一株广谱抗真菌芽孢杆菌及其在防治小麦赤霉病中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及芽孢杆菌，尤其是涉及一株广谱抗真菌芽孢杆菌DY26-010及其在防 治小麦赤霉病中的应用。
【背景技术】
[0002] 小麦赤霉病是由镰刀菌属真菌引起的小麦一大病害，其发生不仅会引起小麦减 产，而且由于镰刀菌产生的毒素（如DON等）威胁人及动物安全。小麦花期降雨日数 多，而小麦赤霉病受气候因素的影响较大，降雨和气流给小麦赤霉病的发生和流行提供 有利条件，也给化学防治带来许多困难（陈华保，肖方琼，谢婷，等.小麦内生菌对小 麦赤霉病菌的抑制活性[J].西北农业学报，2011，20(7) :46-49)。另外，在选育抗病品 种方面常规育种存在一定难度，一直未获得突破性进展（Bai G，Shaner G. Management and resistance in wheat and barley to Fusarium head blight 1[J]. Annu. Rev. Phytopathol.，2004, 42:135-161)。实际生产中使用多菌灵或其复配剂来防治赤霉病，虽然 效果较好，但连续使用后存在产生抗药性的问题。因此，继续使用多菌灵防治小麦赤霉病将 存在着防治失败的潜在威胁。
[0003] 随着综合防治措施的不断完善，生物防治开始在植物病害防治中应用，为传统的 病害防治策略提出新的方向。植物病害生物防治是指利用拮抗作用的微生物或微生物代谢 产物对植物病害进行有效防治的方法；从实质上说，就是利用微生物种间的抗生、竞争、重 寄生，或者通过微生物代谢产物的溶菌作用等，来抑制某些病原菌的活动甚至杀死（李凯， 袁鹤.植物病害生物防治概述[J].山西农业科学，2012, 40(7) :807-810)。由于其来源的 天然性以及对人畜和环境低毒等特点，而越来越受到重视。
[0004] 在生物防治的活动中，拮抗细菌及其代谢产物都起到了重要作用。目前，应用最多 的生防细菌主要是芽孢杆菌，芽孢杆菌是一个多样性十分丰富的微生物类群，分布广泛。应 用的芽胞杆菌主要有：枯草芽孢杆菌（B. subtilis)、蜡状芽孢杆菌（B. cereus)、多粘芽孢 杆菌（B. polymyxa)、巨大芽孢杆菌（B. megaterium)以及短小芽孢杆菌（B. pumilis)等（周 晓梅，刘强，王瑛璐.拮抗菌生物防治农作物病害的研究进展[J].吉林师范大学学报： 自然科学版，2010, 31 (4) :36-39)。已有大量研究表明芽胞杆菌可通过拮抗作用、竟争作用 抑制病原菌生长，分泌抗菌物质抑制病原菌生长，同时诱导植物获得系统抗性以达到抑制 植物病原菌的效果（Smilanick J L，Margosan D A，Mlikota F，et al. Control of citrus green mold by carbonate and bicarbonate salts and the influence of commercial postharvest practices on their efficacy[J]? Plant Disease, 1999,83(2):139-145)〇 尤其是来自海洋极端环境条件下的芽孢杆菌，其生长条件、代谢类型和产物与陆地来源的 不同，从而有可能开发出更具有应用价值的芽孢杆菌。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的之一在于提供一株广谱抗真菌芽孢杆菌（Bacillus sp. )DY26_010。
[0006] 本发明的目的之二在于提供一种广谱抗真菌芽孢杆菌（Bacillus sp.)DY26-010 在制备防治小麦赤霉病发酵上清液中的应用。
[0007] 芽孢杆菌（Bacillus sp. )DY26_010分离自中国大洋第26次科学考查所采集的沉 积物样品（S003站点；W63° 45. 3496'，S3。39. 8693');该菌已于2015年6月27日保 藏于中国典型培养物保藏中心，中国典型培养物保藏中心的地址为中国，武汉，武汉大学， 邮编430072,保藏中心保藏编号为CCTCC NO :M 2015407。
[0008] 通过16S rDNA同源性分析，以芽孢杆菌（Bacillus sp.)DY26-010菌株的基因组 DNA为模版扩增其16S rDNA序列，PCR产物为单一条带，回收纯化后，进行DNA测序。将 DY26-010的16S rDNA序列，与美国国家生物技术信息中心（NCBI)GenBank数据库中相应的 序列进行比对分析，发现其与芽孢杆菌属（Bacillus sp.)具有99%的序列相似性。其16S rDNA序列的GenBank登录号为KT270353。
[0009] 所述芽孢杆菌（Bacillus sp. )DY26_010的16S rDNA部分序列如下：
[0010] 1 TACCTCACCG ACTTCGGGTG TrAC八八八CTC TCGT(A SI T(.n，ArAAGGC CCXKKjAACCn，ATTCA(.、C(X、G (.K'ATGCTGM 101 TA(.;CC"\TT(.、C A(jCTTC/\C(.K、八(.;TC(jAGTT(.K、八(jACTGCL;/\ TCCG八八CTG八 tsi GAACAGATTT GT(KK.iATT(.i(.i (，TTAAC(.、T(.、G (:GGTTT(，(.iCl- G 201 CTGTCTATTG TAGCACX:iT(.iT GTAGCXX.、八⑷^ 251 TGAC(nrATC CCC-V\(TTK、C T(T(.i(.iTTT(.iT CACCCKXAGT CACCTTA(i^^ 301 T'GCt'CAACT(.;八AT(K'TGGCA An_A A(.L\r('A A(.K.K汀 :3 51 ACrmACCCA. ACATCTCACG ACACGAGCTGACGmAMiCA.TGCACCACCT 401 GTCACTCTGC CC'C'CGAAGGG GAC'GTC'CTAT C'TC'TMK 451 GTC A AG ACTT ⑶TAAGGTTC
[0011] 501 CCAC.CGCTTG TC;C(-KiGCCCC C(爪、八八TTC.门 551 (X(;TACT(XC CAGGC、GGA(;T GC、TTAAT(K'(j 601 C(j(-i八八八CCCC CTAAC'ACTT.'UjCAC'TC'ATCX! TTTACGG⑶ 651 G(.H'ATCTAAT CCT(.iTTC(.K:T CXXTACGCTT TC(iCTC(.T(;A 70.1 CAGACf'AGAG AGTCG(:(.TTC 151 TTTCA(、C，GCT ACACGTCiUAA TTCCACTCTC CTCTTC，TCiCA CTC八八GTTCC、 獨i. a.'AGTrrccA ATGACCCTa.、ra.K」i%
[0012] 所述芽孢杆菌（Bacillus sp.)DY26-010可在制备防治小麦赤霉病发酵上清液中 的应用。
[0013] 所述小麦赤霉病包括但不限于镰刀菌、香蕉炭疽菌、宛氏拟青霉、核盘菌、长柄链 格孢、绿色木霉、立枯丝核菌、互生链格孢、灰霉菌、胶孢炭疽菌。
[0014] 所述防治小麦赤霉病发酵上清液的制备方法如下：
[0015] 将芽孢杆菌（Bacillus sp.)DY26-010在LB培养基中活化培养，再将活化培养后 的菌株接种到LB培养基中进行扩大培养，离心除去菌体，即得防治小麦赤霉病发酵上清 液。
[0016] 所述LB培养基的组成可为：氯化钠10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L， 121°C高灭压菌20min。
[0017] 所述活化培养的条件可为：在28~30°C，180~220r/min下，培养12~24h;所 述扩大培养的条件可为：在28~30°C，180~220r/min下，培养50~60h。
[0018] 所述离心除去菌体的条件可在10000r/min下离心15~20min。
[0019] 所述防治小麦赤霉病发酵上清液的使用方法如下：将防治小麦赤霉病发酵上清液 喷施在小麦植株上。
[0020] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0021] (1)本发明所述的所述的广谱抗真菌芽孢杆菌（Bacil