30-36 °C。转速180r250/m，风量为20-30M3空气/M3培养基/小时，进行通气培养6-8小时，同时发酵1-2小时后开始流加，流加速度按0.01-0.03M’营养补充培养基/Μ3发酵液/小时。发酵4-5小时后停止流加。待菌数达5.0X 109cfu/ml以上，停止发酵培养。
[0011]本发明通过六种不同微生物均大种量接种、发酵过程中适当流加灭好菌、溶解好的高浓度葡萄糖和酵母膏溶液，使发酵液中碳源和氮原营养相对恒定，同时，发酵全过程采用恒温、大风量工艺，从而使得六种菌均能均衡、快速生长，该生产方法发酵工艺简单、发酵周期短、发酵完毕主要发酵营养成份基本消耗完、发酵结束后每种菌的浓度菌达109cpufml以上。该技术生产出的徽生物净水剂产品由于具有以上特点如六种菌的浓度均较高、产品中残留的主要发酵营养成份少等，因而具有保质期长、使用效果显著及长效性等优点。该技术有效地克服了现有技术的不足。该产品在水产中用于养殖水体的水质净化，淡、海水养殖全过程均可使用。每亩(水深1米)首次施放1公斤，以后根据水质污染程度的轻重，每20-30天施放0.5-1公斤。可以长时间保持水质状况良好。环保方面，根据水质污染程度的轻重，施加不同的用量。
【具体实施方式】
[0012]用6M3发酵罐生产长效微生物净水剂，工艺过程如下:
1.活化斜面菌种:用接种针将保藏的菌种①枯草形芽孢杆菌AS1.813 (Bacilluslicheniformis)，②纳豆芽抱杆菌 CCC10008 (Bacillus megatherium deBary),③萤光假单胞杆菌ASI。867 ( Pseudomonas fluorescens Migula)，④恶臭假单胞菌 AS1.1003 (Pseudomonas putida),⑤链杆菌 AB93-79 (Streptobacillus sp。)分别接种一环划线于以上新配制的上述生产斜面上，生产斜面的化学组成如下(g/L):葡萄糖20.尿素4.0，玉米浆6.蛋白胨10，酵母膏10，琼脂20，pH7.0.每个种各接3支，于32°C培养18小时:用接种针将保藏的菌种白地霉AS21175分别接种一环划线于以上新配制的上述生产斜面上，接3支生产斜面，生产斜面的化学组成如下(g/L): 6Bx°麦芽汁1000ml，琼脂20，pH自然，于28°C培养24小时。
[0013]2菌种的一级液体活化:将培养好的活化斜面用接种环分别接种一环于上述不同一级液体活化培养基中，其中①-⑤号种一级液体活化培养基化学组成如下(g/L):葡萄糖20，尿素4.0，玉米浆6，蛋白膝胨10，酵母膏10，pH7.0.培养基装于1000ml三角瓶中，三角瓶装蛋为40ml，每个种各接18瓶，于33°C往复式摇床振荡培养15小时。摇床转速为110r/m，冲程为75mm，使液体种的菌数达20 X 109cfu/ml以上；⑥号种白地霉AS21175用接种环接两环于相对应的一级液体活化培养基中，液体活化培养基装于1000ml三角瓶中，三角瓶装量为100ml，接7瓶，于28°C往复式摇床振荡培养24小时，摇床转速为120r/m，冲程为75mm，使液体种的菌浓度达20 X 109cfu/ml以上。
[0014]3、二级液体活化种(600L种子罐)的培养:将上述分别培养好的六种一级液体活化种摇匀后在无菌条件下每个种取670ml等量混合，然后接入二级液体活化培养基(种子罐)中，二级液体活化种培养基的化学组成如下(g/L)葡萄糖20，尿素2，酵母粉5，玉米浆10，蛋白胨10.酵母膏10，pH7.0.600L种子罐装400L培养基，33°C，转速200r/m，风速为2M3/1小时，进行通气培养，保持罐压0.1 Mpa ;从六小时开始，通过镜检结合光密度(0D)检测菌浓度，持菌数达1.0 X 109cfu/ml以上，停止培养。
[0015]4、复合微生物制剂在大发酵堵中的培养:将上述分别培养好的二级液体活化种400L接入装有4 Μ3已消毒好培养基的发酵罐中进行培养，发酵培养基组分(g/L):葡萄糖20，尿素2酵母粉3，玉米浆6，蛋白胨10，酵母膏10，pH7.0.34°C，转速220r/m。风速为140M3空气/小时，进行通气培养6-8小时，同时发酵1.5小时后开始流加，流加速度按0.041M，营养补充培养基/小时，发酵5小时后停止流加，保持罐压0.1 Mpa。从4小时开始，待菌浓度达5.0 X 109cfu/ml以上，停止发酵培养。
[0016]5、制成成品:停止发酵培养后，首先关小通风，保持罐压0.02Mpa，转速从220r/m降为lOOr/m。开始放罐，同时采用无菌操作、用4条软管直接、快速放入不同体积的包装罐中。
【主权项】
1.一种长效净水剂及其生产方法,为一种微生物发酵液，其特征在于其中含有枯草形芽孢杆菌AS1.813、纳豆芽孢杆菌.萤光假单胞杆苗AS 1.867，恶臭假单胞菌AS1.1003，链杆菌AB93179和白地碟AS21175，六种菌的总菌数达5.0 X 109cfu/ml以上。2.—种权利要求1所述的长效净水剂的制备方法，其特征在于以枯草形芽孢杆菌ASI。3.813、纳豆芽孢杆菌ACCC 10008，萤光假单胞杆菌AS1.867，恶臭假单胞菌AS1.1003，链杆菌AB93179和白地霉AS21175为菌种，将所述的六种菌种分别在斜面、一级液体活化培养后，在种子雄进行混合活化培养，再接入大发酵罐中进行混合发酵培养，使六种菌的总菌数达 5.0 X 109cfu/ml 以上。4.根据权利要求2所述的长效微生物净水剂的制备方法，其特征在于所述的六种菌种在种子罐活化培养的工艺中，每种菌的接种量基本相同。
【专利摘要】本发明提供一种长效净水剂及其生产方法，所述的长效微生物净水剂为一种微生物发酵液，其中含有枯草形芽孢杆菌AS1.813、纳豆芽孢杆菌ACCC10008，荧光假单胞杆菌AS1.867、恶臭假单胞菌AS1.1003、链杆菌AB93179和白地霉AS21175，六种菌的总菌数达5.0X109cfu/ml以上。其制备方法是以所述的六种菌为菌种，将所述的六种菌种分别在斜面、一级液体活化培养后，在种子罐进行混合活化培养，再接入大发酵罐中进行混合发酵培养，发酵期间适当流加补充营养液，使六种菌的总菌数达5.0X109cfu/ml以上。该产品可用于养殖水体的水质净化，淡、海水养殖全过程均可使用。
【IPC分类】C12R1/40, C12R1/07, C02F3/34, C12R1/125, C12N1/20, C12R1/39, C12N1/14, C12R1/01, C12R1/645
【公开号】CN105255751
【申请号】CN201410341452
【发明人】张芳
【申请人】重庆市昂多环境治理有限责任公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2014年7月18日