细胞穿透肽、包含该肽的缀合物、及包含该缀合物的组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及源自人端粒酶逆转录酶（humantelomerasereverse transcriptase;hTERT)的细胞穿透肽、细胞穿透肽及活性成分的缀合物、以及包含该缀合 物的组合物。
【背景技术】
[0002] 尽管低分子量物质、核酸、蛋白质、纳米粒子等在分子水平上具有作为治疗物质的 极大可能性潜力，但低分子量物质、核酸、蛋白质、粒子等的使用其应用由于不能无能力穿 透组织及细胞膜而受限。输送此类物质至细胞内的的系统的开发展已成为过去二十年来活 跃的研宄领域。细胞内部运输物质已成为分子处理治疗方法中的的话题。低分子量物质、 核酸或纳米粒子通过系通过多种若干试剂、电穿孔或热休克而运送到运输到细胞内。然而， 难以找到一种适当方法在不破坏蛋白质的活性及完整性的情况下将蛋白质输送到在细胞 内部输送蛋白质。在20世纪80年代，在对人类人免疫缺乏病毒（humanimmunodeficiency virus;HIV)的细胞穿透能力进行的研宄中，已发现，由特定的11种个氨基酸构组成的的 HIV-TAT蛋白质在于在向细胞内部的运输的过程中起重要作用。因此，在20世纪90年代， 探索运输到细胞内蛋白质将蛋白质运输到细胞内的恰当方法的研宄成为重点研宄领域。
[0003] 已知端粒是染色体末端发现的遗传物质重复序列，端粒防止染色体损伤或防止合 并至其它染色体上。端粒的长度在每次细胞分裂时缩短，且在一定次数的细胞分裂的后，端 粒长度极度缩短至细胞停止分裂且死亡的程度。在另一方面，已知端粒延伸可延长细胞的 寿命。作为实例，癌细胞分泌称为端粒酶的酶，该酶防止端粒缩短，因此导致癌细胞增殖。
[0004] 本发明的目标在于提供一种新型肽。
[0005] 本发明的另一目标在于提供编码该新型肽的多核苷酸。
[0006] 本发明的另一目标在于提供细胞穿透肽。
[0007] 本发明的另一目标在于提供作为细胞内活性成分的载体的有用的肽。
[0008] 本发明的另一目标在于提供活性成分与细胞穿透肽缀合成的缀合物。
[0009] 本发明的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的组合物。
[0010] 本发明的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的药物组合物。
[0011] 本发明的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的功能性化妆 组合物。
[0012] 本发明的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的健康食品组 合物。
[0013] 本发明的另一目标在于提供包含活性成分与细胞穿透肽的缀合物的对比造影剂。
【发明内容】
[0014] 根据本发明的一个实施方式的缀合物可为细胞穿透载体肽与活性成分的缀合物， 其中所述载体肽为包含SEQIDNO: 1至SEQIDNO: 156中至少一个氨基酸序列的肽、与上 述序列具有至少80%同源性的肽、或上述肽的片段，且其中具有至少80%同源性的所述肽 和所述片段保留SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 156中的任一氨基酸序列的细胞穿透能力。
[0015] 根据本发明中的缀合物的另一实施方式，所述片段可由3个或更多氨基酸构成。
[0016] 根据本发明中的缀合物的另一实施方式，所述载体肽可由30个或更少氨基酸构 成。
[0017] 根据本发明中的缀合物的另一实施方式，上述载体肽可为由SEQ ID N0:1至SEQ ID NO: 156中任一氨基酸序列构成的肽。
[0018] 根据本发明中的缀合物的另一实施方式，其包含选自以下组的任一氨基酸序列， 所述组由 SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:37、SEQ ID N0:43、SEQ ID N0:48、SEQ ID N0:52、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92 和 SEQ ID NO: 121 组成。
[0019] 根据本发明的一个实施方式的对比造影剂可包含上述的任一种缀合物。
[0020] 根据本发明的一个实施方式的对比造影剂可用于细胞对比造影。
[0021] 根据本发明的对比造影剂的另一实施方式，所述细胞可为干细胞。
[0022] 根据本发明的一个实施方式的组合物可包含上述的任一种缀合物。
[0023] 根据本发明的组合物的另一实施方式，所述活性成分可用于治疗或预防疾病，且 所述组合物可为药物组合物。
[0024] 根据本发明的组合物的另一实施方式，所述活性成分可为用于功能性化妆品的活 性成分，且所述组合物可为化妆品组合物。
[0025] 根据本发明的组合物的另一实施方式，所述活性成分可为用于功能健康食品的活 性成分，且所述组合物可为健康食品组合物。
[0026] 根据本发明方法的一个实施方式，所述方法可为用于输送活性成分至细胞内的方 法，其中该方法包括对有需要的对象施用上述任何缀合物，且其中载体肽为将活性成分输 送至细胞内的细胞穿透肽，且其中具有至少80%同源性的所述肽及上述肽的片段保留由 SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 156中任一氨基酸序列构成的肽的细胞穿透能力。
[0027] 根据本发明的方法的另一实施方式，所述方法可用于将所述活性成分局部地输送 至细胞内部的粒线体内。
[0028] 根据本发明细胞穿透肽的另一实施方式，上述载体肽可以为具有SEQ ID NO: 1至 SEQ ID NO: 156中任意一个或多个氨基酸序列的肽。
[0029] 根据本发明的多核苷酸可编码上述细胞穿透肽。
[0030] 根据本发明的载体可包含上述多核苷酸。
[0031] 根据本发明的转化细胞可包含上述载体。
[0032] 产业利用性
[0033] 难以运输到细胞内的活性成分可通过使用本发明所公开的肽或肽及活性成分的 缀合物而易于运输到细胞内。这意味着可增加活性成分的功效且因此可减少活性成分的剂 量。因此，可最小化由于药物施用造成的副作用且可增加治疗的有效性。特别地，当将药物 局部地输送至粒线体内时，可改善粒线体相关的疾病或病症，且可增加疾病预防及治疗疾 病的有效性。在化妆品的情况中，通过少量活性成分可产生显著效果。通过使肽与对比造 影物质缀合，可将该肽用作对比造影物质以监测细胞移植的过程或在细胞治疗中的移植细 胞。特别地，该肽可实际上用作用于注入身体内的干细胞的对比造影物质。
【附图说明】
[0034] 图1至图23描绘通过FACS分析的在FITC与SEQ ID No: 1至SEQ ID No: 156的 肽P印1融合后治疗的HeLa细胞中细胞摄入的细胞数量。对照细胞仅以FITC处理。
[0035] 图24至图43描绘通过FACS分析的在FITC与SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 156的 肽融合后治疗的Huh7细胞中细胞摄入的细胞数量。对照细胞仅以FITC处理。
[0036] 图44至图58描绘通过FACS分析的在FITC与SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 156的 肽融合后治疗的人T淋巴球细胞系（Jurkat细胞）中细胞摄入的细胞数量。对照细胞仅以 FITC处理。
[0037] 图59至图72描绘通过FACS (流式细胞术）分析的在FITC与