anuginosa))的脂肪酶；来自腐质霉属例如特异 腐质霉属（H.insolens) (W0 96/13580)的角质酶；来自假单胞菌属菌株（这些中的一 些现在改名为伯霍尔德杆菌属）的脂肪酶，例如产碱假单胞菌（P.alcaligenes)或类 产喊假单胞菌（P.pseudoalcaligenes)(EP218272)、洋葱假单胞菌（P.cepacia)(EP 331376)、假单胞菌（P.sp.)菌株SD705(W0 95/06720&W0 96/27002)、威斯康星假单胞菌 (P.wisconsinensis)(W0 96/12012);⑶SL-型链霉菌属脂肪酶（W0 10/065455)、灰色链 霉菌（Streptomycesgriseus)(TO11/150157)和始旋链霉菌（S.pristinaespiralis) (TO12/137147));来自稻瘟菌（Magnaporthegrisea)(TO10/107560)的角质酶；来自门 多萨假单胞菌（Pseudomonasmendocina)(US5,389,536)的角质酶和来自褐色喜热裂孢 菌（Thermobifidafusca)(W0 11/084412)的脂肪酶。其他有用的脂肪酶可以是芽孢杆 菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌（达托斯（Dartois)等人（1993)《生物化学与生物 物理学学报》（BiochemicaetBiophysicaActa)，1131，253-360)、嗜热脂肪芽孢杆菌（JP 64/744992，W0 11/084599)、嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶（WO11/084417)、或短小芽胞杆菌(TO91/16422)的脂肪酶。
[0060] 其他实例是脂肪酶变体，例如描述于EP407225、W0 92/05249、W0 94/01541、 TO94/25578、TO95/14783、TO95/30744、TO95/35381、TO95/22615、TO96/00292、TO 97/04079、TO97/07202、TO00/34450、TO00/60063、TO01/92502、TO07/87508 以及 W009/109500中的那些。
[0061] 优选的商业化脂肪酶产品包括Lipolase?、Lipex?;Lipolex?和Lipoclean? (诺 维信公司），Lumafast(来自杰能科公司（Genencor))以及Lipomax(来自吉斯特-博克德 斯公司（Gist-Brocades))。
[0062] 再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母 (Candidaantarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶（W0 10/111143)、来自耻垢分枝 杆菌（Mycobacteriumsmegmatis)的酰基转移酶（W0 05/56782)、来自CE7家族的过水解 酶（W0 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体。
[0063] 其他适合的脂肪酶是描述于例如W0 2006/136159中的用于胰酶替代的脂肪酶。
[0064]纤维素酶：适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或 蛋白工程化的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰 刀菌属、梭孢壳属、枝顶孢霉属的纤维素酶，例如，从在US4, 435, 307、US5, 648, 263、US 5, 691，178、US5, 776, 757以及W0 89/09259中披露的特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰刀 菌产生的真菌纤维素酶。
[0065] 特别适合的纤维素酶是具有颜色保护益处的碱性或中性纤维素酶。这样的纤维素 酶的实例为如在EP0 495 257、EP0 531 372、W0 96/11262、W0 96/29397、W0 98/08940 中描述的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体，如在W0 94/07998、EP0 531 315、US 5,457,046、US5,686,593、US5,763,254、W0 95/24471、W0 98/12307 和PCT/DK98/00299 中描述的那些。
[0066] 可商购获得的纤维素酶包括Celluzyme?、Carezyme?、和Celluclean?(诺维信 公司）、Clazinase?、和Puradax?HA(杜邦公司）、以及KAC-500⑶?(花王株式会社（Kao Corporation))〇
[0067]太聚糖酶：太聚糖酶包括L4-((3 )-D_太聚糖-太聚糖水解酶、(EC3. 2. 1. 8)、 4_木聚糖水解酶、内切-1，4-木聚糖酶、内切-1，4-0 -木聚糖酶、0 -1，4-木聚糖酶、内 切-1，4-f3-D-木聚糖酶、1，4-0-木聚糖木聚糖水解酶、木聚糖酶、0-1，4-木聚糖木 聚糖水解酶、0 -D-木聚糖酶，其将直链多糖0 -1，4-木聚糖降解为木糖，由此分解作为植 物细胞壁的主要成分之一的半纤维素。可商购获得的木聚糖酶的实例为Econase?(AB维斯 塔公司（ABVista))。
[0068]天冬酷胺酶：天冬酷胺酶也称为L-天冬酰胺酶和L-天冬酰胺酰胺基水解酶。（EC 3. 5. 1. 1)是一种催化天冬酰胺水解为天冬氨酸的酶。
[0069] Acrylaway?(诺维信公司）为可商购获得的天冬酰胺酶的实例。
[0070]甘露聚糖酶：甘露聚糖酶(EC3. 2. 1. 25)包括催化0-D-甘露糖苷（也称为甘露 聚糖）中的末端非还原性0-D-甘露糖的水解的所有酶。
[0071] 甘露聚糖酶的商业实例为Mannaway? (诺维信公司）。
[0072]植酸酶：在目前情况下，植酸酶是一种催化植酸盐（肌醇六磷酸盐）水解为⑴肌 醇和/或⑵它的单-，二-，三-，四-和/或五-磷酸盐和（3)无机磷酸盐的酶。
[0073] 植酸酶包括3-植酸酶（肌醇六磷酸盐3-磷酸水解酶，EC3. 1. 3. 8)和6-植酸酶 (肌醇六磷酸盐6-磷酸水解酶，EC3. 1. 3. 26)。
[0074]可商购获得的植酸酶的实例包括Ronozyme?(DSM营养产品）、Natuphos?(BASF)、 Finase?(ABVista)、Quantum?XT和Blue(ABVista)、Phyzyme?产品系列（杜邦公司） 和Axtra?PHY产品系列（杜邦公司）。其他优选的植酸酶包括描述于WO98/28408、TO 00/43503、和TO03/066847 中的那些。
[0075]裂解酶：裂解酶可以是细菌或真菌来源的果胶酸裂解酶。包括化学或遗传修饰 的突变体。在一个优选的实施例中，该裂解酶来源于芽孢杆菌属，特别是枯草芽孢杆菌、地 衣芽孢杆菌或粘琼脂芽孢杆菌（B.agaradhaerens)，或一种来源于这些来源中任一种的变 体，例如，正如在US6，124，127、TO1999/027083、TO1999/027084、TO2002/006442、W0 2002/092741、WO2003/095638中所述的，可商购获得的果胶酸裂解酶包括爱派（XPect); 派克沃（Pectawash?)和派克威（Pectaway?)(诺维信公司）。
[0076] 乙酰乳酸脱羧酶（EC4. 1. 1. 5)属于被称为裂解酶（具体地说，裂解碳-碳键的羧 酸分解酶）的这组酶。商业化酶Maturex?(诺维信公司）广泛用于酿造业。
[0077] 太糖异构酶：可商购获得的太糖异构酶例如是Sweetzvme?(诺维信公司)或 GenSweet?(杜邦公司）。
[0078]乳糖酶：乳糖，一种葡萄糖与半乳糖的二聚体，是牛奶中的主要的糖，其在很 大程度上是哺乳动物尤其是人类中牛奶不耐受的原因。半乳糖苷酶或乳糖酶（EC 3. 2. 1. 23)水解个体碳水化合物中的二聚体，由此增加在消费期间对牛奶的耐受性和消化 牛奶的能力。乳糖酶的替代名称还包括外切_(1，4)--D-半乳聚糖酶。
[0079] 可商购获得的乳糖酶例如包括LactozymePure?(诺维信公司）和G0D0-YNL2乳 糖酶（杜邦公司）。
[0080]讨氣化物酶/氣化酶：话合的讨氣化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的 那些。包括化学修饰的或蛋白工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞 属，例如来自灰盖鬼伞的过氧化物酶，及其变体，如在W0 93/24618、W0 95/10602、和W0 98/15257中描述的那些。
[0081] 其他过氧化物酶包括Guardzyme?(诺维信公司）。
[0082] 发酵液
[0083] 本发明对于工业规模的任何发酵可以是有用的，例如用于具有至少50升、优选至 少500升、更优选至少5, 000升、甚至更优选至少50, 000升的培养基的任何发酵。
[0084] 可以通过本领域中任何已知的方法来发酵产生感兴趣的蛋白质的微生物。发酵培 养基可以是如描述于例如W0 98/37179中的基本培养基，或者该发酵培养基可以是包含复 合氮源和碳源的复合培养基，其中该复合氮源可以如W0 2004/003216中所述被部分水解。
[0085] 该发酵可以按照分批、重复分批、补料分批、重复补料分批或连续发酵工艺来进 行。
[0086] 在补料分批工艺中，在开始发酵之前，不添加包含一种或多种结构和/或催化元 素的化合物或者将其一部分添加到培养基中，并且对应地，在发酵过程中，将全部或剩余部 分的包含一种或多种结构和/或催化元素的化合物进行补料。被选定为补料的这些化合物 可以一起补料或分开补料到该发酵工艺中。
[0087] 在重复补料分批或连续发酵工艺中，在发酵过程中另外补入完全起始培养基。起 始培养基可与结构元素补料（一种或多种）一起或分开补入。在重复补料分批工艺中，以 规律的时间间隔去除包含生物质的发酵液的一部分，而在连续工艺中，连续进行发酵液的 一部分的去除。由此，发酵工艺补充有相应于撤出的发酵液量的一部分新鲜培养基。
[0088] 在本发明的优选实施例中，来自补料分批发酵工艺的发酵液是优选的。
[0089]絮凝
[0090] 本发明的方法可应用于未处理的发酵液或者已经初步进行（但不限于）例如pH 调节和/或温度调节的发酵液。pH可以调节至在pH2到pH11范围之内的pH。可以用本 领域中已知的任何酸或碱调节pH。
[0091] 根据本发明，可以用水将该发酵液稀释高达2000% (w/w);优选地可以用水将该 发酵液稀释10%-2000% (w/w);更优选地可以用水将该发酵液稀释100%-1500% (w/w); 更优选地可以用水将该发酵液稀释100%-1000% (w/w);更优选地可以用水将该发酵液稀 释 200% -800% (w/w)。
[0092] 根据本发明，用水稀释意指该稀释介质可以是水，或者它可以是来自感兴趣的蛋 白质生产的超滤渗透物，或者它可以是来自感兴趣的蛋白质生产的再循环水或工艺液体， 或者它可以是来自加热器的冷凝物或者它可以是以上提及的任何组合，例如水和超滤渗透 物的混合物。
[0093] 然后可以将单价或二价盐，尤其是钠和/或钙盐和/或镁盐，例如氯化钠、氯化钙 或氯化镁添加到该发酵液中。优选实施例为钙盐，尤其是氯化钙。
[0094] 可以按照0? 01 % -10% (w/w)每千克发酵液（未稀释）；优选0? 5% -10% (w/w) 每千克发酵液（未稀释）；更优选1%_9% (w/w)每千克发酵液（未稀释）；尤其是2%-8% (w/w)每千克发酵液（未稀释）的浓度将该单价和二价盐添加至该发