糖硫 酸酯以及任选的常规药物载体、赋形剂、填料和/或辅料等。
[0036] 本发明的再一方面是提供一种保健品，其包含上述根据本发明的岩藻聚糖硫酸酯 以及任选的常规食品添加剂。
[0037] 本发明的又一方面是提供一种预防或治疗肿瘤的方法，其包括给具有该需要的对 象服用上述根据本发明的岩藻聚糖硫酸酯或者根据本发明的药物组合物。
【附图说明】：
[0038] 图1为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯NDHOl的IR谱图；
[0039] 图2为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯NDHO1的13C-NMR谱图；
[0040] 图3为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯NDHO1的1H-NMR谱图；
[0041] 图4A为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯NDHOl抑制HMEC-I细胞在 基质胶上的管腔形成的代表图，图4B为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯NDHOl 对HMEC-I细胞存活率影响的曲线图，图4C为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯 NDHOl抑制HMEC-I细胞的划痕愈合，图4D为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯 NDHOl对HMEC-I细胞迀移率影响的柱状图；
[0042] 图5A为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯NDHOl与BMP4结合的传感 图，图5B为根据本发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯NDHOl抑制HMEC-I细胞中BMP4的 mRNA表达量的电泳图及蛋白水平表达量的免疫印迹图，图5C为根据本发明实施例1制备的 岩藻聚糖硫酸酯NDHOl抑制HMEC-I细胞中BMP4诱导的管腔形成的代表图，图为根据本 发明实施例1制备的岩藻聚糖硫酸酯NDHOl抑制HMEC-I细胞中BMP4诱导的Smadl/5/8磷 酸化的免疫印迹图。
[0043] 图6为根据本发明的岩藻聚糖硫酸酯的结构式的放大图。
【具体实施方式】
[0044] 下面结合实施例对本发明作进一步的阐述，以下实施方式只以举例的方式描述本 发明。很明显，本领域普通技术人员可在本发明的范围和实质内，对本发明进行各种变通和 修改。需要了解的是，本发明意欲涵盖在所附权利要求中包括的变通和修改。
[0045] 海蕴新鲜藻体购自华昱海藻食品有限公司，本专利申请所用试剂如无特殊表明， 均来自国药集团，AR级别纯度。
[0046] 实施例1 :岩藻聚糖硫酸酯NDHOl的制备
[0047] a.多糖提取：
[0048] 干燥的海蕴，用三倍体积95%的乙醇脱脂一周，每两天换一次乙醇，然后海蕴在室 温自然干燥。干燥后的海蕴750g粉碎后，用80°C热水（去离子水）10升提取10次，每次 4h，提取时一直机械搅拌。硫酸-苯酚检测至无明显反应，过滤，将每次的提取液合并后加 热浓缩至3升，在搅拌下加入95%乙醇16L，静置过夜，倾去上清液，离心分离，所得沉淀用2 倍体积的无水乙醇洗涤，离心分离，沉淀再用两倍体积的无水丙酮洗涤，离心，沉淀置40°C 下真空干燥，得水提岩藻聚糖硫酸酯NDH 22. 3g。
[0049] b.多糖纯化：
[0050] 将步骤a得到的水提岩藻聚糖硫酸酯NDH 5g搅拌溶解，离心取上清液，上清液用Q sepharose Fast Flow强阴离子柱进行分级纯化，依次用水和0. 2M NaCl洗脱，以硫酸-苯 酚检测洗脱曲线，收集0. 2M NaCl洗脱组分，浓缩，透析，冷冻干燥得纯化多糖NDH01. 87g。 NDHO1. 6g溶解后再经S印hacryI S-300HR凝胶色谱纯化，以硫酸-苯酚检测洗脱曲线，收集 主要组份，得到均一的岩藻聚糖硫酸酯NDH011. 04g。
[0051] C.多糖结构鉴定和解析：
[0052] 经高效凝胶渗透色谱法（HPGPC)测定岩藻聚糖硫酸酯NDHOl多糖相对分子质量为 216kDa〇
[0053] 将其进行单糖组成分析，即将多糖完全水解、还原、乙酰化、萃取、浓缩后送入GC 分析。单糖组成分析结果显示，岩藻聚糖硫酸酯NDHOl主要含甘露糖（3. 0% )、葡萄糖醛酸 (14.4% )和岩藻糖（82.6% )。
[0054] 通过氯化钡-明胶法测定发现NDHOl是高度硫酸化的岩藻聚糖。
[0055] 结合红外和核磁共振分析（参见图1、2和3)，确定NDHOl为带有乙酰基的岩藻聚 糖硫酸酯。
[0056] 硫酸基含量测试表明硫酸基与总糖的摩尔比例是0. 343:1。
[0057] 红外图谱显示，3447. Icm 1附近为O-H伸缩振动吸收峰，2928. 4cm 1附近为C-H伸 缩振动吸收峰，1000 -HOOcm 1附近为C-O和糖环振动信号，1256. 4cm 1附近是0 = S = 0伸 缩振动吸收峰（图1)。
[0058] 13C-NMR谱中（图2)，位于δ 175. 75的信号是葡糖糖醛酸的羧基碳信号，位于 δ 174. 51的信号是岩藻糖上乙酰基的羰基碳信号，位于δ 91-δ 103的端基碳信号，分别 为末端岩藻糖、1，4-岩藻糖、1，3-岩藻糖、1，3, 4-岩藻糖、1，2-甘露糖、1，2, 3-甘露糖、 1，2, 4-甘露糖、1，2, 6-甘露糖和末端甘露糖的Cl信号；在δ 16. 29左右为岩藻糖甲基碳的 信号峰；在S 21. 29处为乙酰基甲基碳的信号峰。
[0059] 1H-NMR谱中（图3)，位于δ5.0-5.7的信号是NDHOl中异头氢的信号，位于 δ 3. 25-4. 65的信号是糖环上的氢的信号，位于δ 2. 28附近的信号是典型的乙酰基上甲基 氢的信号，位于δ 1. 30附近的信号是岩藻糖Η6的信号。根据δ 2. 28附近的信号和δ 1. 30 附近的信号的积分面积比可知乙酰基与岩藻糖的摩尔比为0. 168:1。由于岩藻糖占总糖的 摩尔分数是82.6%。所以可以换算出乙酰基与总糖的摩尔比是0.139:1。从上述结果可以 发现NDHOl是乙酰化的岩藻聚糖硫酸酯。
[0060] 实施例2.岩藻聚糖硫酸酯NDHOl具有抗血管生成活性
[0061] a.岩藻聚糖硫酸酯NDHOl抑制人源表皮血管内皮细胞HMEC-I细胞在基质胶上的 管腔形成：
[0062] 人源表皮血管内皮细胞HMEC-I细胞培养于含有15%四季青胎牛血清（购自浙 江天航生物科技有限公司）、2mM L-谷氨酰胺、10ng/mL EGF和抗生素（100U/mL青霉素 和100 μ g/mL链霉素）的MCDB131培养基（购自美国Gibco公司）中。4°C化冻的基质胶 (50 μ L)加入到4°C预冷的96孔板中在37°C固化30分钟。每孔分别加入含有0、15. 625、 31. 25、62. 5、125、250、500、1000 yg/mL 的 NDHOl 及 HMEC-I 细胞（5X104个）的 MCDB131 培 养基（100 μ L)中，在培养箱中继续培养12h。结果用倒置显微镜（购自日本奥林巴斯公司） 拍摄记录，放大倍数为200倍。结果如图4A所示，岩藻聚糖硫酸酯NDHOl能浓度依赖地抑 制HMEC-I细胞在基质胶上的管腔形成。
[0063] b. MTT实验检测岩藻聚糖硫酸酯NDHOl对HMEC-I细胞生长的影响：
[0064] 对数生长期的HMEC-I细胞（5 X IO3个/孔）种入96孔板中，设三复孔，于培养 箱中培养24h ;吸去细胞上清液，加入终浓度分别为0、15. 625、31. 25、62. 5、125、250、500、 1000 μ g/mL的NDHOl，继续培养24、48或72h后，每孔加入5mg/ml的MTT溶液10 μ L (购自 美国sigma公司，PBS配制，经0. 22 μ m微孔滤膜过滤），继续培养4h后吸去上清液，加入 150 μ L DMSO溶解形成的甲瓒，用酶标仪在490nm下采集吸光度。
[0065] 细胞存活率按照以下公式进行计算：细胞存活率=(实验组OD值一空白组OD 值）八对照组00值一空白组00值）父100%。
[0066] 结果如图4B所示，1000 μ g/mL的NDHOl处理细胞48h或72h后，细胞的存活率分 别为80. 86%和63. 33%，说明岩藻聚糖硫酸酯NDHOl的抗血管生成活性与其抑制细胞生长 有关。
[0067] c.划痕愈合实验检测岩藻聚糖硫酸酯NDHOl对HMEC-I细胞迀移的影响：
[0068] HMEC-I (2. 5 X IO5个）种入12孔板当中培养24h后用黄枪头划一痕，PBS小心洗 涤三次，加入含有0、250、500、1000 μ g/mL NDHOl的培养基，置于细胞培养箱继续培养12h。 刚划痕及划痕后12h用倒置显微镜拍摄记录细胞愈合情况，放大倍数为40倍。实验结果利 用Image-Pro Plus软件统计迀移情况。
[0069] 如图4(：和40所示，(^8/1^灿!101组，迀移率为57.7%，而 250、500 和100(^8/ mL NDHOl组的迀移率