一种采用大孔吸附树脂纯化制备柑橘黄酮的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从柑橘皮(包括鲜食或榨汁后的废弃皮渣)中提取制备柑橘黄酮的方法。
【背景技术】
[0002]柑橘(Citrus)在植物学分类上属芸香科(Rutaceae)柑橘属(Cilrus L)植物。2009年中国柑橘的栽培面积达到了 210万km2，柑橘产量超过2300万吨，居世界第一位。预计到2020年我国柑橘总产量是现有产量的2倍。然而，中国90%以上的柑橘主要用于日常鲜食，用于加工的柑橘仅占总产量的5-8%。柑橘加工过程中，主要副产品为皮渣(去汁后剩余物)，占柑橘总质量的20-40%。但目前柑橘皮的利用率低，除少部分用于制成食品、提取精油、果胶和类黄酮等外，大部分作为废弃物丢弃，不仅资源综合利用率低，而且造成环境污染。
[0003]柑橘皮除含有人体健康必需的营养成分如氨基酸、抗坏血酸、钙、铁、磷外，还含有多种对人体健康具有促进作用及对一些疾病有防治作用的非营养性生理活性成分，如黄酮类化合物、柠檬苦素类化合物、类胡萝卜素等。医学临床试验表明黄酮类化合物有扩张冠状血管、降低毛细血管渗透、抗氧化、消炎、抗过敏、抑菌、抗病毒等作用，但由于加工和提取技术较为落后，成本较高，使得大部分柑橘皮被丢弃或者利用度不高。因此，鲜食或榨汁后丢弃的柑橘皮在中国柑橘加工市场的发展前景良好。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于，提供一种从柑橘皮(包括鲜食或榨汁后的废弃皮渣)中提取制备柑橘黄酮的方法，以提高柑橘的综合利用价值。
[0005]本发明所述的从柑橘皮(包括鲜食或榨汁后的废弃皮渣)中提取制备柑橘黄酮的方法包括以下步骤:
(I)去脂:将经干燥粉碎后的柑橘皮与石油醚，按料液比1:: 10?30置于恒温水浴振荡器中，60°C下振荡去脂2 h，过滤，滤液浓缩回收石油醚，滤渣挥干石油醚，待用。
[0006](2)提取:按步骤(I)去脂后的柑橘皮，按料液比1:: 10?30加入提取溶剂，采用微波、超声波或回流法提取柑橘皮黄酮。提取液过滤，浓缩回收有机溶剂，再将浓缩液加入适量水后，离心过滤得澄清溶液。
[0007](3)吸附:将步骤(2)离心过滤后的澄清液，通过单根树脂柱或多根树脂柱按照串联吸附方式进行吸附(大孔吸附树脂与柑橘皮原料的质量比为1:广10:1，树脂柱高径比为5: f 30:1，柱温为室温?40°C )，吸附流速为0.5?20 BV/h，吸附后收集流出液。
[0008](4)洗脱:首先将吸附饱和后的树脂柱用f 5 BV的水冲洗，收集水洗液；然后在树脂柱温度为室温?60°C条件下，向树脂柱中再加入f 20 BV的有机溶剂洗脱液进行等度洗脱或梯度洗脱，收集洗脱液，流速均为0.5?20 BV/h。有机溶剂洗脱液经过减压浓缩回收溶剂后，经干燥后得到不同纯度的柑橘皮黄酮产品。本品为淡黄色至棕黄色固体粉末，总黄酮含量10?70% (以无水芦丁计)。
[0009]其中，在步骤(I)中,所述的石油醚为60?90°C石油醚；
本发明的一个优选方案:在步骤(2)中所述的提取溶剂为50?95% (v/v)的乙醇水溶液；
在步骤(3)中，所述的大孔吸附树脂是指苯乙烯系或丙烯酸系的大孔吸附树脂；在步骤(4)中，所述的洗脱液是指有机溶剂是指乙酸乙酯、乙醇或甲醇，与水按不同比例组成的二元或多元混合溶剂，优选方案为乙醇与水的二元混合洗脱溶剂，洗脱时可采用等度洗脱或梯度洗脱方式；
本发明的原料、中间品和产品中总黄酮的测定方法参照《中国药典2010版(一部)》中“沙棘”总黄酮测定方法，以无水芦丁为对照品，依次加入5%亚硝酸钠、10%硝酸铝和I mol/L氢氧化钠溶液，络合显色5 min后，即在510 nm波长下进行紫外-可见分光光度法(即UV法)测定。
【具体实施方式】
[0010]本发明所述的从柑橘皮(包括鲜食或榨汁后的废弃皮渣)中提取制备柑橘黄酮的方法包括以下步骤:
(I)将经干燥粉碎后的柑橘皮与石油醚，按料液比1:: 10?30置于恒温水浴振荡器中，60°C下振荡去脂2 h，过滤，滤液浓缩回收石油醚，滤渣挥干石油醚，备用。亦可采用回流方式进行去脂处理。
[0011](2)经步骤(I)去脂后的柑橘皮，按料液比1::10?30加入浓度为50?95% (v/V)的乙醇水溶液作为提取溶剂，采用微波方式提取2?4 min，或超声波提取10?40 min,或回流状态下提取0.5?2 h，提取液经过滤、除去滤渣，浓缩回收有机溶剂，再将浓缩液加入适量水后，离心过滤得澄清溶液。
[0012](3)在室温?40°C条件下，将步骤(2)离心过滤后的澄清液，通过单根或多根苯乙烯系或丙烯酸系树脂柱，按照单柱或多柱串联吸附方式进行吸附，树脂柱中所填装大孔吸附树脂与柑橘皮原料的质量比为1:广10:1，树脂柱高径比为5: f 30:1为宜，吸附流速为0.5?20 BV/h ;吸附完成后，加入用I?5 BV的水冲洗树脂柱，然后加入I?20 BV的乙酸乙酯、乙醇或甲醇与水按不同比例组成的二元或多元混合溶剂(优选乙醇与水的二元混合溶剂)进行等度洗脱或梯度洗脱，洗脱温度为室温?60°C，洗脱液流速为0.5^20 BV/h，收集浓缩洗脱液即得目标物柑橘黄酮，所得产品中柑橘黄酮占干重的质量比为1(T70% (UV法，以无水芦丁计)。
[0013]下面通过实施例对本发明进一步进行阐述，其目的在于更好地理解本
【发明内容】
，而非限制本发明的保护范围。
[0014]实施例1
称取干燥粉碎的柑橘皮20 g，加入200 mL石油醚，在恒温水浴振荡器中振荡去脂2 h，过滤，回收滤液有机溶剂，在通风橱中挥干滤渣中的石油醚，向脱脂后的柑橘皮中加入200mL70%乙醇水溶液，在240 W功率下微波提取2 min,减压浓缩提取液，回收乙醇，浓缩液中加入适量水，使提取液中柑橘总黄酮含量为0.4 mg/mL (UV法)，即可上树脂柱分离纯化。
[0015]称取预处理后的LSA-21大孔吸附树脂40 g，湿法填装于内径为2 cm的玻璃层析柱中，其柱床体积为10 mL。在吸附温度25°C条件下，以3 BV/h的流速使250 mL柑橘皮提取稀释液流经该树脂柱进行吸附。吸附完成后加入30 mL水洗去树脂柱中杂质，再加入浓度为80% (v/v)的乙醇水溶液，在25°C条件下洗脱柑橘黄酮，收集合并(Γ4 BV洗脱液，减压浓缩至干，干燥得浅黄色固体粉末，测得其总黄酮含量为5