水稻耐高温性状的连锁KASP分子标记及其应用的制作方法

文档序号:20200781发布日期:2020-03-27 20:37阅读:来源:国知局

技术特征:

1.水稻耐高温性状的连锁kasp分子标记,所述连锁kasp分子标记为7238、6400、7334;

所述分子标记7238为qtl区间qssr7-1的连锁标记,所述分子标记6400、7334为qtl区间qssr11-1的连锁标记;

所述分子标记7238为第7染色体29287238位碱基上的变异c/t,所述分子标记6400为第11染色体26796400位碱基上的变异a/c,所述分子标记7334为第11染色体26797334位碱基上的变异a/g。

2.用于扩增如权利要求1所述连锁kasp分子标记7238、6400、7334的引物,其特征在于,所述6400的连锁kasp分子标记的引物序列如seqidno.1、seqidno.2和seqidno.3所示;

所述7334的连锁kasp分子标记的引物序列如seqidno.4、seqidno.5和seqidno.6所示;

所述7238的连锁kasp分子标记的引物序列如seqidno.7、seqidno.8和seqidno.9所示。

3.一种用于改良水稻耐高温性的试剂盒,包含如权利要求2所述连锁kasp分子标记7238、6400、7334的引物。

4.如权利要求1所述连锁kasp分子标记、如权利要求2所述连锁kasp分子标记引物或如权利要求3所述试剂盒在筛选耐高温水稻品种中的应用。

5.如权利要求1所述连锁kasp分子标记、如权利要求2所述连锁kasp分子标记引物或如权利要求3所述试剂盒在水稻耐高温性改良育种中的应用。

6.利用如权利要求1所述分子标记的引物进行基因分型的方法,包括如下步骤:

以植物基因组dna为模板,采用如权利要求2所述分子标记7238、6400和/或7334的引物进行pcr(聚合酶链式反应),待反应完成后,将pcr扩增的产物借助荧光信号采集仪器,获取对应的产物荧光信号值,最终完成基因分型;

所述反应的体系包括20~30ng/l、dna2μl,所述分子标记7238、6400、7334的引物各0.28μl和2×kaspmastermixture;

所述反应的条件为:94℃15min;94℃20sec,63℃~55℃1min,每个循环降0.8℃,共10个循环;94℃20sec,56℃1min,共26个循环;

所述荧光信号值的读取条件为16℃,20sec;

所述的荧光信号采集仪器包括但不限于荧光定量pcr仪。

7.基于如权利要求1所述分子标记鉴定水稻品种耐高温qtlqssr7-1、qssr11-1基因型的方法,包括以下步骤:

(1)提取待鉴定水稻品种的dna样本;

(2)以利用如权利要求1所述分子标记进行kasp检测;

(3)根据荧光信号结果,判断待检测水稻品种的qssr7-1、qssr11-1基因型:若只检测到6-羧基荧光素的荧光信号,则待测水稻品种为耐高温基因型;若只检测到六氯-6-甲基荧光素的荧光信号,则待测水稻品种为高温敏感基因型;若同时检测到两种荧光信号,则待测水稻品种为杂合基因型。

8.基于如权利要求1所述分子标记改良水稻品种耐高温性的方法,包括以下步骤:

1)以对高温敏感的待改良品种为受体亲本,以耐高温的品种为供体亲本;

2)将受体亲本与供体亲本杂交,获得杂交种f1;

3)将受体亲本作为目标,与步骤2)获得的杂交种f1单株做杂交,获得回交种子bc1f1;

4)在步骤3)获得的bc1f1植株苗期,提取dna样品,利用如权利要求1所述分子标记7238、6400和/或7334进行分子标记辅助选择,筛选含有耐高温等位基因型的植株,将其作为父本继续与受体亲本进行杂交,获得bc2f1种子;

5)在步骤4)获得的bc2f1植株苗期,提取dna样品,重复步骤4)获得bc3f1种子;

6)将步骤5)获得的bc3f1杂交单株种植成行,自交,收获杂交种bc3f2;

7)将步骤6)获得的bc3f2种植成500株的分离群体,在苗期提取dna,利用所述分子标记筛选,获得两个耐高温qtl区间纯合抗性等位基因型的单株;

8)将步骤7)获得的单株,连续自交至农艺性状稳定,获得符合育种目标的品系。

9.基于如权利要求1所述分子标记改良水稻品种耐高温性的方法,包括以下步骤:

(1)以对高温敏感的的待改良品种为受体亲本,以耐高温的品种为供体亲本;

(2)将受体亲本与供体亲本杂交,获得杂交种f1;

(3)种植步骤(2)获得的f1种子得到f2群体,在植株苗期提取每个单株dna样品,利用如权利要求1所述分子标记7238、6400和/或7334进行分子标记辅助选择,筛选含有两个耐高温qtl区间等位基因型的植株;

(4)将步骤(3)获得的植株种植成行,自交,筛选符合育种目标农艺性状的株系,连续自交至农艺性状稳定,获得符合育种目标的品系。

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