，培养时间为14h。
[0029] (5)二级培养 一级培养后接种子培养基，接种量为4%，培养时间达到化后得培养液。
[0030] (6)Ξ级培养 将培养液接入发酵培养基，在发酵罐中二氧化碳的通入量为化/min,发酵过程中流 加摩尔浓度为Imol/L的氨氧化钢溶液维持发酵系统的抑值在6.0~6.1之间，溫度为 37~39°C，发酵时间为4她，发酵结束时钢离子浓度达到1. 5%，发酵结束后得下二酸。
[00引]实施例2 一种使用水葫芦作为发酵原料制备下二酸的方法，其制备方法如下： (1)本发明水葫芦的预处理： ③先取lOOKg水葫芦，对水葫芦原料进行离屯、甩干，然后烘干至基本无水，得干燥的水 葫芦2.化g;将水葫芦用摩尔浓度为2. 5%的氨氧化钢水溶液在120度条件下浸泡2小时， 水葫芦与氨氧化钢水溶液的质量比为1:10; ② 浸泡结束后，将固体滤出，使用去离子水清洗，冲洗至中性，加入下二酸调整溶液抑 至4. 0,溫度调整到38度，此时溶液的固液比为1:10,按质量比计； ③ 将诺维信纤维素酶Carezyme?450化加入到经步骤（1)②处理的溶液中进行水解，时 间为48小时，诺维信纤维素酶Carezyme?450化的投加量为水葫芦固体物中纤维素与半纤 维素含量的10% ;将溶液中固体滤除，并收集滤出液，此滤出液为纤维素酶水解液； ⑥将纤维素酶水解液进行浓缩，浓缩至总糖含量达到350g/l，得水解糖液； (2) 配置种子培养基 配制种子培养液lOmU组成为蛋白腺5g/l，玉米浆20g/l，葡萄糖20g/l，憐酸二氨钟 1. 5g/l，憐酸氨二钢1. 5g/l，酵母膏5g/l，用去离子水配制； (3) 配置发酵培养基 采用去离子水配制发酵培养基lOOmU发酵培养基的组成成分按质量浓度计为：蛋白 腺5g/l，玉米浆lOg/l，总还原糖含量lOOg/l，憐酸二氨钟2. 5g/l，憐酸氨二钢2. 5g/l，酵 母膏5g/l，乙酸钢1邑/1，用去离子水配制，其中总还原糖取自所述水解糖液。
[0032] (4) 一级培养 将班巧酸放线杆菌（Actinobacillussuccinogenes)CGMCC1593放入TSB培养液中进 行培养，培养时间为14h。
[0033] (5)二级培养 一级培养后接种子培养基，接种量为4%，培养时间达到化后得培养液。
[0034] (6)Ξ级培养 将培养液接入发酵培养基，在发酵罐中二氧化碳的通入量为化/min,发酵过程中流加 摩尔浓度为Imol/L的氨氧化钢溶液维持发酵系统的抑值在6. 0之间，溫度为37°C，发酵时 间为4她，发酵结束时钢离子浓度达到1. 5%，发酵结束后得下二酸。
[00对 实施例3 一种使用水葫芦作为发酵原料制备下二酸的方法，其制备方法如下： (1) 本发明水葫芦的预处理： ④ 先取lOOKg水葫芦，对水葫芦原料进行离屯、甩干，然后烘干至基本无水，得干燥的水 葫芦2.化g;将水葫芦用摩尔浓度为2. 5%的氨氧化钢水溶液在120度条件下浸泡2小时， 水葫芦与氨氧化钢水溶液的质量比为1:10; ② 浸泡结束后，将固体滤出，使用去离子水清洗，冲洗至中性，加入乙酸调整溶液抑至 4. 5,溫度调整到40度，此时溶液的固液比为1:10,按质量比计； ③ 将诺维信纤维素酶Carezyme?450化加入到经步骤（1)②处理的溶液中进行水解，时 间为48小时，诺维信纤维素酶Carezyme?45(K)L的投加量为水葫芦固体物中纤维素与半纤 维素含量的10% ;将溶液中固体滤除，并收集滤出液，此滤出液为纤维素酶水解液； ⑥将纤维素酶水解液进行浓缩，浓缩至总糖含量达到350g/l，得水解糖液； (2) 配置种子培养基 配制种子培养液lOmU组成为蛋白腺5g/l，玉米浆20g/l，葡萄糖20g/l，憐酸二氨钟 1. 5g/l，憐酸氨二钢1. 5g/l，酵母膏5g/l，用去离子水配制； (3)配置发酵培养基 采用去离子水配制发酵培养基lOOmU发酵培养基的组成成分按质量浓度计为：蛋白 腺5g/l，玉米浆lOg/l，总还原糖含量lOOg/l，憐酸二氨钟2. 5g/l，憐酸氨二钢2. 5g/l，酵 母膏5g/l，乙酸钢1邑/1，用去离子水配制，其中总还原糖取自所述水解糖液。
[0036] (4) 一级培养 将班巧酸放线杆菌（Actinobacillussuccinogenes)CGMCC1593放入TSB培养液中进 行培养，培养时间为14h。
[0037] (5)二级培养 一级培养后接种子培养基，接种量为4%，培养时间达到化后得培养液。
[0038] (6)Ξ级培养 将培养液接入发酵培养基，在发酵罐中二氧化碳的通入量为化/min,发酵过程中流加 摩尔浓度为Imol/L的氨氧化钢溶液维持发酵系统的抑值在6.1之间，溫度为9°C，发酵时 间为4她，发酵结束时钢离子浓度达到2%，发酵结束后得下二酸。
[0039] 表1本发明实施例1-3多制得的下二酸产量结果:
W上实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制， 本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明 的保护范围。
【主权项】
1. 一种使用水萌芦作为发酵原料制备丁二酸的方法，其制备方法如下： 本发明水萌芦的预处理： 先将水萌芦原料进行离心甩干，得干燥的水萌芦；将水萌芦用摩尔浓度为2% - 3%的氢 氧化钠水溶液在120度条件下浸泡2小时，水萌芦与氢氧化钠水溶液的质量比为1: 10 ; ② 浸泡结束后，将固体滤出，使用去离子水清洗，冲洗至中性，加入柠檬酸或其他有机 酸调整溶液pH至4. 0~4. 5,温度调整到38~40度，此时溶液的固液比为1:10,按质量比计； ③ 将诺维信纤维素酶Carezyme?4500L加入到经步骤（1)②处理的溶液中进行水解，时 间为48小时，诺维信纤维素酶Carezyme?4500L的投加量为水萌芦固体物中纤维素与半纤 维素含量的10%，质量为2. 6g;将溶液中固体滤除，并收集滤出液，此滤出液为纤维素酶水 解液； ⑤将纤维素酶水解液进行浓缩，浓缩至总糖含量达到350g/L，得水解糖液； (2) 配置发酵培养基 采用去离子水配制发酵培养基100mL，发酵培养基的组成成分按质量浓度计为：蛋白 胨5g/L，玉米浆10g/L，总还原糖含量100g/L，磷酸二氢钾2. 5g/L，磷酸氢二钠2. 5g/L，酵 母膏5g/L，乙酸钠1g/L，用去离子水配制，其中总还原糖取自所述水解糖液； (3) -级培养 将琥?自酸放线杆菌（Actinobacillussuccinogenes)CGMCC1593放入种子培养液中进 行培养，培养时间为14h; (4) 二级培养 一级培养后接种子培养基，接种量为4%，培养时间达到7h后得培养液； (5) 三级培养 将培养液接入发酵培养基，在发酵罐中二氧化碳的通入量为3L/min，发酵过程中流 加摩尔浓度为lmol/L的氢氧化钠溶液维持发酵系统的pH值在5. 5~6. 5之间，温度为 37~39°C，发酵时间为48h，发酵结束时钠离子浓度达到1. 5°/『2%，发酵结束后得丁二酸。2. 如权利要求1所述的一种使用水萌芦作为发酵原料制备丁二酸的方法，其特征在 于，优选地，所述发酵过程中流加摩尔浓度为lmol/L的氢氧化钠溶液维持发酵系统的pH值 为 6. 0~6· 2。3. 如权利要求1所述的一种使用水萌芦作为发酵原料制备丁二酸的方法，其特征在 于，发酵使用的碳源为水萌芦经过处理得到的纤维素、半纤维素水解后的产物。
【专利摘要】一种使用水葫芦作为发酵原料制备丁二酸的方法，如下：（1）水葫芦的预处理：（2）一级培养，将菌种放入种子培养液中进行培养，培养时间为14h；（3）二级培养，一级培养后接种子培养基，接种量为4%，培养时间达到7h后得培养液；（4）三级培养，将培养液接入发酵培养基，在发酵罐中二氧化碳的通入量为0.5~5L/min，发酵过程中流加摩尔浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液维持发酵系统的pH值在5.5~6.5之间，温度为37~39℃，发酵时间为48h，发酵结束时钠离子浓度达到1.5%~2%，发酵结束后得丁二酸。生产成本低廉的同时，做到了降低对环境的污染的要求。
【IPC分类】C12R1/01, C12P7/46
【公开号】CN105331641
【申请号】CN201510831802
【发明人】吕涛
【申请人】镇江博睿兴邦生物科技有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月25日