蔗糖充分溶解后定容至l〇〇ml，配制成50mg/L硼酸+100g/L蔗糖溶液，作为培养液待用；
[0041] (3)将0? 8g琼脂粉放入250ml的锥形瓶中，然后将步骤（2)配制的培养液100ml 倒入锥形瓶中，待琼脂粉充分溶解后，用报纸包住瓶口，并用橡皮筋捆扎。锥形瓶放在微波 炉中煮1~2min，间隔30~40s取出摇晃一次，直至煮沸，煮好的培养基在凝固之前倒入9 个90mm培养皿中，盖上培养皿的盖子，自然冷却，配制成50mg/L硼酸+100g/L蔗糖+8g/L 琼脂的培养基，待用。
[0042] 2. 2花粉萌发培养
[0043] 用移液枪分别吸取300y1 2. 1制备的培养液到3个装有花粉的离心管，轻轻摇 晃，使花粉溶于溶液中，形成花粉液，再用移液枪把每个花粉液分别喷到3个培养基的表 面，并用干净的推玻棒将花粉液均匀铺开，盖上培养皿盖子，用封口膜封口，编号，置于25°C 人工气候培养箱中恒温、恒光照培养。
[0044] 2. 3花粉活力检测
[0045] 待花粉萌发后，将培养皿置于100倍倒置显微镜下观察，每个培养皿随机选取3~ 6个不重叠的视野，用显微镜自带软件拍照（如图1所示），统计每个培养皿的花粉的数量、 萌发的花粉的数量，统计花粉活力，并要求每个培养皿统计的花粉总数100个以上，并计算 出此批花粉的活力。计算公式：花粉活力=萌发的花粉的数量/花粉的数量X100%，计算 萌发的花粉的数量时，花粉管长度超过花粉粒直径的花粉则视为萌发的花粉。
[0046]3、检测结果
[0047] 3. 1培养基的筛选结果
[0048] 以相同琼脂浓度，不同的硼酸和蔗糖浓度作培养基，用上述方法收集的编号为混 合1号的花粉按上述"2花粉活力检测"所述的方法开展木棉花粉活力测定，结果表明： 50mg/L硼酸+100g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基活力最高，平均为73. 9%，其次是25mg/L硼 酸+100g/L蔗糖+8g/L琼脂的培养基，平均为69. 86%(表1)。
[0049] 表1木棉花粉培养基试验
[0050]
[0051] 3. 2花粉萌发培养的时间筛选结果
[0052] 以2. 1配制的50mg/L硼酸+100g/L蔗糖溶液为培养液，以2. 1配制的50mg/L硼 酸+l〇〇g/L蔗糖+8g/L琼脂的为培养基，按上述"2花粉活力检测"所述的方法开展花粉活 力测定。木棉花粉管长度超过花粉粒直径则视为萌发的花粉；由于花粉萌发存在一定的时 间差异，萌发结果显示（表2)，当大部分花粉管长度为花粉粒直径6~8倍时，即培养2~ 3h为观测花粉萌发的最佳时间，即花粉萌发培养的最佳时间为2~3h。
[0053] 表2花粉萌发最佳观察时间试验结果
[0054]
[0055] 3. 3花粉活力检测的结果
[0056] 用上述方法收集的编号为FS16-13和混合1号的花粉分别在50mg/L硼酸+100g/ L蔗糖+8g/L琼脂的培养基用2.2所述的方法培养2~3h，即大部分花粉管长度为花粉粒 直径的6~8倍时，以2. 3所述方法检测花粉活力，检测结果如表3所示。
[0057] 表3固体萌发法花粉活力测定结果
[0058]
[0059] 4花粉保存
[0060] 在装有本批次木棉花粉的信封上标明花粉活力、检测时间、检测人员等内容； 在-20°C冰箱内保存，如果新鲜花粉活力达76. 3%以上，含水量降到20%时，保存半年花粉 活力达58. 1 %以上，保存1年花粉活力仍有51. 2%以上（表4)，可满足杂交育种的需求。
[0061] 表4在-20°C保存条件下花粉活力（％ )
[0062]
[0063] 以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实 施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存 在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0064] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并 不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来 说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护 范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 花粉收集：采集花蕾，将花粉囊中的花粉于离心管中脱粒，干燥； (2) 培养基的配制：用蒸馏水配制琼脂培养基，其中含硼酸25~50mg/L、蔗糖90~ 110g/L、琼脂7~9g/L，将培养基装入培养皿待用； (3) 花粉萌发培养：将步骤（1)所得花粉溶于培养液中，形成花粉液，再将花粉液喷到 步骤（2)制备的培养基的表面，均匀铺开，恒温、恒光照培养；所述培养液为25~50mg/L的 硼酸与90~110g/L的蔗糖溶液； (4) 花粉活力检测：将培养皿置于倒置显微镜下观察，花粉管长度大于花粉粒直径的 花粉视为萌发的花粉，每个培养皿随机选取3~6个不重叠的视野，统计每个培养皿的花粉 的数量、萌发的花粉的数量，计算花粉的活力。2. 根据权利要求1所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，花粉收集包括以下 步骤： (1) 花蕾采集：3~4月，剪取蕾体饱满、无缺损、大蕾期的木棉花蕾，用封口袋装好，备 用； (2) 花粉脱粒：将花瓣先端撕开，从花粉囊下方0. 18~0. 22cm处剪断，将花粉囊置于 培养皿中，放入硅胶干燥器中干燥，使花粉囊裂开，将裂开的花粉囊装入离心管，于漩涡混 合器中振荡，使花粉粒脱离花粉囊而粘在离心管内壁，停止转动，倒掉空花粉囊； (3) 花粉干燥：将粘有花粉的离心管放回硅胶干燥器里干燥。3. 根据权利要求1或2所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，所述琼脂培养基 含硼酸50mg/L、蔗糖100g/L、琼脂8g/L。4. 根据权利要求1或2所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，所述琼脂培养基 含硼酸25mg/L、蔗糖100g/L、琼脂8g/L。5. 根据权利要求1或2所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，花粉萌发培养步 骤中所述培养的时间为2~3h。6. 根据权利要求1或2所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，花粉萌发培养步 骤中所述培养的温度为23~27°C。7. 根据权利要求2所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，花粉脱粒步骤中所 述干燥的时间为9~10h。8. 根据权利要求2所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，花粉脱粒步骤中所 述漩涡混合器的转速为2700~2900转/分钟。9. 根据权利要求2所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，花粉脱粒步骤中所 述漩涡混合器振荡的时间为2~3分钟。10. 根据权利要求2所述的木棉花粉活力的检测方法，其特征在于，花粉干燥步骤中所 述干燥为干燥至花粉的相对含水量为20~25%。
【专利摘要】本发明涉及一种木棉花粉活力的检测方法，包括以下步骤：(1)收集花粉；(2)配制培养基：用蒸馏水配制琼脂培养基，其中含硼酸25～50mg/L、蔗糖90～110g/L、琼脂7～9g/L，将培养基装入培养皿待用；(3)花粉萌发培养：将花粉溶于培养液中，形成花粉液，再将花粉液喷到培养基的表面，均匀铺开，恒温、恒光照培养；(4)花粉活力检测：培养完毕后，将培养皿置于倒置显微镜下观察，统计每个培养皿的花粉的数量、萌发的花粉的数量，计算花粉的活力。该方法结果直观，数据可靠，可在15h内检测出新鲜木棉花粉的活力，对木棉的杂交制种、培育木棉优良新品种具有重要现实意义。
【IPC分类】C12Q1/02
【公开号】CN105112492
【申请号】CN201510586503
【发明人】朱报著, 潘文, 张方秋, 黎土兰
【申请人】广东省林业科学研究院
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月15日