专利名称:一种从新鲜虎杖中提取纯化白藜芦醇和大黄素的方法
技术领域：
本发明涉及一种制药行业天然植物有效成分的提取纯化方法，具体涉及一种从新鲜虎杖中提取纯化白藜芦醇和大黄素的方法。
背景技术：
白藜芦醇(Resveratrol,简称Res,化学名称为3，4’，5 —三轻基二苯乙烯)具有抗癌、抗衰老、抗血小板聚集等重要的生理活性。主要存在于葡萄、虎杖、藜芦等植物中。研究发现，虎杖中的白藜芦醇及其白藜芦醇苷的含量最高。
目前用虎杖苷制备白藜芦醇的方法，多是酸水解或生物酶解。酸水解反应剧烈，工艺不易控制，现已被生物酶解所代替，生物酶解过程缓和，收率高，成本低；但生物酶解多半 采用虎杖打碎加湿加入生物酶，放置酶解，此过程周期长。另外还有醇提酶解，回收试剂造成能源浪费，成本较高。高纯度的白藜芦醇制备也多是用有机试剂萃取和柱层析方法，如，中国专利(授权公告号CN1321961C)名称为“一种从虎杖中提取纯化白藜芦醇的新方法”，该方法将虎杖提取物中白藜芦醇甙通过酸催化水解反应富集出来，而后将富集产物以一定配比上预先处理好的大孔吸附树脂柱进行分离纯化，用水和乙醇洗脱，以薄层色谱法跟踪检测，进而实现从虎杖中提取白藜芦醇。如中国专利(授权号CN1269831C)名称为“虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法”，该方法应用聚酞胺层析法和活性炭脱色等工序；如中国专利(公开号CN101760483A)名称为“从新鲜虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法”，该方法以新鲜虎杖为原料，粉碎后用饱和石灰水溶液加热浸泡提取，提取液调节PH，超滤膜除大分子杂质、纳滤膜浓缩，浓缩液加入生物酶，保温酶解9-12小时，所得粗品乙醇溶解，过氧化铝树脂除杂，加水放置结晶得到白藜芦醇，这些方法造成回收试剂困难、周期长、收率低、产业化程度低、生产存在安全隐患等问题。长期以来，本领域技术人员都在关注从虎杖提取白藜芦醇的新方法。
发明内容
针对上述现有技术存在的缺陷或不足，本发明的目的在于提供一种从新鲜虎杖中提取纯化白藜芦醇和大黄素的方法，该方法操作简单，生产成本低，易于实现工业化生产。
为了实现上述任务，本发明采用如下的技术解决方案予以实现
一种从新鲜虎杖中提取纯化白藜芦醇和大黄素的方法，其特征在于，按如下工艺步骤进行
(I)提取将新鲜虎杖粉碎，以质量浓度为5% 10%的氢氧化钙拌料，然后加入虎杖重量8-10倍的水，在60°C 65°C条件下保温2小时，过滤，得提取液，然后再加入虎杖重量3-4倍的水，以同样的温度条件保温lh，抽滤得二次提取液，合并两次提取液，备用；
(2)纯化将所得提取液调pH值至9 10，上大孔吸附树脂进行吸附，吸附饱和后水洗至洗脱液澄清，洗后的柱体填料先用质量浓度为O. 3-0. 5%的氢氧化钠洗脱，收集洗脱液，得到洗脱液A ;再用含有体积浓度为60%的无水乙醇和质量浓度为1% 2%氢氧化钠的洗脱液洗脱，并收集洗脱液，得到洗脱液B ;
(3)酶解将所得的洗脱液A倒入反应釜中，调pH至5，加热到50°C保温，然后加入5-7倍量虎杖苷的虎杖专用酶，酶解6-8h ;酶解物冷却到室温，离心，过滤干燥得到白藜芦醇粗品；
(4)将洗脱液B倒入反应釜中，用硫酸调P H值至1-2后离心，低温干燥得到大黄素粗品；
(5)精制将所收集到的白藜芦醇粗品和大黄素粗品分别用体积浓度为95%的无水乙醇溶解，经活性炭脱色、浓缩、反复重结晶即得纯度为98%的白藜芦醇和大黄素。
本发明的优点在于
I、以氢氧化钙水溶液为提取溶媒，既除去了大量的鞣制和酚酸类酸性物质，又提 取时间短，周期短，成本低廉、操作简单、污染少；
2、应用大孔吸附技术分离纯化虎杖甙，分离效果理想，无需用有机溶剂，工艺简单，成本低廉。树脂可重复再生利用、成本低、设备简单、投资少、工业化前景较好；
3、本发明用酶代替了酸，使虎杖苷转变为白藜芦醇，不但减少了对环境的污染，而且操作简单、转化率高、大大提高了资源的利用率；
4、利用新鲜虎杖，可以减少虎杖在晾晒过程中虎杖苷的损失，提高产品收率；
5、利用大孔吸附树脂可以除去大分子物质和大部分杂质，减少了酶的用量，提高了酶解效率和产品含量。
具体实施方式
以下结合发明人给出的具体实例对本发明作进一步的详细说明。需要说明的是，以下的实施例是较佳的例子，本发明不限于这些实施例。
实施例I :
新鲜虎杖粉碎过60目筛，取50kg粉碎物(虎杖苷含量2. 4%，白藜芦醇含量O. 5%，大黄素含量O. 36%)，加入3kg质量浓度为5% 10%的氢氧化钙拌料，然后加入400L水加温至60°C，保温2小时，过滤，得提取液；再加入180L水，水温保持60°C，lh,抽滤得二次提取液，合并两次提取液备用。
用盐酸调节提取液的pH值至9，过滤后上大孔吸附树脂，进行吸附，吸附饱和后水洗，洗到水澄清后，洗后的柱体填料先用O. 3-0. 5%的氢氧化钠洗脱，收集洗脱液，得到洗脱液A ;而后用再用含有体积浓度为60%的无水乙醇和质量浓度为1% 2%氢氧化钠的洗脱液洗脱，(以下简称为60%碱醇洗脱液，即洗脱液中含有体积浓度为60%的无水乙醇和质量浓度为1% 2%氢氧化钠)洗脱，收集洗脱液，得到洗脱液B。
将所得的洗脱液A倒入反应釜中，调pH至5后加热到50°C保温，然后加入120g虎杖专用酶，酶解6-8h，冷却到室温，离心，过滤干燥得含量78%白藜芦醇粗品256g。
将洗脱液B用硫酸调pH值为1-2后离心，低温干燥得到82%大黄素粗品212g。
白藜芦醇粗品用体积浓度95%的无水乙醇回流饱和溶解，放置室温加入中性氧化铝柱吸附杂质，收集下柱液，加入质量浓度O. 5%的活性炭回流脱色Ih后过滤，滤液加入等体积的水，放置结晶，过滤晶体，低温干燥得含量为98%的白藜芦醇193g ；
大黄素粗品用体积浓度90%的无水乙醇回流饱和溶解，加入质量浓度O. 5%的活性炭脱色lh，过滤，滤液浓缩到一半后加入等体积的水，放置结晶，过滤晶体，低温干燥得含量为98%的大黄素150g。
实施例2
新鲜虎杖粉碎过60目筛，取IOOkg粉碎物(虎杖苷含量2. 3%,白藜芦醇含量O. 6%、大黄素含量O. 35%)，加入3kg质量浓度为5% 10%的氢氧化钙拌料，后加入800L水加温至600C，保温2小时，过滤，得提取液，再加入360L水以同样的温浸条件提取I小时，抽滤得二次提取液，合并两次提取液备用。
提取液用盐酸调节pH至9，过滤后上大孔吸附树脂进行吸附，吸附饱和后水洗，洗到水澄清后，先用质量浓度O. 3-0. 5%的氢氧化钠洗脱，收集洗脱液，得洗脱液A。再用含有体积浓度为60%的无水乙醇和质量浓度为1% 2%氢氧化钠的洗脱液洗脱，并收集洗脱液，得到洗脱液B ；
将所得的洗脱液A倒入反应釜中，调pH至5后加热到50度保温，然后加入虎杖专用酶230g，酶解6-8h，冷却到室温，过滤干燥得含量78%的白藜芦醇粗品516克；
将洗脱液B用硫酸调pH为1-2后离心，低温干燥得到85%大黄素粗品450g。
白藜芦醇粗品用体积浓度90%的无水乙醇回流饱和溶解，放置室温加入中性氧化铝柱吸附杂质，收集下柱液，加入质量浓度O. 5%的活性炭回流脱色Ih后过滤，滤液加入等体积的水，放置结晶，过滤晶体，低温干燥得含量为98%的白藜芦醇193g。
大黄素粗品用95%的乙醇回流饱和溶解，加入质量浓度O. 5%的活性炭脱色lh，过滤，滤液浓缩到一半后加入等体积的水，放置结晶，过滤晶体，低温干燥得含量为98%的大黄素320g。
权利要求
1.一种从新鲜虎杖中提取纯化白藜芦醇和大黄素的方法，其特征在于，按如下工艺步骤进行 新鲜虎杖粉碎过60目筛，取50kg粉碎物，加入3kg质量浓度为5% 10%的氢氧化钙拌料，然后加入400L水加温至60°C，保温2小时，过滤，得提取液；再加入180L水，水温保持60°C，lh，抽滤得二次提取液，合并两次提取液备用； 用盐酸调节提取液的PH值至9，过滤后上大孔吸附树脂，进行吸附，吸附饱和后水洗，洗到水澄清后，洗后的柱体填料先用O. 3-0. 5%的氢氧化钠洗脱，收集洗脱液，得到洗脱液A ;而后再用含有体积浓度为60%的乙醇溶液和质量浓度为1% 2%氢氧化钠的洗脱液洗脱，收集洗脱液，得到洗脱液B; 将所得的洗脱液A倒入反应釜中，调pH至5后加热到50°C保温，然后加入120g虎杖专用酶，酶解6-8h，冷却到室温，离心，过滤干燥得白藜芦醇粗品； 将洗脱液B用硫酸调pH值为1-2后离心，低温干燥得大黄素粗品； 白藜芦醇粗品用体积浓度95%的乙醇溶液回流饱和溶解，放置室温加入中性氧化铝柱吸附杂质，收集下柱液，加入质量浓度O. 5%的活性炭回流脱色Ih后过滤，滤液加入等体积的水，放置结晶，过滤晶体，低温干燥得白藜芦醇； 大黄素粗品用体积浓度90%的乙醇溶液回流饱和溶解，加入质量浓度O. 5%的活性炭脱色lh，过滤，滤液浓缩到一半后加入等体积的水，放置结晶，过滤晶体，低温干燥得大黄素。
2.一种从新鲜虎杖中提取纯化白藜芦醇和大黄素的方法，其特征在于，按如下工艺步骤进行 新鲜虎杖粉碎过60目筛，取IOOkg粉碎物，加入3kg质量浓度为5% 10%的氢氧化钙拌料，后加入800L水加温至60°C，保温2小时，过滤，得提取液，再加入360L水以同样的温浸条件提取I小时，抽滤得二次提取液，合并两次提取液备用； 提取液用盐酸调节PH至9，过滤后上大孔吸附树脂进行吸附，吸附饱和后水洗，洗到水澄清后，先用质量浓度O. 3-0. 5%的氢氧化钠洗脱，收集洗脱液，得洗脱液A ;再用含有体积浓度为60%的乙醇溶液和质量浓度为1% 2%氢氧化钠的洗脱液洗脱，并收集洗脱液，得到洗脱液B ； 将所得的洗脱液A倒入反应釜中，调pH至5后加热到50度保温，然后加入虎杖专用酶230g，酶解6-8h，冷却到室温，过滤干燥得白藜芦醇粗品； 将洗脱液B用硫酸调pH为1-2后离心，低温干燥得大黄素粗品； 白藜芦醇粗品用体积浓度90%的乙醇溶液回流饱和溶解，放置室温加入中性氧化铝柱吸附杂质，收集下柱液，加入质量浓度O. 5%的活性炭回流脱色Ih后过滤，滤液加入等体积的水，放置结晶，过滤晶体，低温干燥得白藜芦醇； 大黄素粗品用95%的乙醇溶液回流饱和溶解，加入质量浓度O. 5%的活性炭脱色lh，过滤，滤液浓缩到一半后加入等体积的水，放置结晶，过滤晶体，低温干燥得大黄素。
专利摘要
本发明公开了一种从新鲜虎杖中提取纯化白藜芦醇和大黄素的方法，该方法对粉碎后的新鲜虎杖进行浸提，调节提取液pH后用大孔吸附树脂柱进行富集，然后分别用氢氧化钠水和碱醇洗脱液进行洗脱，得洗脱液A和洗脱液B，调节洗脱液A的pH值，酶解，过滤，得到白藜芦醇粗品；调节洗脱液B的pH值，离心，低温干燥得到大黄素粗品；进而用乙醇溶解，经活性炭脱色、浓缩、反复重结晶即得纯度为98%的白藜芦醇和大黄素。该方法无需用有机溶剂，工艺简单，成本低廉。树脂可重复再生利用、成本低、设备简单、投资少、工业化前景较好，易于实现工业化生产。
文档编号C07C50/34GKCN102220387 B发布类型授权 专利申请号CN 201110090397
公开日2013年2月6日 申请日期2011年4月12日
发明者马毅刚 申请人:安康中科麦迪森天然药业有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (4), 非专利引用 (1),