一种酶提取紫锥菊多糖的方法
【专利说明】
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技术领域
[0002] 本发明涉及多糖提取领域，特别涉及一种酶提取紫锥菊多糖的方法。
[0003]
【背景技术】
[0004]紫锥菊（Echinacea)是闻名世界的免疫药草，原产地位于北美和加拿大南部。其 为一种松果菊属植物，该属植物共有8个种和数个变种，目前作为药物开发的主要有3个 品种：紫松果菊（Echinaceapurpurea，即通常所说的紫锥菊），狭叶紫锥菊（Echinacea augustifolia)和白色紫锥菊（Echinacenpallida)。研究表明紫锥菊含有多种活性成分， 咖啡酸衍生物类、多糖和糖蛋白、烷酰胺类、生物碱类、多炔类、黄酮类、挥发油、留醇等，其 活性成分已成为当前研究热点。
[0005] 紫锥菊因具有显著的免疫增强活性，而被称为"天然抗生素"。在人类多种保健产 品及复方产品中都有应用。而相对紫锥菊中其他有效成分，紫锥菊多糖的研究相对较少， 研究较多的菊苣酸为主的活性成分提取过程复杂，所获得的活性成分产品原料量少且成本 高，虽然已有关于紫锥菊提取多糖的免疫活性研究的报道，但对其从药材到活性成分提取 的系统深入研究尤其是酶法处理提取多糖的系统研究至今未见报道，纯化方法也鲜有研 究。
[0006]
【发明内容】
[0007] 为了解决紫锥菊多糖提取时间过长，以及提取率低的问题，同时还能得到较好活 性成分，本发明提供了一种酶提取紫锥菊多糖的方法。
[0008] 为了达到上述目的，本发明提供了一种酶提取紫锥菊多糖的方法，其中，提取方法 包括以下步骤： ① 药材预处理：将紫锥菊地上部分粉碎过40-60目筛；加入脱脂溶剂，脱脂后，将脱脂 溶剂于20-80°C条件下挥干，处理后的药材备用； ② 提取：称取①处理得到的药材适量，加入药材15-25倍量的水，调pH为2-4,预热至 40°C_60°C后，加入药材0. 04-0. 06倍量的酶制剂，酶解时间50min-70min，80°C-100°C灭酶 10-20min，在 80°C-100°C继续搅拌保温l_2h; ③ 浓缩：离心，将上清液旋蒸减压浓缩至生药量I:0. 9-1. 5的浓缩液； ④ 醇沉：向浓缩液中加入3-4倍的无水乙醇，0-4°C条件下静置24-48小时； ⑤ 洗涤：将④得到的醇沉液抽滤，得到的沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤； ⑥ 干燥：将沉淀物用1-2倍量的水复溶，在140°C_160°C的条件下喷雾干燥得到紫锥菊 多糖。
[0009] 其中，所述脱脂溶剂为石油醚。
[0010] 其中，所述脱脂溶剂为石油醚、1，2-环氧丙烷、乙醚的混合，其质量份数比为： 1-2:0. 05-0. 1:0. 02-0. 08〇
[0011] 其中，所述酶制剂为果胶酶。
[0012] 其中，所述酶制剂为纤维素酶、果胶酶、蜗牛酶、植酸酶的混合，其质量份数比为： 0. 5-1:1-2:0. 1-0. 5 ：0. 05-0. 1〇
[0013] 其中，所述紫锥菊药材来源于紫锥菊属植物紫锥菊，取自盛花期到花后期的地上 部分。
[0014] 本发明的有益效果是：本制备方法，具有反应条件温和、提取时间短、提取率高等 优点，并且重现性高，稳定，制备得到的紫锥菊多糖溶解性较好，外观均一、水溶性好，并且 获得较好的活性组分，具有较好的免疫活性。
[0015] 说明书附图
[0016] 图IEPPSI分子量测定谱图； 图2EPPSII分子量测定谱图； 图3EPPSIII分子量测定谱图； 图 4EPPSI、EPPSII、EPPSIIIXRD图； 图5EPPSI红外谱图； 图6EPPSII红外谱图； 图7EPPSIII红外谱图； 图 8EPPSI的 13CNMR谱图； 图 9EPPSI的 13CNMR谱图； 图10不同浓度EPPS、EPPSI、EPPSII及EPPSIII对RAW264. 7细胞的影响； 图11不同浓度EPPS、EPPSI、EPPSII及EPPSIII对RAW264. 7外观形态的影响。
【具体实施方式】
[0017] 实施例1 提取方法包括以下步骤： ① 药材预处理：将紫锥菊地上部分粉碎过60目筛；加入脱脂溶剂，脱脂后，将石油醚于 60°C条件下挥干，处理后的药材备用； ② 提取：称取①处理得到的药材l〇〇g，加入1500g水，调pH为3,预热至50°C后，加入 药材5g果胶酶，酶解时间60min，80°C灭酶lOmin，在80°C继续搅拌保温l_h; ③ 浓缩：离心，将上清液旋蒸减压浓缩至生药量1 9的浓缩液； ④ 醇沉：向浓缩液中加入3倍的无水乙醇，4°C条件下静置24小时； ⑤ 洗涤：将④得到的醇沉液抽滤，得到的沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤； ⑥ 干燥：将沉淀物用1倍量的水复溶，在140°C的条件下喷雾干燥得到紫锥菊多糖。
[0018] 实施例2 提取方法包括以下步骤： ①药材预处理：将紫锥菊地上部分粉碎过40目筛；加入石油醚，脱脂后，将石油醚于 60°C条件下挥干，处理后的药材备用； ② 提取：称取①处理得到的药材l〇〇g，加入1500g水，调pH为2,预热至40°C后，加入 药材4g果胶酶，酶解时间50min，80°C灭酶lOmin，在80°C继续搅拌保温Ih; ③ 浓缩：离心，将上清液旋蒸减压浓缩至生药量1 9的浓缩液； ④ 醇沉：向浓缩液中加入3倍的无水乙醇，(TC条件下静置24小时； ⑤ 洗涤：将④得到的醇沉液抽滤，得到的沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤； ⑥ 干燥：将沉淀物用1倍量的水复溶，在140°C的条件下喷雾干燥得到紫锥菊多糖。
[0019] 实施例3 提取方法包括以下步骤： ① 药材预处理：将紫锥菊地上部分粉碎过60目筛；加入石油醚脱脂溶剂，脱脂后，将石 油醚于60°C条件下挥干，处理后的药材备用； ② 提取：称取①处理得到的药材l〇〇g，加入2500g水，调pH为4,预热至60°C后，加入 药材6g果胶酶，酶解时间70min，100°C灭酶20min，在100°C继续搅拌保温2h; ③ 浓缩：离心，将上清液旋蒸减压浓缩至生药量I:1. 5的浓缩液； ④ 醇沉：向浓缩液中加入4倍的无水乙醇，4°C条件下静置48小时； ⑤ 洗涤：将④得到的醇沉液抽滤，得到的沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤； ⑥ 干燥：将沉淀物用2倍量的水复溶，在160°C的条件下喷雾干燥得到紫锥菊多糖。
[0020] 实施例4 提取方法包括以下步骤： ① 药材预处理：将紫锥菊地上部分粉碎过60目筛；加入脱脂溶剂，脱脂后，将脱脂溶剂 于60°C条件下挥干，处理后的药材备用； ② 提取：称取①处理得到的药材l〇〇g，加入1500g水，调pH为3,预热至60°C后，加入 药材5g酶制剂，酶解时间60min，80°C灭酶10min，在80°C继续搅拌保温Ih; ③ 浓缩：离心，将上清液旋蒸减压浓缩至生药量1 :1的浓缩液； ④ 醇沉：向浓缩液中加入3倍的无水乙醇，4°C条件下静置24小时； ⑤ 洗涤：将④得到的醇沉液抽滤，得到的沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤； ⑥ 干燥：将沉淀物用2倍量的水复溶，在150°C的条件下喷雾干燥得到紫锥菊多糖。
[0021] 其中，所述脱脂溶剂为石油醚、1，2-环氧丙烷、乙醚的混合，其质量份数比为： 1-2:0. 05-0. 1:0. 02-0. 08〇
[0022] 其中，酶制剂为I. 19g纤维素酶、2. 38g果胶酶、I. 19g蜗牛酶、0. 24g植酸酶的混 合。
[0023] 实施例5 提取方法包括以下步骤： ① 药材预处理：将紫锥菊地上部分粉碎过60目筛；加入脱脂溶剂，脱脂后，将脱脂溶剂 于60°C条件下挥干，处理后的药材备用； ② 提取：称取①处理得到的药材l〇〇g，加入1500g水，调pH为3,预热至60°C后，加入 药材5g酶制剂，酶解时间60min，80°C灭酶10min，在80°C继续搅拌保温Ih; ③ 浓缩：离心，将上清液旋蒸减压浓缩至生药量1 :1的浓缩液； ④ 醇沉：向浓缩液中加入3倍的无水乙醇，4°C条件下静置24小时； ⑤ 洗涤：将④得到的醇沉液抽滤，得到的沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤； ⑥干燥：将沉淀物用2倍量的水复溶，在150°C的条件下喷雾干燥得到紫锥菊多糖。
[0024] 其中，脱脂溶剂为石油醚、1，2_环氧丙烷、乙醚的混合，其质量份数比为： 1:0. 05:0. 02。
[0025] 其中，酶制剂为I. 52g纤维素酶、3. 03g果胶酶、0. 3g蜗牛酶、0. 15g植酸酶的混合。
[0026] 实施例6 提取方法包括以下步骤： ① 药材预处理：将紫锥菊地上部分粉碎过60目筛；加入脱脂溶剂，脱脂后，将脱脂溶剂 于60°C条件下挥干，处理后的药材备用； ② 提取：称取①处理得到的药材l〇〇g，加入1500g水，调pH为3,预热至60°C后，加入 药材5g酶制剂，酶解时间60min，80°C灭酶lOmin，在80°C继续搅拌保温Ih; ③ 浓缩：离心，将上清液旋蒸减压浓缩至生药量1 :1的浓缩液； ④ 醇沉：向浓缩液中加入3倍的无水乙醇，4°C条件下静置24小时； ⑤ 洗涤：将④得到的醇沉液抽滤，得到的沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤； ⑥ 干燥：将沉淀物用2倍量的水复溶，在150°C的条件下喷雾干燥得到紫锥菊多糖。
[0027] 其中，所述脱脂溶剂为石油醚、1，2-环氧丙烷、乙醚的混合，其质量份数比为：2: 0? 1: 0? 08〇
[0028] 其中，酶制剂为I. 39g纤维素酶、2. 78g果胶酶、0. 7g蜗牛酶、0. 13g植酸酶的混合。
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