以糖厂废液为原料生产有机肥的微生物菌剂的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于废物资源化利用技术领域，具体涉及一种以糖厂废液为原料生产有机肥的微生物菌剂。
【背景技术】
[0002]随着制糖产业突飞猛进的发展，随之产生的环境污染问题也逐步显现出来。糖厂废液一般含有机物和糖分，COD和BOD很高，色度高，直接排入水体会对水生动物的生长及人群健康造成潜在的危害，直接排灌农田不仅烧死庄稼，而且使土壤板结。糖厂废液中含有大量的有机物质，同时含氮、磷、钾等元素较高，基本上不含有毒物质，因而可生化性好。如果对糖厂废液中的有价值成分加以利用，进行回收资源，既去除了污染，又创造了价值，并有利于相关工业的可持续发展，发展潜力巨大。其中，以糖厂废液为原料生产有机肥是一种很有发展价值的产业，但是目前还缺少相关的微生物菌剂。
【发明内容】
[0003]本发明提供一种以糖厂废液为原料生产有机肥的微生物菌剂。所述微生物菌剂由如下方法制备:
[0004](I)将 10mL 浓度为 0.25mol/L 的 NH4Cl 溶液和 10mL 浓度为 0.15mol/L 的 CaCl2溶液，混合均匀后得混合液A ;
[0005](2)将10mL浓度为0.15mol/L的(NH4)丨04溶液在搅拌的条件下缓慢滴加到200mL混合液A中，得到混合液B ；
[0006](3)向混合液B中逐滴加入浓硫酸至澄清，得到混合液C ;
[0007](4)用浓度为0.02mol/L的NaOH溶液和浓度为0.02mol/L的盐酸溶液调节混合液C的pH值为3.5，得到混合液D ；
[0008](5)向混合液D中加入10mL浓度为1.4mol/L的尿素水溶液，混合均匀后得到混合液E ；
[0009](6)向混合液E中加入50mL浓度为0.25mol/L的乙二胺四乙酸钙钠溶液，混合均匀后得到混合液F ;
[0010](7)将60mL质量分数为35%的尿素水溶液置于43°C水浴中恒温35分钟得到混合液G ;将1mL质量分数为25%的甲醛水溶液置于43°C水浴中恒温35分钟得到混合液H ;
[0011](8)向混合液G中在1000r/min搅拌条件下滴加浓度为0.0lmol/L的NaOH溶液和浓度为0.005mol/L的HCl溶液，使溶液的pH值为7.2?7.4，得到混合液I ;
[0012](9)将混合液H在1000r/min搅拌条件下加入到混合液I中，然后置于43°C水浴中在1000r/min条件下搅拌90?100分钟，得到混合液J ；
[0013](10)向混合液J中在1000r/min搅拌条件下滴加浓度为0.01mol/L的NaOH溶液和浓度为0.005mol/L的HCl溶液，使溶液的pH值为3.7?3.9，然后置于38°C水浴中在1000r/min条件下搅拌90?100分钟，得到混合液K ；
[0014](11)将1600mL去离子水在1000r/min搅拌条件下滴加到混合液K中，然后在1000r/min条件下搅拌8min，得到混合液L ；
[0015](12)将 10mL 浓度为 0.25mol/L 的 KNO3溶液和 10mL 浓度为 1.55mol/L 的Ca(NO3)2溶液充分混合，然后置于43°C水浴中恒温35分钟，得到混合液M ;
[0016](13)将60mL混合液L在1000r/min搅拌条件下滴加到混合液M中，然后在100r/min条件下搅拌8min，得到混合液N ；
[0017](14)将60mL混合液F在1000r/min搅拌条件下滴加到混合液N中，然后在100r/min条件下搅拌8min，得到混合液O ;
[0018](15)将10mL质量分数为5.5%的海藻酸钠溶液加热到75°C，然后加入10mL混合液0，在1000r/min条件下搅拌8min，在25°C水浴中恒温15小时后过孔径为5mm的筛子分离出固体颗粒，然后再用去离子水洗涤3次分离出的固体颗粒，冷冻干燥得到固体颗粒A；
[0019](16)将固体颗粒A在嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophiliaTY-Cl培养液中培养36h，然后取出风干，即可得到微生物菌剂，其中嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia TY-Cl 培养液的含菌量为 5X 10lclCFU/ml，培养液的组成为:麦芽糖 5g.ΙΛ NH4Cl:1.9g.ΙΛ KH2PO4:1.9g.L-1，MgCl2:0.27g.L-1，CaCl2.2H20:
0.13g ^L1O
[0020]制备微生物菌剂所用的菌株嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophiliaTY-C1，2015年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该中心位于北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研宄所，菌种保藏号为CGMCCN0.10636ο
[0021]所述菌株嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia TY-Cl是由如下方法分离得到的:
[0022](I)选取糖厂废水池底泥100g放置于4°C冰箱中保存备用；
[0023](2)向开口玻璃瓶中加入500?600mL基础培养基，在转速为100r/min的条件下搅拌40?50min后加入步骤(I)中的底泥250g ;然后置于温度为25?30°C的环境中在转速为100r/min的条件下搅拌富集驯化培养10d，在培养期间定期向玻璃瓶中加入基础培养基以维持玻璃瓶中泥浆系统的水土比例保持不变；其中基础培养基的组成为:NH4C1:
1.9g.ΙΛ KH2PO4:1.9g.L Λ MgCl2:0.27g.L Λ CaCl2.2H20:0.13g.I71;
[0024](4)向体积为100?200mL的锥形瓶中加入20mL浓度为5g/L的麦芽糖溶液；
[0025](5)向步骤(4)中的锥形瓶中入50mL基础培养基、0.5mL微量金属液和0.1mL维生素 c 溶液;其中微量金属液的组成为:CoCl2.6H20:33mg.L-1，CuCl2:0.26mg.L-1，H3BO3:4.0mg.ΙΛ MnCl2.4H20:22mg.?Λ Na2MoO4.2H20:2.0mg.?Λ NiCl2.2H20:3.0mg.?ΛZnCl2:2.7mg.L S
[0026](6)向步骤(5)中的锥形瓶内接入步骤(3)驯化的底泥0.35g，然后置于温度为25?30C转速为100r/min的振荡器中培养2?3天，每天打开瓶口一次以恢复锥形瓶内的溶解氧；按接种体积比为200?250:1的比例转入另一按步骤(4)至(5)处理后的锥形瓶内，当转接次数大于4之后即可获得菌群溶液；
[0027](7)向体积为500mL的锥形瓶内加入400mL基础培养基、1.0mL微量金属液、0.1mL质量浓度为lg/L的维生素c溶液，摇匀后作为液体培养基备用；
[0028](8)向体积为150mL的锥形瓶内加入50mL按步骤(7)配制的液体培养基和0.60g琼脂，然后在温度为121°C的高压锅中灭菌20分钟，在室温下冷却至65?70°C时，在超净工作台中将其倒入体积为160mL的培养皿中，为除去培养基表面多余的水分将该培养皿在超净工作台中放置2天；
[0029](9)在超净工作台中向步骤(8)中的培养皿中加入0.5mL浓度为5g/L的麦芽糖溶液，来回倾斜转动培养皿使麦芽糖溶液均匀分布；
[0030](10)向体积为25mL的锥形瓶内加入1mL按步骤(7)配制的液体培养基和0.25g琼脂，在温度为121 °C的高压锅中灭菌20分钟，在超净工作台中冷却至38?40°C ;
[0031](11)在超净工作台中向步骤(10)的锥形瓶中加入ImL步骤(6)得到的菌群溶液，摇匀后吸取ImL慢慢加入步骤(9)中的培养皿中，来回倾斜转动培养皿使接种有混合菌群的培养基溶液均勾分布；将培养皿放入温度为25°C的培养箱中培养观察，10?15天后便可发现有明显的菌落出现；
[0032](12)在超净工作台中挑取步骤(11)培养皿中的菌落，进行重复分离，分离纯化3个周期以上即可得到纯菌种。
[0033]本发明的有益效果是，制得的微生物菌剂能够以糖厂废液为原料生产有机肥，同时生产出的有机肥具有能够释放出氮、磷、钾等功能。