一种长效净水剂及其生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用于水产养殖、环保的微生物净水剂及其生产方法。
【背景技术】
[0002]本发明所述的微生物净水剂属于EM的一种类型。EM是EffectiveMicroorganisms的英文缩写，即有效徽生物菌群，它最先是日本比嘉照夫教授于80年代初发明创造的，当时是由10个属、80多种微生物组成的一种复合微生物制剂。由于该产品是有益微生物的复合体，因此它不含任何化学有害物质、无毒副作用、不污染环境。EM技术可用于提高农业、牧业、林业、水产业的生产能力，在治理环境、保护环境以及人类保健等方面，都有着纳豆的、不可替代的作用和潜力，被誉为目前影响范围最大、应用领域最广、综合性最强的高新生物工程技术，具有显著的经济效益、生态效益、社会效益和广泛的应用前景。目前，EM技术不仅在日本已经广泛推广应用，在美国、泰国、巴西、法国等90多个国家和地区也已向农林枚渔、环保、医疗、工业等领域纵深挺进。我国从1991年开始引进，目前己在广东、江西、四川、福建等省己进行了很多生产应用。EM技术在养殖业上具备以下功能:①明显提高日增重；②对疫病有奇特的防治效果；③明显提高繁殖率消除畜禽粪便恶臭。EM可以使A便循环利用。将农、林、牧、渔等交织起来。形成自我净化、充分利用的高效综合环保链。同时环保方面也具有强大的功效:净化水质，使水循环利用，分解残留的农药。净化农村井水或池塘的水污染，以便饮用更健康的水，保证人类健康，减少病原性衍生物和不良藻类，增加生物相，减少污泥的产生，减少恶臭。
[0003]在具体进行EM生产时。根据产品的具体用途，进行微生物菌群的优化，同时具体的生产方法也多种多样，总的目标都是为了降低生产成本，生产方法尽可能简单，在尽可能短生产周期生产出高浓度的有效微生物菌群。现有的微生物净水剂生产工艺中。为了培养、生产的简便，通常采用单一、或两到三个菌种，在一定条件下进行发酵，由于采用的培养基通用性较差，使得具有不同生长特性的不同菌种生长程度差异较大，经常有某一菌种有一定程度的生长，而其它菌种较难生长:即使是单一菌种，由于培养基搭配和发酵工艺的不合理，其菌浓度也不高，发酵周期也相对偏长，因而使得微生物净水剂的使用效果不太显著，同时保质时间也较短，因而现有技术极大地限制了活菌微生物净水剂这类功能显著的产品的生产和推广应用。
[0004]本发明的目的是提供一种具有高浓度有效微生物菌群的长效微生物净水剂及其生产方法，以克服现有技术存在的不足和问题。
[0005]本发明所提供的长效微生物净水剂是由六种不同微生物通过大种量接种、发酵而制得的微生物发酵液，在该发酵液中含有枯草形芽孢杆菌ASI。813、纳豆芽孢杆菌ACCC10008,萤光假单胞杆菌AS1.867，恶臭假单胞菌AS1.1003，链杆菌AB93179和白地霉AS21175，六种菌的总菌数达1.0 X 109cfu/ml以上。
[0006]所述的六种菌的具体资料是:1、枯草形芽孢杆菌AS 1.813 (Bacilluslicheniformis)，保藏于CGMCC，中国普通嫩生物菌种保藏中心、:纳豆芽孢杆菌ACCC10008 (Bacillusmegatherium de Bary)保藏于CGMCC,中国普通微生物菌种保藏中心:白地霉AS21I75 (Geotrichum candidum Link)，保藏于CGMCC,中国普通微生物菌种保藏中心；恶臭假单胞菌AS 1.1003 (Pseudomonas putida),保藏于CGMCC,中国普通微生物菌种保藏中心；链杆菌AB93179 (Streptobacillus sp)。保藏于CCTCC，中国典型培养物保藏中心；萤光假单胞杆菌 AS1.867 (Pseudomonas fluorescens Migula),保藏于 CGMCC,中国普通微生物菌种保藏中心。
[0007]上述菌种在《中国菌种目录》(中国微生物菌种保藏管理委员会编著，1983年，轻工业出版社出版)和《中国典型培养物保藏中心培养物目录》(一九九八年九月武汉大学，主编:陶天申)中已公开记载，其中:枯草形芽孢杆菌AS 1.813 (Bacilluslicheniformis)、纳豆芽抱杆菌 ACCC10008 (Bacillus megatherium de Bary)、白地霉AS21175 (Geotrichum candidumLink),恶臭假单胞菌AS1.1003 (Pseudomonas putida)。萤光假单胞杆菌AS1.867 (Pseudomonasfluorescens Migula)分别记载在《中国菌种目录》的P55, P57, P293.P166, P165 等页面:
链杆菌AB93179 (Streptobacillus sp。记载在《中国典型培养物保藏中心培养物目录》的P115页面。
[0008]本发明的长效微生物净水剂采用以下方法生产制备:以枯草形芽孢杆菌ASI。813、纳豆芽孢杆菌ACCC10008，萤光假单胞杆菌AS 1.867，恶臭假单胞菌AS1.1003，链杆菌AB93179和白地霉AS21175为菌种，将所述的六种菌种分别在斜面、一级液体活化培养后，在种子味进行混合活化培养，再接入大发酵罐中进行混合发酵培养，使六种菌的总菌数达5.0 X 109cfu/ml 以上。
[0009]所述的六种菌种在种子罐活化培养的工艺中，每种菌以基本相同的接种量接种。
[0010]在大发酵罐进行发酵培养的工艺中，最好采用成份如下的培养基(按每升培养基所含克重量计算):葡萄糖15-25，尿素1-3，酵母粉2-5，玉米浆4_8，蛋白胨8_12酵母膏8-12，pH7.0 ;并在发酵过程中采用连续流加高浓度的营养补充培养基，其组分为(重量百分比):葡萄糖35-45，酵母膏15-25，ρΗ7.0.本发明的具体发酵工艺过程为:
a)分别打开枯草形芽孢杆菌AS1.813、纳豆芽孢杆菌ACCC 10008、白地霉AS21175，恶臭假单胞菌AS21003、链杆菌AB93179六种菌种的冻干管，用常规方法挑选生长最快、菌落最大的单菌落，用接种针接种于保藏斜面上培养:
b)斜面菌种活化:将培养好的保藏斜面种分别划线于以上新配制的上述不同生产斜面上进行活化:
c)菌种的一级液体活化:将上述培养好的活化斜面用接种环分别接种一环于不同一级液体活化培养基中进行培养，使液体种的菌数达20 X 109cfu/ml以上:
d)种子堵二级液体活化种培养:将上述分别培养好的六种一级液体活化种摇匀后在无菌条件下等量混合，然后按1-5%接种量，接入种子罐二级液体活化培养基中，通气培养8-10小时，待苗数达1.0 X 109cfu/ml以上，停止培养；
e)大发酵罐中的培养:将上述培养好的二级液体活化种按10-20%的接种量接入装有己消毒好培养基的发酵姚中进行培养，