br>[0030] (2)反应结束后，将反应液离心，取上清液，将溶剂回收，得到的固体即为含二氢杨 梅素单酯化物的产物。
[0031] 本实施例中所用有机溶剂分别为乙腈、丙酮、四氢呋喃、叔丁醇、二甲基亚砜。不同 有机溶剂中，二氢杨梅素在固定化黑曲霉HGD0823脂肪酶催化下的转化率（通过HPLC测 定）见表1。
[0032] 表1.二氢杨梅素在不同有机溶剂中的转化率
[0033]
[0034] 实施例2
[0035] (1)将二氢杨梅素溶于2mL乙腈中，全部溶解后再加入乙酸乙烯酯（二氢杨梅素与 乙酸乙烯酯的初始浓度分别为20、500mmol/L)，再加入500U的脂肪酶，在温度35°C、摇床转 速200r/min的条件下反应24小时。
[0036] (2)反应结束后，将反应液离心，取上清液，将溶剂回收，得到的固体即为含二氢杨 梅素单酯化物的产物。
[0037] 本实施例中所用脂肪酶分别为游离的脂肪酶：沙门柏干酪青霉脂肪酶（LPC)、华 根霉脂肪酶（LipaseRC)、洋葱假单胞菌脂肪酶（PCL)、猪胰脂肪酶（PPL)、雪白根霉脂肪酶(LipaseRN)、扩展青霉脂肪酶（PEL)、黑曲霉HGD0823脂肪酶；固定化脂肪酶：Lip〇ZymeIM TL、Lipozyme?RM、N〇V〇zym435、固定化黑曲霉HGD0823脂肪酶。二氢杨梅素在不同脂肪酶 催化下的转化率见表2和表3 :
[0038]表2.二氢杨梅素在不同游离脂肪酶催化下的转化率
[0043] 实施例1和实施例2得到的产物经核磁共振（NMR)分析证实为二氢杨梅素3-0H 酯化的二氢杨梅素单酯化物（抗氧化活性最弱的羟基酯化，如式II)，其产率在2~40%之 间。在乙腈中用1*^〇27111435脂肪酶产率为40%左右，用固定化黑曲霉1?00823脂肪酶产率 为25%左右。
[0044]
[0045]1HNMR(6 0OMHz,CD30D/TMS) : 8I. 28 (s, 1H,OH19) ,I. 97 (s, 3H,H25) ,4.20(d,J= 2. 6Hz, 1H,H14) , 4. 46 (d,J= 11. 3Hz, 2H,H2+H6) , 5. 23 (d,J= 2. 6Hz, 1H,H7+H9) , 5. 90 (d, 2H,H16) , 5. 89 - 5. 99 (d, 1H,OH20+OH22) , 6. 53 (d,J= 7. 7Hz, 1H,OH21), 6. 53 (d,J= 7. 7Hz, 1H,OH23).
[0046]13CNMR(151MHz,CD30D/TMS) :S21. 70 (C25), 73. 34 (C16), 83. 13 (C14), 96. 46 (C6), 97. 42 (C2), 102. 05 (C4), 107. 85 (C7,C9), 128. 24 (C8), 134. 50 (C11), 147. 00 (C10,C12), 164. 59 (C5), 165. 50 (C3), 168. 76 (C1), 196. 71 (C15), 198. 48 (C24).
[0047] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在于：所述的方法为 用游离或固定化脂肪酶催化二氢杨梅素与酰基供体合成二氢杨梅素单酯化物；所述的 二氢杨梅素单酯化物为二氢杨梅素的3位羟基酯化。2. 根据权利要求1所述的利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在 于： 所述的游离脂肪酶包括：沙门柏干酪青霉脂肪酶、华根霉脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪 酶、猪胰脂肪酶、雪白根霉脂肪酶、扩展青霉脂肪酶、黑曲霉HGD0823脂肪酶； 所述的固定化脂肪酶包括：LipozymeIM TL、LipozymeIM RM、Novozym 435、固定化黑曲 霉HGD0823脂肪酶。3. 根据权利要求2所述的利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在 于：沙门柏干酪青霉脂肪酶、华根霉脂肪酶、洋葱假单胞菌脂肪酶、猪胰脂肪酶、雪白根霉脂 肪酶、扩展青霉脂肪酶、LipozymeIM TULipozymeIM RM、Novozym 435直接从商家购买得到； 黑曲霉HGD0823脂肪酶由黑曲霉HGD0823发酵制备得到；固定化黑曲霉HGD0823脂肪酶采 用吸附法固定得到。4. 根据权利要求3所述的利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在 于：吸附法固定脂肪酶的方法包括如下步骤：①将粗酶粉溶于甘氨酸-氢氧化钠缓冲液中， 在30~40°C下以150~200r/min搅拌1~2h ;②在4~KTC下以5000r/min离心，取上 清液；③将D4020树脂用95%乙醇浸泡24h后，用去离子水洗至滤液澄清为止，将其添加到 ②上清液中；④在35~40°C、150~200r/min下，振荡4~5h后，用砂芯漏斗过滤，用甘氨 酸-氢氧化钠缓冲液冲洗3次，抽滤后冷冻干燥得到固定化脂肪酶，在0~4 °C保存。5. 根据权利要求1所述的利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在 于包括如下步骤： (1) 将二氢杨梅素与酰供体溶于有机溶剂中，再加入游离脂肪酶或固定化脂肪酶，于 30~40°C、200~300r/min摇床反应1~2天； (2) 反应结束后，将反应液离心，取上清液，将溶剂挥发，得到的固体即为含二氢杨梅素 单酯化物的产物。6. 根据权利要求5所述的利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在 于：步骤（1)中所述的酰基供体包括：乙酸乙烯酯、丙酸乙烯酯、丁酸乙烯酯、辛酸乙烯酯、 苯甲酸乙烯酯、硬脂酸乙烯酯。7. 根据权利要求5所述的利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在 于：步骤（1)中二氢杨梅素与酰供体的摩尔比为1:20~30。8. 根据权利要求5所述的利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在 于：步骤（1)中所述的有机溶剂包括：乙腈、丙酮、四氢呋喃、叔丁醇、二甲基亚砜。9. 根据权利要求5所述的利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，其特征在 于： 步骤（1)中所述的脂肪酶的量为250U/mL。
【专利摘要】本发明公开了一种利用脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物的方法，属于生物催化领域。本发明方法包括如下步骤：将二氢杨梅素与酰供体溶于有机溶剂中，再加入游离或固定化脂肪酶，于30～40℃、200～300r/min摇床反应1～2天；反应结束后，将反应液离心，取上清液，将溶剂挥发，得到的固体即为二氢杨梅素单酯化物。本发明首次通过游离或固定化脂肪酶催化合成二氢杨梅素单酯化物，产物的酯化位置在抗氧化活性最低的3-羟基，最大限度的保留了二氢杨梅素的抗氧化活性的同时提高了其油溶性，使其实用价值更大。此方法具有催化剂价格低廉、反应条件温和、反应专一性高、选择性高、脂肪酶可多次重复利用、生产成本低等优点。
【IPC分类】C12P17/06
【公开号】CN105087707
【申请号】CN201410222489
【发明人】李卫, 吴欢, 李斌, 万端极
【申请人】湖北工业大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月23日