r>[0016]鸡粪浸出液I份，NaHCO30.6份，人尿0.7份，Na2S130.02份，f/2微量元素溶液0.8份，f/2维生素溶液0.8份，过磷酸钙0.1份，土壤浸出液0.6份，海泥抽取液0.8份，MgS04.7Η200.2 份，Ca(NO3)20.3 份，CaCl2.2Η20 0.5 份，CH3COONa 0.05 份，CH3CH2COONa 0.1份，吲哚乙酸0.001份，煮沸冷却海水100份；装入三角烧瓶，放在摇床上摇匀15分钟，浓缩培养液制备完成；其中m微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液计)=ZnSO4.4H2023 毫克，MnCl2.4H20 178 毫克，CuSO4.5H20 10 毫克，FeC6H5O7.5H20 3.9 克，Na2MoO4.2H207.3毫克，CoCl2.6H20 12毫克，Na2EDTA 4.35克，蒸馏水1000毫升；f/2维生素溶液配方(按配制1000毫升溶液计):维生素B120.5毫克，维生素B110毫克，维生素H 0.5毫克，蒸馏水1000毫升。
[0017]步骤2小型角毛藻高效培养方法
[0018]取三个20升的带把的塑料纯净水桶(市场有售)，分别加入权利要求1所述的小型角毛藻浓缩培养液1000毫升，然后加入9000毫升煮沸冷却的普通海水，摇匀；选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的小型角毛藻藻种接种，接种密度4万个细胞/毫升藻液，轻轻摇匀3分钟；每个纯净水桶瓶口插入两根玻璃管，管的直径为8毫米，一根为充气管，另一根为排气管，第2个桶的充气管与第一个桶的排气管相连，第3个桶的充气管与第2个桶的排气管相连，这样充入的气体依次经过三个塑料桶，可得到3次利用；第一个桶的充气管上端连接空气压缩机，另一端插入到藻液底部，充入混合气体，气体成分=空气99% +纯CO20.5% + —氧化氮0.3% +氨气0.2%，每天24小时不间断充气，气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；将这3个塑料桶放入微藻培养室中培养，室内空调控温，日光灯管照明，以打开灯管的数量多少来控制光照强度，连续培养9天，前3天调节温度至25°C，光照强度60001UX，光暗周期=6h/L+6h/D，即提供间歇光，6小时连续光照，6小时连续黑暗，如此循环；第4-6天，调节温度至26°C，光照强度90001UX，每天提供15小时连续光照，然后9小时连续黑暗，如此循环，至第5天，每个瓶子补加步骤I所述的浓缩培养液50毫升，第7-9天，调节温度至28°C，光照强度120001uX，每天24小时连续光照，没有黑暗，第7天，每个桶补加蒸馏水250毫升，至第8天，每个桶补加步骤I所述的浓缩培养液30毫升，到第9天，小型角毛藻细胞密度可达75万/毫升藻液，培养完毕。
[0019]步骤I中各种营养盐要按配方中提供的顺序加入，以免发生化学反应；
[0020]步骤I中各种无机营养盐和维生素可预先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存备用，放置时间不要超过30天；
[0021]步骤I中所述土壤浸出液制备方法:取树林中上层土壤1000份，加蒸馏水1000份，再加NaOH 2.5份，加热，煮沸45分钟，冷却，沉淀12小时，取上清液，滤纸过滤，滤液即为土壤浸出液；
[0022]步骤I中所述鸡粪浸出液制备方法:把干鸡粪、青草、豆饼、米糠、颖壳(五谷杂粮的外壳)和腐殖土按60: 10: 12: 15: 2: I的重量比例混合，搅拌均匀，装入陶瓷缸内密闭进行发酵，30天后，倒出，在干净水泥地上，摊成薄层，晾干48小时，后取2公斤，置于塑料水桶，加自来水10升，搅拌均匀，用80目筛絹过滤，将清液煮沸5分钟，冷却，静置24小时，取上清液，装入试剂瓶，贴上标签，置于4°C冰箱，备用；
[0023]步骤I中所述海泥抽取液制备方法:取比较肥沃又不於黑的海泥，以I份泥加2份淡水，充分搅拌均匀，静置1-2分钟，取上层泥浆于铝锅中，按每1000毫升泥浆加I克NaOH的量加入NaOH，煮沸25分钟。煮时需不断搅拌均匀，煮后静置24小时取上清液备用；
[0024]步骤I中因FeC6H5O7.5H20 (柠檬酸铁)较难溶解，可加少量自来水在火炉上微热至80-90°C，并不断搅拌至全部融化；
[0025]步骤I中人尿制备方法:取人尿1000毫升，三角烧瓶煮沸后冷却备用；
[0026]步骤I 中所述 NaHCO3, Na2S13,过磷酸钙，MgSO4, Ca(NO3)2, CaCl2, CH3COONa,CH3CH2COONa,吲哚乙酸等化学药品纯度均需分析纯级别；
[0027]步骤2中接种用的小型角毛藻预先进行提纯(本领域常规方法，只要可实现提纯即可，例如米氏提取法)，以确保接种时藻种为纯种、无污染且处于生长旺盛的指数生长期；
[0028]步骤2中所用塑料桶需洗刷干净后加入450毫升蒸馏水润洗3遍，瓶口处用75%酒精拭擦以消毒灭菌；
[0029]步骤2中所用纯净水桶应为透明或白色桶，以增加透光性；
[0030]步骤2中桶口处用透明胶带或玻璃胶密封，以防漏气；桶与桶之间可用塑料或橡胶料管连接。
[0031]最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。
【主权项】
1.一种小型角毛藻浓缩培养液，其特征在于具体成分配方如下: 鸡粪浸出液I份，NaHCO3 0.6份，人尿0.7份，Na2S13 0.02份，f/2微量元素溶液0.8份，f/2维生素溶液0.8份，过磷酸钙0.1份，土壤浸出液0.6份，海泥抽取液0.8份，MgS04.7H20 0.2 份，Ca (NO3) 2 0.3 份，CaCl2.2H20 0.5 份，CH3COONa 0.05 份，CH3CH2COONa0.1份，吲哚乙酸0.001份，煮沸冷却海水100份；装入三角烧瓶，放在摇床上摇匀15分钟，浓缩培养液制备完成；其中f/2微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液计)=ZnSO4.4Η2023 毫克，MnCl2.4Η20 178 毫克，CuSO4.5H20 10 毫克，FeC6H5O7.5H20 3.9 克，Na2MoO4.2Η207.3毫克，CoCl2.6Η20 12毫克，Na2EDTA 4.35克，蒸馏水1000毫升；f/2维生素溶液配方(按配制1000毫升溶液计):维生素B12 0.5毫克，维生素B1 100毫克，维生素H 0.5毫克，蒸馏水1000毫升。
2.如权利要求1所述的一种小型角毛藻浓缩培养液培养小型角毛藻的培养方法，其特征在于: 取三个20升的带把的塑料纯净水桶(市场有售)，分别加入权利要求1所述的小型角毛藻浓缩培养液1000毫升，然后加入9000毫升煮沸冷却的普通海水，摇匀；选生长旺盛、无污染、处于指数生长期的小型角毛藻藻种接种，接种密度4万个细胞/毫升藻液，轻轻摇匀3分钟；每个纯净水桶瓶口插入两根玻璃管，管的直径为8毫米，一根为充气管，另一根为排气管，第2个桶的充气管与第一个桶的排气管相连，第3个桶的充气管与第2个桶的排气管相连，这样充入的气体依次经过三个塑料桶，可得到3次利用；第一个桶的充气管上端连接空气压缩机，另一端插入到藻液底部，充入混合气体，气体成分=空气99% +纯CO2 0.5% +一氧化氮0.3% +氨气0.2%，每天24小时不间断充气，气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；将这3个塑料桶放入微藻培养室中培养，室内空调控温，日光灯管照明，以打开灯管的数量多少来控制光照强度，连续培养9天，前3天调节温度至25°C，光照强度60001UX，光暗周期=6h/L+6h/D，即提供间歇光，6小时连续光照，6小时连续黑暗，如此循环；第4-6天，调节温度至26°C，光照强度90001uX，每天提供15小时连续光照，然后9小时连续黑暗，如此循环，至第5天，每个瓶子补加步骤I所述的浓缩培养液50毫升，第7-9天，调节温度至28°C，光照强度120001uX，每天24小时连续光照，没有黑暗，第7天，每个桶补加蒸馏水250毫升，至第8天，每个桶补加步骤I所述的浓缩培养液30毫升，到第9天，小型角毛藻细胞密度可达75万/毫升藻液，培养完毕。
【专利摘要】本发明公开了一种小型角毛藻浓缩培养液制备方法和高效培养技术，属水产养殖领域。本发明配制的小型角毛藻浓缩培养液，储存、运输方便，便于工厂化、标准化、专业化生产，微量成分定量准确且对传统使用的f/2营养盐配方进行了优化，成分合理、均衡，有利于微藻快速生长；使用塑料纯净水桶养殖小型角毛藻，操作灵活，不易污染，洗刷方便，不易划破，成本低；在培养的早、中、晚期提供不同光照和温度且在培养后期补充营养盐，促进小型角毛藻持续快速生长，藻产量提高120％，采用三个塑料桶串联养殖，通入的气体得到三次利用，节约了能量和资源。
【IPC分类】C12R1-89, C12N1-12
【公开号】CN104593261
【申请号】CN201510002937
【发明人】王培磊
【申请人】临沂大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年1月6日