcgtccttgtccacg25

<210>347

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>347

gattgaatccccgacgctagattca25

<210>348

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>348

aaactgaatctagcgtcggggattc25

<210>349

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>349

gattcgataatcaaatccctccaga25

<210>350

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>350

aaactctggagggatttgattatcg25

<210>351

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>351

gattgacgtctatcgacgaaatttt25

<210>352

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>352

aaacaaaatttcgtcgatagacgtc25

<210>353

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>353

gattgcggttggacacggtccatat25

<210>354

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>354

aaacatatggaccgtgtccaaccgc25

<210>355

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>355

gattcgttcaaacatgagacgcggt25

<210>356

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>356

aaacaccgcgtctcatgtttgaacg25

<210>357

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>357

gattgacaacacgattcgttttccc25

<210>358

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>358

aaacgggaaaacgaatcgtgttgtc25

<210>359

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>359

gattcgtttctgacgaaccatgaga25

<210>360

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>360

aaactctcatggttcgtcagaaacg25

<210>361

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>361

gattggaggtcaagagaccgtttaa25

<210>362

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>362

aaacttaaacggtctcttgacctcc25

<210>363

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>363

gattcgtttgcgattagaaaccggt25

<210>364

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>364

aaacaccggtttctaatcgcaaacg25

<210>365

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>365

gattgagtttccgtccgcgttgaga25

<210>366

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>366

aaactctcaacgcggacggaaactc25

<210>367

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>367

gattgacattcaggtcatcttatgt25

<210>368

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>368

aaacacataagatgacctgaatgtc25

<210>369

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>369

gattgactatggattctacgtcacc25

<210>370

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>370

aaacggtgacgtagaatccatagtc25

<210>371

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>371

gattggggttggagttctatcctct25

<210>372

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>372

aaacagaggatagaactccaacccc25

<210>373

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>373

gattggtttgtcctaacccgtgggt25

<210>374

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>374

aaacacccacgggttaggacaaacc25

<210>375

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>375

gattgtgatcgacggttgagtccgt25

<210>376

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>376

aaacacggactcaaccgtcgatcac25

<210>377

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>377

gattgttgagtccgtcgcgtgattc25

<210>378

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>378

aaacgaatcacgcgacggactcaac25

<210>379

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>379

gattcgaaaaccagaatcggcgtct25

<210>380

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>380

aaacagacgccgattctggttttcg25

<210>381

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>381

gattgtacaaatgtggaaaacgcgg25

<210>382

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>382

aaacccgcgttttccacatttgtac25

<210>383

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>383

gattgtaaaggaacaagatccgccg25

<210>384

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>384

aaaccggcggatcttgttcctttac25

<210>385

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>385

gattgttaaagtggatccattgaac25

<210>386

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>386

aaacgttcaatggatccactttaac25

<210>387

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>387

gattgcgggtgattgtcgccggaag25

<210>388

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>388

aaaccttccggcgacaatcacccgc25

<210>389

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>389

gattgtcacctccaagtttcactac25

<210>390

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>390

aaacgtagtgaaacttggaggtgac25

<210>391

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>391

gattggtcgccggaagggcgaaaca25

<210>392

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>392

aaactgtttcgcccttccggcgacc25

<210>393

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>393

gattcgtcgagacggcgaccttcgt25

<210>394

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>394

aaacacgaaggtcgccgtctcgacg25

<210>395

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>395

gattgggacgtgtcagagggacgcg25

<210>396

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>396

aaaccgcgtccctctgacacgtccc25

<210>397

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>397

gattgacgcgcgcgttcagcgactg25

<210>398

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>398

aaaccagtcgctgaacgcgcgcgtc25

<210>399

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>399

gattgagtttaggaacgcgcgtgtc25

<210>400

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>400

aaacgacacgcgcgttcctaaactc25

<210>401

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>401

gattgggaacgcggtggttcacgta25

<210>402

<211>25

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>402

aaactacgtgaaccaccgcgttccc25

<210>403

<211>2048

<212>dna

<213>人工序列(crispr/cas9)

<400>403

gatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcg60

atgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgc120

atgacgttatttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatac180

gcgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatct240

atgttactagatccctagggaagttcctattccgaagttcctattctctgaaaagtatag300

gaacttctttgcgtattgggcgctcttggcctttttggccaccggtcgtacggttaaaac360

caccccagtacattaaaaacgtccgcaatgtgttattaagttgtctaagcgtcaatttgt420

ttacaccacaatatatcctgccaccagccagccaacagctccccgaccggcagctcggca480

caaaatcaccactcgatacaggcagcccatcagtccactagacgctcaccgggctggttg540

ccctcgccgctgggctggcggccgtctatggccctgcaaacgcgccagaaacgccgtcga600

agccgtgtgcgagacaccgcagccgccggcgttgtggatacctcgcggaaaacttggccc660

tcactgacagatgaggggcggacgttgacacttgaggggccgactcacccggcgcggcgt720

tgacagatgaggggcaggctcgatttcggccggcgacgtggagctggccagcctcgcaaa780

tcggcgaaaacgcctgattttacgcgagtttcccacagatgatgtggacaagcctgggga840

taagtgccctgcggtattgacacttgaggggcgcgactactgacagatgaggggcgcgat900

ccttgacacttgaggggcagagtgctgacagatgaggggcgcacctattgacatttgagg960

ggctgtccacaggcagaaaatccagcatttgcaagggtttccgcccgtttttcggccacc1020

gctaacctgtcttttaacctgcttttaaaccaatatttataaaccttgtttttaaccagg1080

gctgcgccctgtgcgcgtgaccgcgcacgccgaaggggggtgcccccccttctcgaaccc1140

tcccggcccgctctcgcgttggcagcatcacccataattgtggtttcaaaatcggctccg1200

tcgatactatgttatacgccaactttgaaaacaactttgaaaaagctgttttctggtatt1260

taaggttttagaatgcaaggaacagtgaattggagttcgtcttgttataattagcttctt1320

ggggtatctttaaatactgtagaaaagaggaaggaaataataaatggctaaaatgagaat1380

atcaccggaattgaaaaaactgatcgaaaaataccgctgcgtaaaagatacggaaggaat1440

gtctcctgctaaggtatataagctggtgggagaaaatgaaaacctatatttaaaaatgac1500

ggacagccggtataaagggaccacctatgatgtggaacgggaaaaggacatgatgctatg1560

gctggaaggaaagctgcctgttccaaaggtcctgcactttgaacggcatgatggctggag1620

caatctgctcatgagtgaggccgatggcgtcctttgctcggaagagtatgaagatgaaca1680

aagccctgaaaagattatcgagctgtatgcggagtgcatcaggctctttcactccatcga1740

catatcggattgtccctatacgaatagcttagacagccgcttagccgaattggattactt1800

actgaataacgatctggccgatgtggattgcgaaaactgggaagaagacactccatttaa1860

agatccgcgcgagctgtatgattttttaaagacggaaaagcccgaagaggaacttgtctt1920

ttcccacggcgacctgggagacagcaacatctttgtgaaagatggcaaagtaagtggctt1980

tattgatcttgggagaagcggcagggcggacaagtggtatgacattgccttctgcgtccg2040

gtcgatca2048

<210>404

<211>17

<212>dna

<213>人工序列(无)

<400>404

caggaaacagctatgac17