一种蜗牛蛋白酶的制备方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种酶的制备方法，具体地说是一种蜗牛蛋白酶的制备方法。
【背景技术】
[0002]蜗牛蛋白酶是从蜗牛的足腺分泌的粘液中制备的生物活性蛋白，它富含天然尿囊素、钙、甘醇酸、骨胶原、蛋白质和维生素等保养肌肤必不可少的材料。此外，蜗牛粘液还是一种天然抗生素，能够杀死人们皮肤上的某些细菌，并能消除皮肤斑点和痤疮，因为它能渗透到皮肤的第三个层面。蜗牛分泌的粘液含有的化学成分具有紧肤作用，能够使皮肤迅速再生。从蜗牛粘液中提炼出的尿囊素可以使皮肤再生；蛋白质和维生素可以增加皮肤的营养，使肌肤更加细腻和光滑。而目前蜗牛蛋白酶的提取方法存在工艺复杂、操作性差和提纯率低的缺陷，保存条件高使得蜗牛蛋白酶价格居高不下，不能实现量产。
【发明内容】
[0003]本发明就是为了解决现有蜗牛蛋白酶提取方法工艺复杂、操作性差、提纯率低、成本高的技术问题，提供一种工艺简单、操作性强、提纯率高、成本低的蜗牛蛋白酶的制备方法。
[0004]本发明提供一种蜗牛蛋白酶的制备方法，包括以下步骤:
[0005](I)蜗牛选购:选用鲜活褐云玛瑙螺；
[0006](2)蜗牛清洗:将蜗牛置于放养箱中用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物；
[0007](3)蜗牛粘液收集:取清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上静置，待其身体伸出外壳，用小型充电电源调整空载电压>900伏，负载电流〈4毫安，瞬间电击蜗牛足部，一触即离重复5次，蜗牛分泌粘液后用滴管吸取至烧杯中；
[0008](4)第一次过滤:将收集好的粘液通过450目过滤网，收集在离心管中；
[0009](5)离心:用低温离心机将第一次过滤后的粘液在0°C?5°C下离心10分钟，离心转速为11000转/分，取上清液；
[0010](6)第二次过滤:将上清液经过细菌滤器过滤；
[0011](7)真空冻干:滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛蛋白酶含水量在6%以下；
[0012](8)胶磨:将冻干后的蜗牛蛋白酶在胶磨机中磨成粉末，分装在200g安瓶中；
[0013](9)保存:200g安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。
[0014]优选地，步骤(I)中选用的鲜活褐云玛瑙螺的重量为15克以上，所述步骤(2)中，冲洗用的清水温度为25°C;所述步骤(5)中，离心时的温度为:TC;所述步骤(7)中，蜗牛蛋白酶含水量为6%。
[0015]本发明的有益效果是，本方法工艺简单、操作性强、提纯率高，可实现蜗牛蛋白酶的量产，蜗牛蛋白酶成品价格低，每100公斤蜗牛粘液可产1.2公斤蜗牛蛋白酶。本发明提取的蜗牛蛋白酶经过SB/T 10317-1999蛋白酶活力测定法进行酶活性实验，其酶活性为7.5Xl(T3u/g。
【附图说明】
[0016]图1是本发明的制备方法的过程图。
【具体实施方式】
[0017]如图1所示:
[0018](I)蜗牛选购:
[0019]选用15克以上的鲜活褐云玛瑙螺(学名:Achatina Fulica)。
[0020](2)蜗牛清洗:
[0021]将蜗牛置于放养箱中用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物，每次清洗还应仔细挑除已死掉的蜗牛。对于冲洗用的清水，其温度优选为25V。
[0022](3)蜗牛粘液收集:
[0023]取50KG清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上静置，待其身体伸出外壳，用小型充电电源调整空载电压>900伏，负载电流〈4毫安，瞬间电击蜗牛足部，一触即离重复5次，蜗牛分泌粘液后用滴管吸取至烧杯中，50千克蜗牛可收集到5000克粘液。
[0024](4)第一次过滤:
[0025]将收集好的粘液通过450目过滤网，收集在离心管中。
[0026](5)离心:
[0027]粘液用低温离心机在0°C?5°C下离心10分钟，离心转速为11000转/分，取上清液。对于离心温度，优选为3°C。
[0028](6)第二次过滤:
[0029]将上清液经过细菌滤器过滤。
[0030](7)真空冻干:
[0031]滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛蛋白酶含水量在6%以下，冻干的蜗牛蛋白酶为结晶体，呈米白色，5000克粘液可得60克蜗牛蛋白酶冻干粉。对于蜗牛蛋白酶含水量，优选为6%。
[0032](8)胶磨:
[0033]将冻干后的蜗牛蛋白酶在胶磨机中磨成粉末，分装在200g安瓶中。
[0034](9)保存:
[0035]200g安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。
[0036]上述褐云玛瑙螺收集完粘液后需用清水与精饲料喂养5天后可再提取。
【主权项】
1.一种蜗牛蛋白酶的制备方法，其特征是包括以下步骤: (1)蜗牛选购:选用鲜活褐云玛瑙螺； (2)蜗牛清洗:将蜗牛置于放养箱中，用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物； (3)蜗牛粘液收集:取清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上静置，待其身体伸出外壳，用小型充电电源调整空载电压>900伏，负载电流〈4毫安，瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复5次，蜗牛分泌粘液后，用滴管吸取至烧杯中； (4)第一次过滤:将收集好的粘液通过450目过滤网，收集在离心管中； (5)离心:用低温离心机将第一次过滤后的粘液在0°C?5°C下离心10分钟，离心转速为11000转/分，取上清液； (6)第二次过滤:将上清液经过细菌滤器过滤； (7)真空冻干:滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛蛋白酶含水量在6%以下； (8)胶磨:将冻干后的蜗牛蛋白酶在胶磨机中磨成粉末，分装在200g安瓶中； (9)保存:200g安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。
2.根据权利要求1所述的蜗牛蛋白酶的制备方法，其特征是: 所述步骤(I)中选用的鲜活褐云玛瑙螺的重量为15克以上，所述步骤(2)中，冲洗用的清水温度为25°C;所述步骤(5)中，离心时的温度为:TC;所述步骤(7)中，蜗牛蛋白酶含水量为6%。
【专利摘要】本发明涉及一种蜗牛蛋白酶的制备方法，其解决了现有蜗牛蛋白酶提取方法工艺复杂、操作性差、提纯率低、成本高的技术问题，其步骤是：选用鲜活褐云玛瑙螺、清洗、粘液收集、第一次过滤、离心、第二次过滤、真空冻干、胶磨、保存。本发明广泛用于蜗牛蛋白酶的制备。
【IPC分类】C12N9-64
【公开号】CN104745555
【申请号】CN201510188191
【发明人】刘斌, 杨磊
【申请人】威海圣奥罗生物科技有限公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年4月20日