实施例2 : 本实施例在实施例1的基础上，进一步提出了用磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒提取 病毒样品中CyHV-2病毒的DNA，并置于-80°C的温度下保存备用。
[0029] 实施例3: 本实施例在实施例2的基础上，进一步提出了在实时荧光PCR扩增检测中，扩增片段 为83bp，扩增体系为20μL。
[0030] 实施例4: 本实施例在实施例3的基础上，进一步提出了实时荧光PCR的扩增反应条件包括：94°C1min; 95°C5s、56°C30s、72°C20s，循环35次；检测设立阳性对照和阴性对照，所 述阳性对照为阳性质粒标准品。
[0031] 实施例5: 本实施例涉及的鲤疱疹病毒II型实时荧光PCR检测方法包括以下步骤： 1)根据CyHV-2 0RF6 基因序列（登录号：JQ815364.1)用软件（PrimerExpress3.0) 设计并合成基因特异性引物及Taqman探针，如下所示： 上游引物F :5 z - CTGGGTACTGTCTGTCCATGTTG -3 z ; 下游引物R:5z-CAAAACGGGCTGGCAGTCT-3 '; 探针P :5 z FAM- TTG TAC CAG CAC TCG CCA ATG AGC A -BHQ 3 z。
[0032] 2)用磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒提取病毒样品中CyHV-2病毒的DNA，并置 于-20°C的温度下保存备用。
[0033] 3)进行实时荧光PCR扩增检测，扩增片段为83bp，扩增体系为50μL，扩增反应条 件包括：95°C3min;95°C15s、56°C40s、72°C30s，循环45次；检测设立阳性对照和 阴性对照，阳性对照为阳性质粒标准品，阴性对照为ddH20。
[0034] 实施例6 : 本实施例涉及的鲤疱疹病毒II型实时荧光PCR检测方法包括以下步骤： 1)根据CyHV-2 0RF6 和 0RF24基因序列（登录号：JQ815364. 1)用软件（PrimerExpress3. 0)设计并合成基因特异性引物及Taqman探针，如下所示： 上游引物F :5 z - CTGGGTACTGTCTGTCCATGTTG -3 z ; 下游引物R:5z-CAAAACGGGCTGGCAGTCT-3 '; 探针P :5 z FAM- TTG TAC CAG CAC TCG CCA ATG AGC A -BHQ 3 z。
[0035] 2)用磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒提取病毒样品中CyHV-2病毒的DNA，并置 于-30°C的温度下保存备用。
[0036] 3)进行实时荧光PCR扩增检测，扩增片段为83bp，扩增体系为25μL，扩增反应条 件包括：95°C3min;95°C10s、56°C40s、72°C30s，循环40次；检测设立阳性对照和 阴性对照，阳性对照为阳性质粒标准品，阴性对照为ddH20。
[0037] 实施例7 : 本实施例涉及的鲤疱疹病毒II型实时荧光PCR检测方法包括以下步骤： 1)根据CyHV-2 0RF6 和 0RF24基因序列（登录号：JQ815364. 1)用软件（PrimerExpress3. 0)设计并合成基因特异性引物及Taqman探针，如下所示： 上游引物F :5 z - CTGGGTACTGTCTGTCCATGTTG -3 z ; 下游引物R:5z-CAAAACGGGCTGGCAGTCT-3 '; 探针P :5 z FAM- TTG TAC CAG CAC TCG CCA ATG AGC A -BHQ 3 z。
[0038] 2)用磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒提取病毒样品中CyHV-2病毒的DNA，并置 于-20°C的温度下保存备用。
[0039] 3)进行实时荧光PCR扩增检测，扩增片段为83bp，扩增体系为20μL，扩增反应条 件包括：95°Clmin;95°C5s、58°C30s、72°C25s，循环45次；检测设立阳性对照和阴性对 照，阳性对照为阳性质粒标准品，阴性对照为ddH20。
[0040] 实施例8 : 本实施例涉及的鲤疱疹病毒II型实时荧光PCR检测方法包括以下步骤： 1)根据CyHV-2 0RF6 和 0RF24基因序列（登录号：JQ815364. 1)用软件（PrimerExpress3. 0)设计并合成基因特异性引物及Taqman探针，如下所示： 上游引物F :5 z - CTGGGTACTGTCTGTCCATGTTG -3 z ; 下游引物R:5z-CAAAACGGGCTGGCAGTCT-3 '; 探针P :5 z FAM- TTG TAC CAG CAC TCG CCA ATG AGC A -BHQ 3 z。
[0041] 2)用磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒提取病毒样品中CyHV-2病毒的DNA，并置 于-50°C的温度下保存备用。
[0042] 3)进行实时荧光PCR扩增检测，扩增片段为83bp，扩增体系为25μL，扩增反应条 件包括：95°C2min;95°C8s、56°C35s、72°C25s，循环42次；检测设立阳性对照和阴性 对照，阳性对照为阳性质粒标准品，阴性对照为ddH20。
[0043] 实施例9 : 本实施例涉及的鲤疱疹病毒II型实时荧光PCR检测方法包括以下步骤： 1)根据CyHV-2 0RF6 和 0RF24基因序列（登录号：JQ815364. 1)用软件（PrimerExpress3. 0)设计并合成基因特异性引物及Taqman探针，如下所示： 上游引物F :5 z - CTGGGTACTGTCTGTCCATGTTG -3 z ; 下游引物R:5z-CAAAACGGGCTGGCAGTCT-3 '; 探针P :5 z FAM- TTG TAC CAG CAC TCG CCA ATG AGC A -BHQ 3 z。
[0044] 2)用磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒提取病毒样品中CyHV-2病毒的DNA，并置 于-60°C的温度下保存备用。
[0045] 3)进行实时荧光PCR扩增检测，扩增片段为83bp，扩增体系为22μL，扩增反应条 件包括：95°C3min;95°C10s、56°C40s、72°C30s，循环40次；检测设立阳性对照和 阴性对照，阳性对照为阳性质粒标准品，阴性对照为ddH20。
[0046] 实施例10 : 本实施例涉及的鲤疱疹病毒II型实时荧光PCR检测方法包括以下步骤： 1)根据CyHV-2 0RF6 和 0RF24基因序列（登录号：JQ815364. 1)用软件（PrimerExpress3. 0)设计并合成基因特异性引物及Taqman探针，如下所示： 上游引物F :5 z - CTGGGTACTGTCTGTCCATGTTG -3 z ; 下游引物R:5z-CAAAACGGGCTGGCAGTCT-3 '; 探针P :5 z FAM- TTG TAC CAG CAC TCG CCA ATG AGC A -BHQ 3 z。
[0047] 2)用磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒提取病毒样品中CyHV-2病毒的DNA，并置 于-20°C的温度下保存备用。
[0048] 3)进行实时荧光PCR扩增检测，扩增片段为83bp，扩增体系为25μL，扩增反应条 件包括：95°C3min;95°C15s、56°C35s、72°C30s，循环35次；检测设立阳性对照和阴 性对照，阳性对照为阳性质粒标准品，阴性对照为ddH20。
[0049] 在上述实施例5~10中，待实时荧光PCR扩增反应结束后，利用荧光PCR仪器的 分析软件，依据Ct值和扩增动力学曲线进行分析测定： (I)TaqMan荧光定量PCR的反应条件，采用2XPremixExTaq(ProbeqPCR)试剂推 荐的25yL体系，以相同浓度的阳性质粒为模板，选用不同浓度的引物和探针，通过矩阵法 对引物和探针的最佳浓度进行优化，同时优化最佳退火温度，获得反应的最低Ct值和最高 荧光强度增加值（ΛRn)，为提高反应扩增效率与敏感度，增设NTC(空白）对照。
[0050] (II)TaqMan荧光PCR的标准曲线，以10倍连续梯度稀释（10 3~10 9)的阳性标准 品为模板，以（1)中的反应条件进行TaqMan荧光定量PCR，以模板浓度（拷贝数/μL)为横 坐标，以Ct值为纵坐标绘制标准曲线。
[0051] (III)TaqMan荧光定量PCR检测方法的评价： 敏感性试验：将常规PCR与10倍连续梯度稀释好的阳性标准品分别进行TaqMan荧光 定量PCR，方法参照（I)，比较两种检测方法的敏感性。
[0052] 特异性试验：用（I )中建立的TaqMan荧光定量PCR方法分别检测CyHV-2、ISAV、 IHNV、KHV和SVCV，评价建立的TaqMan荧光定量PCR的特异性，。
[0053] 重复性试验：批间重复性试