治疗肽的制作方法
【专利说明】治疗化 发明领域
[0001] 本发明设及可用于治疗肥胖症和代谢病症的治疗性肤。更具体地，本发明设及肤 ΥΥ(ΡΥ巧的新颖类似物和它们的用途。
[000引发明背景 肥胖症在美国的发病率正在增加，在2009-2010年，35. 7%的成人被认为是肥胖的度ΜΙ> 30)，且68. 8%的成人被认为是超重的度ΜΙ> 25)。参见，例如，Flegal等人（2012) /AW307巧）：491-7。全世界，超过3亿人被认为是肥胖的。肥胖症相关的疾病（包括2型 糖尿病、高血压、屯、脏病、关节病和一些类型的癌症）的患病率已经随着人口生长较重而增 加。
[0003] 通过膳食和锻炼预防肥胖症对于控制运些趋势是至关重要的，但一旦患者变得肥 胖，身体对减重的抵抗力可W是相当大的。单独的膳食和锻炼可能不足W带来严重肥胖患 者的显著重量变化，并且药物治疗和外科手术两者已被证明作为减重的额外助剂是有效 的。肥胖症的预防和治疗是高度未满足的医疗需求的领域，其中目前可用于慢性减重治疗 的药物较少。
[0004] 肤YY(PYY)连同膜多肤和神经肤Y属于肤的PP-折叠家族，其在控制食欲中 具有作用。参见，例如，Schwartz等人（200。yVaiyre:418化898):595-7dPYY被分泌 为36个氨基酸的直链多肤，然后被二肤基肤酶IV切割W产生PYY(3-36)。在胃旁路手 术之后病态肥胖个体中PYY的空腹和餐后浓度认为在其急剧减重中发挥作用。参见，例 如，leRoux(2006)心打况/巧.243 (1): 108-14。PYY(3-36)的外周输注已经显示增加 肥胖和消瘦主体中的能量消耗和脂肪氧化速率。参见，例如，Batterham等人（2003)yV EnglJMed.：M9 (10) : 941-8,和Sloth等人（2007) / 化乃?扣7 公化/〇心如〇7ifeiaA.: 293(2) :E604-9dPYY(3-36)鼻喷雾剂的施用使肥胖个体的每日热量摄入降低2713kj，导致 经六天研究期间减重0.6kg。参见，例如，Gantz等人（2007) /C/i打公打obcri打ifeiaA. 92巧）：1754-7。运些结果表明，与瘦素（其中抵抗性限制了其在肥胖症中的治疗有用性） 相反，肥胖主体保留对PYY(3-36)的敏感性。
[0005] 因此，本领域仍然需要用于肥胖症和肥胖症相关病症的治疗中使用的改进的PYY 组合物。
[000引发明概述 本发明设及当与天然人PYY相比时具有改善的治疗概况的PYY的新颖类似物。运些新 颖PYY类似物可用于治疗肥胖症、糖尿病和其他病症。
[0007] 简而言之，在一个方面，本发明提供了包含W下氨基酸序列的多肤：
或其盐，其中： Xaai是Ala、His或Ser; Xaa2是Glu或Lys; Xaa；3是Pro或Ala; Xaa4是Leu或Trp; Xaas是Asn、Ala或Thr; Xaae是Arg或Lys; Xaa?是Ser、Asp或Ala; Xaas是His或Lys; Xaag是Leu或lie;且Xaaio是Val或Leu。
[0008] 在另一个方面，本发明提供了选自^下的多版：
及其盐。
[0009] 在另一个方面，本发明提供了编码本发明的多肤的核酸分子。
[0010] 在又另一个方面，本发明包括包含编码本发明的多肤的核酸分子的表达载体。
[0011] 在一个进一步方面，本发明涵盖含有表达载体的宿主细胞，所述表达载体包含编 码本发明的多肤的核酸分子。
[001引在另一个方面，本发明提供了包含本发明的新颖PYY多肤和毒姗外泌肤-4的药物 组合。
[0013] 在又另一个方面，本发明提供了包含本发明的新颖PYY多肤和GLP-1的药物组合。
[0014] 在一个额外方面，本发明提供了包含本发明的新颖PYY多肤和一种或多种药学上 可接受的赋形剂的药物组合物。
[0015] 在一个进一步方面，本发明涵盖治疗代谢病症或肥胖症的方法，所述方法包括将 本发明的新颖PYY多肤或药物组合施用于有需要的主体。
[0016] 本发明还提供了本发明的多肤或药物组合在制备药物中的用途，所述药物用于在 肥胖症的治疗中使用。
[0017] 此外，本发明提供了本发明的多肤或药物组合，其用于在代谢病症或肥胖症的治 疗中使用。
[0018] 附图简述 图1显示实施例5中显示的肤（类似物#5)、PYY(3-36)NH2 (PYY3-36)和毒姗外泌肤-4单独和组合对膳食诱导的肥胖值10) Long Evans (L巧大鼠中的体重变化的影响。
[0019]图2显示实施例5中显示的肤（类似物#W、PYY(3-36)NH2 (PYY3-36)和毒财斤外 泌肤-4单独和组合对DI0 LE大鼠中的身体组成变化的影响。
[0020] 发明详述 本发明提供了当与天然人PYY相比时具有改善的治疗概况的PYY的新颖类似物。当与 天然PYY序列相比时，本发明的新颖PYY类似物显示对食物摄入的改善影响。
[0021] 在一个方面，所述新颖PYY类似物包含W下氨基酸序列：
或其盐，其中： Xaai是Ala、His或Ser; Xaa2是Glu或Lys; Xaa；3是Pro或Ala; Xaa4是Leu或Trp; Xaas是Asn、Ala或Thr; Xaae是Arg或Lys; Xaa?是Ser、Asp或Ala; Xaas是His或Lys; Xaag是Leu或lie;且Xaaio是Val或Leu。
[0022] 当与人PYY(3-36)相比时，本发明的新颖多版显示瘦和/或膳食诱导的肥胖症动 物模型中的食物摄入的减少的统计学显著增加。优选地，本发明的多版使瘦和/或膳食诱 导的肥胖症动物模型中的食物摄入减少至少20%、至少30%或至少40%。更优选地，所述 多版使瘦和/或膳食诱导的肥胖症动物模型中的食物摄入减少至少50%。
[0023] 在另一个方面，本发明提供了选自^下的多版：
及其盐。
[0024] 除非另有说明，本发明的多肤可W在氨基酸链的末端具有酷胺或簇酸。
[00巧]本发明涵盖所述多肤的盐，包括药学上可接受的盐。此类盐的实例包括，但不限 于，包括无机和有机酸和碱，包括但不限于，硫酸、巧樣酸、马来酸、乙酸、草酸、盐酸盐、氨 漠酸盐、氨舰酸盐、硝酸盐、硫酸盐、亚硫酸氨盐、憐酸盐、酸式憐酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、 乳酸盐、水杨酸盐、巧樣酸盐、酸式巧樣酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石 酸氨盐、抗坏血酸盐、班巧酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醒酸盐 (glucaronate)、薦糖酸盐（saccharate)、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲横酸盐、乙横酸 盐、苯横酸盐、对甲苯横酸盐和双径糞酸盐（即，1，1'-亚甲基-双-(2-径基-3-糞甲酸 盐））。还包括与游离氨基形成的盐，诸如，例如，盐酸、憐酸、乙酸、Ξ氣乙酸、草酸和酒石酸。 还包括可W与游离簇基形成的盐，诸如，例如钢、钟、锭、钢、裡、巧、氨氧化铁、异丙胺、Ξ乙 胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸和普鲁卡因盐。
[0026]本发明的多肤可W使用本领域已知的标准重组表达或化学肤合成技术来制备。 参见，例如，化an,WengC.,和化terD.White,编辑.估/oc 化<3化> 化公。沁 打iAesis.. ^Aaciicay也租roacA.NewYork:OxfordUP, 2000,和Howl,John,编辑PeptideSynthesisandApplications(MethodsinMolecularBiology).Totowa,NJ: Humana, 2005。
[0027]本发明的组合物和药物组合可用于治疗代谢病症，包括，例如，高血糖症、葡萄糖 耐量受损、β细胞缺乏症、糖尿病（包括1型糖尿病、2型糖尿病和妊娠糖尿病）、非酒精性 脂肪肝肝病、肝脏脂肪变性、多囊卵巢综合征、高脂血症和代谢综合征。所述组合物和药物 组合可W用于治疗特征在于暴食的肥胖症或疾病且用于抑制食欲。所述方法包括将治疗有 效量的本发明的组合物施用于有需要的主体，优选人主体。
[0028] 可W用本发明的组合物和组合治疗的其他病症，包括但不限于，膜岛素抵抗、膜岛 素缺乏、高膜岛素血症、高血糖症、血脂异常、高脂血症、高酬血症、高膜高血糖素血症、膜腺 炎、膜腺肿瘤、屯、血管疾病、高血压、冠状动脉疾病、动脉粥样硬化、肾衰竭、神经病变（例 如，自主神经病变、副交感神经病变和多神经病）、糖尿病视网膜病变、白内障、内分泌障碍 和睡眠呼吸暂停、多囊卵巢综合征、乳腺肿瘤、结肠肿瘤、前列腺肿瘤、直肠肿瘤和卵巢肿 瘤、骨关节炎、肝脏的脂肪变性。
[0029]本发明进一步涵盖，使用本发明的缀合物或融合体，调节患者中的膜岛素响应的 方法，W及增加细胞的葡萄糖摄取的方法，和调节细胞的膜岛素敏感性的方法。还提供了在 患者中刺激膜岛素合成和释放、增强脂肪、肌肉或肝脏组织针对膜岛素摄取的敏感性、刺激 葡萄糖摄取、减缓消化过程、减缓胃排空、抑制胃酸分泌、抑制膜酶分泌、降低食欲、抑制食 物摄入、改变能量消耗或阻断膜高血糖素的分泌的方法，其包括向所述患者施用本发明的 组合物，例如包括施用至少一个剂量的组合物，例如，本发明的药物组合物或药物组合。
[0030] 本发明还提供了本发明的组合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗代谢疾 病，诸如本文所述的那些。本发明还设及本文所述的任何组合物用于治疗中使用的用途。
[0031] 本发明的多肤和它们的盐可W单独或与用于治疗上述状况的其他治疗剂组合 ("药物组合"）使用。在一些实施方案中，本发明的多肤和一种或多种额外治疗剂一起施 用，而在其他实施方案中，本发明的多肤和一种或多种额外治疗剂分开施用。当分开施用 时，施用可任何顺序同时或相继发生。将选择本发明的多肤和其他治疗剂的量和施用 的相对时机W实现期望的组合治疗效果。本发明的化合物与其他治疗剂的组合的施用可W 通过在（1)包括两种治疗剂的单一药物组合物；或（2)各自包括所述治疗剂之一的分开药 物组合物中伴随施用而组合。或者，所述组合可相继方式分开施用，其中首先施用一种 治疗剂，然后施用另一第二种治疗剂，或反之亦然。此相继施用可W时间近或时间远。
[0032] 在一个实施方案中，本发明的药物组合包括根据本发明的多肤和毒姗外泌肤-4 肤（参见，例如，美国专利号5, 424, 286)或其片段或类似物。可用于本发明的毒姗外泌 肤-4(；Ex-4)及其类似物包括Byetta?和Bydureon? (艾塞那肤）、Victoza? (利拉鲁肤）、 利西拉来、LY2189265 (dulaglutide)、PF-4856883、ZYD-1 和HM11260C(LAPS毒姗外泌肤） W及PCT专利公开W0 99/25728 度eel巧等人）、W0 99/25727 炬eel巧等人）、W0 98/05351 (Young等人）、WO99/40788(Young等人）、WO99/07404 度eel巧等人）和WO99/43708 (Knudsen等人）中描述的那些。
[0033] 在另一个实施方案中，本发明的药物组合包括根据本发明的多肤和GLP-1 (参 见，例如，Gutniak,M.，等人（1992)Λ? 分.乂Weoi326:1316-22)，或其片段或 类似物，例如，GLP-1 (7-37)、GLP-1 (7-36)、GLP-1 (7-35)、GLP-1 (7-38)、GLP-1 (7-39)、GLP-1 (7-40)'GLP-1 (7-41)。
[0034] 进一步GLP-1类似物描述于国际专利申请号90/11299,其设及包含GLP-1 (7-36) 及其功能衍生物且具有超过GLP-1 (1-36)或GLP-1 (1-37)的促膜岛素活性的促膜岛素活性 的肤片段，和它们作为促膜岛素剂的用途（通过引用并入本文，特别是借助用于本发明中 使用的药物的实例）。
[0035] 国际专利申请号W0 91/11457度uckl巧等人）公开了活性GLP-1肤的类似物 GLP-1 (7-34)、GLP-1 (7-35)、GLP-1 (7-36)和GLP-1 (7-37)，其也可W用作根据本发明的 GLP-1药物（通过引用并入本文，特别是借助用于本发明中使用的药物或药剂的实例）。
[0036] 本发明的药物组合还包括根据本发明的多肤和阿必鲁肤（A化iglutide)。
[0037] 在另一个实施方案中，所述药物组合包括根据本发明的多肤和GLP-1作用的增强 剂，诸如DPP-IV抑制剂（例如，西他列汀和/或沙格列汀）。
[0038] 在其他实施方案中，所述药物组合包含本发明的PYY类似物和一种或多种治疗 剂，所述治疗剂是GLP-1分泌的直接或间接刺激剂诸如二甲双脈、胆汁酸馨合剂（例如， 考来替泊、考来締胺（cholest巧ramine)和/或考来维仑）、回肠胆汁酸转运（iBAT)抑制 剂（例如，ALBI-3309、AZD-7806、S-8921、SAR-58304 或US20130029938 中描述的那些）和 SGLT-1 抑制剂（例如，DSP-3235 和 / 或LX-4211)。
[0039] 本发明提供了治疗方法，其中将"治疗有效量"的本发明的多肤施用于需要此治疗 的主体。术语"治疗有效量"意指与没有接受此类量的相应主体相比导致疾病、病症或副作 用的改善的治疗、治愈或减轻或疾病或病症的进展速率降低的任何量。如本领域技术人员 认识到，治疗剂的有效量将随着许多因素变化，所述因素包括患者的年龄和体重、患者的身 体状况、血糖水平、待获得的体重水平和其他因素。
[0040] 在一个实施方案中，本发明的多肤的治疗有效量是将主体中的食欲抑制至期望程 度所需的量。对于70kg患者，化合物的有效每日食欲抑制剂量通常范围为约0.01μκ至约 500μκ/天，优选约0.05μκ至约100μκ/天，更优选约1μκ至约50μκ/天，最优选约5μg 至约25μκ/天，其W单一或分开的剂量施用。
[0041] 在一个方面，本发明提供了包含本发明的多肤和药学上可接受的载体、赋形剂或 稀释剂的药物组合物。
[0042] 本发明的药物组合物和药物组合可W通过任何途径施用，包括静脉内、腹膜内、皮 下和肌内、口服、局部、经粘膜或通过肺吸入。例如，本发明的多肤可适合于胃肠外（包 括静脉内、肌内和皮下）、鼻或口服施用的制剂的形式提供。
[0043] 配制和递送用于各种施用途径的多肤的方法是本领域已知的。参见，例如， Swain等人（201：3)化ce打f化(.化Wee如〇又2013年2月1日，印刷前提前电子出 片反，Hovgaard, Lars, Sven Froklaer,和Marco Van De Weert,满卷Pharmaceutical FormulationDevelopmentofPeptidesandProteins.第 2 片反.Boca Raton: CRC Press,2012,和Van Der Walle, C虹is,编辑化公。沁a打i/AOiei打化"Ke/y.London: Academic,2011。
[0044] 在一个实施方案中，本发明涵盖缓释制剂。此类制剂允许治疗有效量的一种或多 种治疗性多肤在注射或递送至皮下空间之后经许多小时或天被递送至血流中。
[0045] 本发明的缓释制