通过质谱法定量甲状腺球蛋白的制作方法_2

文档序号:8476385阅读:来源:国知局
%的比例。
[0023] 如本文使用的,术语"试样"是指任何可包含Tg的样品。如本文使用的,术语"体 液或组织"是指任何可从个体的身体分离的液体或组织。例如,"体液或组织"可包括血液、 血浆、血清、胆汁、唾液、尿、眼泪、汗和类似物。如果要分析实体组织,其可受到处理以释放 可含有任何存在于组织中的Tg的液体组分。然后,可对该液体组分进行本文所述的方法。
[0024] 如本文使用的,术语"消化"是指蛋白酶剪切蛋白质成肽。消化剂可包括胰蛋白酶、 Lyc-C、Arg-R、ASp-N和类似物。通过将消化剂(即酶)添加至样品和温育一段时间而进行 消化。
[0025] 如本文使用的,"Tg"或"Tg分子"是指完整的Tg蛋白分子。
[0026] 如本文使用的,术语"Tg肽"是指作为天然Tg的片段的100个氨基酸或更少氨基 酸的任何肽。Tg肽可以内源于试样或由于Tg的消化而形成。肽T129是由于Tg的胰蛋白 酶消化而形成的Tg肽的实例。
[0027] 如本文使用的,术语"尺寸分离技术"是指允许基于任何一种或多种分子量和形状 从试样中分离至少一种物质的任何技术(物理技术或化学技术)。这类技术的实例包括但 不限于过滤、层析和质谱法的某些方面。
[0028] 如本文使用的,术语"层析"是指这样的过程,其中由于化学实体在液体固定相或 固体固定相周围、之上和/或通过其流动时它们的差异分配,而使液体或气体携带的化学 混合物分为组分。
[0029] 如本文使用的,术语"液相层析"或"LC"是指当流体均匀地渗透通过精细分散的 物质的柱或通过毛细管通道时,选择性阻滞流体溶液一种或多种组分的过程。阻滞由在体 相流体(即流动相)相对于固定相移动时混合物组分在一种或多种固定相和该流体之间的 分配所造成。"液相层析"包括反相液相层析(RPLC)、高效液相层析(HPLC)和高湍流液相 层析(HTLC)。
[0030] 如本文使用的,术语"高效液相层析"或"HPLC"是指这样的液相层析,其中通过迫 使流动相在压力下通过固定相而增加分离程度,该固定相通常为密集填充的柱。
[0031] 如本文使用的,术语"质谱法"或"MS"是指通过化合物的质量将它们识别的分析 技术。MS是指基于离子的m/z将它们过滤、检测和测量的方法。MS技术通常包括(1)电 离化合物以形成带电物质(例如离子);和(2)检测该离子的分子量和计算它们的m/z。 可通过任何合适的方法电离和检测化合物。"质谱仪"通常包括电离源和离子检测器。通 常,电离感兴趣的一种或多种分子,随后将离子引入质谱仪器,在此由于磁场和电场的结 合,离子遵循空间内取决于质量("m")和电荷("z")的路线。参见,例如,名为"Mass SpectrometryFromSurfaces"的美国专利号 6, 204, 500;名为"MethodsandApparatus forTandemMassSpectrometry"的美国专利号6, 107, 623;名为"DNADiagnosticsBased OnMassSpectrometry"的美国专利号 6, 268, 144;名为"Surface-EnhancedPhotolabile AttachmentAndReleaseForDesorptionAndDetectionOfAnalytes"的美国专利号 6,124,137;ffrightetal. ,ProstateCancerandProstaticDiseases2:264-76(1999); 和MerchantandWeinberger,Electrophoresis21:1164-67(2000)。
[0032] 如本文使用的,术语"以正离子模式运行"是指那些检测正离子的质谱法。类似地, 术语"以负离子模式运行"是指那些检测负离子的质谱法。
[0033] 如本文使用的,术语"电离(ionization) "或"电离(ionizing) "是指生成具有等 于一个或多个电子单位的净电荷的分析物离子的过程。正离子是具有一个或多个电子单位 的净正电荷的离子。负离子是具有一个或多个电子单位的净负电荷的离子。
[0034] 如本文使用的,术语"电子电离"或"EI"是指其中气相或汽相的感兴趣分析物与 电子流相互作用的方法。电子与分析物的碰撞产生分析物离子,随后可对分析物离子进行 质谱法技术。
[0035] 如本文使用的,术语"化学电离"或"CI"是指这样的方法,其中对试剂气体(例如 氨)进行电子碰撞,且分析物离子由试剂气体离子和分析物分子的相互作用形成。
[0036] 如本文使用的,术语"快原子轰击"或"FAB"是指这样的方法,其中一束高能量原 子(通常为Xe或Ar)碰撞非挥发性样品,解吸和电离样品中包含的分子。试样溶解在粘性 液相基质如甘油、硫甘油、m-硝基苄醇、18-冠-6冠醚、2-硝基苯辛基醚、环丁砜、二乙醇胺 和三乙醇胺。化合物或样品合适的基质的选择是经验性过程。
[0037] 如本文使用的,术语"基质辅助激光解吸电离"或"MALDI"是指这样的方法,其中 将非挥发性样品暴露于激光辐射,激光辐射通过各种电离途径一一包括光离子化、质子化、 脱质子化和簇衰变解吸和电离样品中的分析物。对于MALDI,样品与能量吸收基质混合,其 促进分析物分子的解吸。
[0038] 如本文使用的,术语"表面增强激光解吸电离"或"SELDI"是指另一种方法,其中 将非挥发性样品暴露于激光辐射,激光辐射通过各种电离途径一一包括光离子化、质子化、 脱质子化和簇衰变解吸和电离样品中的分析物。对于SELDI,样品通常结合到优选地保留感 兴趣的一种或多种分析物的表面。与在MALDI中一样,该过程也可使用能量吸收材料来促 进电离。
[0039] 如本文使用的,术语"电喷雾电离"或"ESI"是指这样的方法,其中溶液沿一根短 长度的毛细管通过,高的正电势或负电势施加至毛细管的末端。将到达管末端的溶液汽化 (雾化)成溶剂蒸气中的极小溶液滴的喷气或喷雾。该液滴雾流动通过蒸发室,其被轻微加 热,从而防止冷凝并从而蒸发溶剂。随着液滴变得更小,表面电荷密度增加,直到同性电荷 之间的自然排斥力引起离子和中性分子释放之时。
[0040] 如本文使用的,术语"大气压化学电离"或"APCI"是指与ESI类似的质谱法;然 而,APCI通过在大气压下在等离子体内发生的离子-分子反应而产生离子。血浆通过喷雾 毛细管和对电极之间的放电维持。通常通过使用一组差分抽气分流器级将离子提取到质量 分析器中。可使用干燥和预热的队气体的逆流来提高溶剂的去除。APCI中的气相电离可 比ESI更有效地用于分析较低极性的物质。
[0041] 本文所使用的术语"大气压光电离"或"APPI"是指其中光电离分子的M的机制 为光子吸收和电子射出以形成分子M+的质谱法形式。由于光子能量通常刚刚超过电离电 位,分子离子不易于离解。在很多情况下,可能无需层析而分析样品,从而节约大量的时间 和费用。在存在水蒸气或质子溶剂的情况下,分子离子可提取H以形成MH+。如果M具有 高的质子亲和力,则这往往发生。这不影响定量精确性,因为M+和MH+之和恒定不变。质 子溶剂中的药物化合物通常作为MH+而观察到,而非极性化合物如萘或睾酮通常形成M+。 Robb,D.B.,Covey,T.R.andBruins,A.P. (2000):参见例如,Robbetal.,Atmospheric pressurephotoionization:Anionizationmethodforliquidchromatography-mass spectrometry.Anal.Chem. 72(15):3653-3659〇
[0042] 如本文使用的,术语"感应耦合等离子体"或"ICP"是指其中样品与部分电离的气 体在足够高的温度下相互作用以原子化和电离大部分成分的方法。
[0043] 如本文所使用的,术语"场解吸"是指其中将非挥发性试样放置在电离表面上,和 使用强电场以生成分析物离子的方法。
[0044] 如本文使用的,术语"解吸"是指从表面去除分析物和/或分析物进入气相。
[0045] 如本文使用的,术语"定量限值"或"L0Q"是指测量变得定量有意义的点。在该L0Q 的分析物响应是可识别的、独立的和可重复的,精密度为20%且准确度为80%至120%。
[0046] 在本文公开的方法的某些优选实施方式中,质谱法以正离子模式进行。在本文公 开的方法的某些尤其优选的实施方式中,使用ESI作为从Tg肽产生离子的方法进行质谱 法。
[0047] 在优选的实施方式中,在质谱仪中可检测的来自Tg肽电离的离子选自具 有 636. 4±0. 5、1059. 5±0. 5、921. 4±0. 5、797. 4±0. 5、726. 4±0. 5、612. 3±0. 5 和 541. 3±0. 5的m/z的离子;所列的第一种离子(636. 4±0. 5的m/z)是具有正的2个电子 单位的净电荷的前体离子,所列的后面六种离子是前体离子的碎片离子。在尤其优选的实 施方式中,前体离子具有正的2个电子单位的净电荷和大约636. 4±0. 5的m/z,碎片离子具 有 1059. 5±0. 5、921. 4±0. 5 或 797. 4±0. 5 的m/z。<
当前第2页1 2 3 4 5 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1