专利名称：综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法
技术领域：
本发明属于岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的提取纯化方法，特别涉及一种从海带中提取纯化岩藻黄质、岩藻聚糖硫酸酯的方法。
背景技术：
岩藻黄质英文名称fucoxanthin，亦称岩藻黄素、褐藻素，属于类胡萝卜素 (carotenoids)中叶黄素类，很多研究表明其具有抗炎、抗癌活性，尤其是减肥效果明显，岩藻黄质可以通过两种方式来消除脂肪堆积。岩藻黄质能够激活被称为UCPl蛋白，这种蛋白可以促进脂肪分解。同时它也可以刺激肝脏生成降低胆固醇水平的DHA。日本北海道大学研究人员证实，岩藻黄质将成为减肥的灵丹妙药。目前，岩藻黄质作为减肥成分被广泛应用，尤其在日本、美国、欧洲应用较普遍。有很多含有岩藻黄质的减肥产品在销售，另外日本还开发出了很多岩藻黄质终端产品。岩藻聚糖硫酸酯英文名称Fucoidan，是褐藻多糖硫酸酯的一种，又名褐藻糖胶、岩藻依聚糖，是海带细胞间的特有多糖，存在于细胞壁基质中。主要由含硫酸基(SO/—)的岩藻糖(岩藻糖单糖的英文名字叫“Fucose”)组成，其次还伴有少量半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、糖醛酸等，是一种水溶性杂聚多糖。岩藻聚糖硫酸酯最多的组成组分是1，2-α-岩藻糖-4-硫酸基。也就是说能够叫“岩藻聚糖硫酸酯”或“Fucoidan”的，在其组成组分上需要有一个明显的特点，就是将该物质在酸性条件下水解，所得到的水解液里各种单糖中， 岩藻糖(Fucose)的含量应是最高的，另外还要含有硫酸基。岩藻聚糖硫酸酯是一种优秀的健康食品、药品原料，因天然含有硫酸根，从而具有阴离子高分子化合物的特性。岩藻聚糖硫酸酯具有抗凝血、降血压、抗氧化、降血脂、抗肿瘤、抗病毒、增强机体免疫机能等多种生物学活性。连续逆流提取是指在提取的过程中，物料和溶剂同时连续运动，但运动方向相反， 通过机械传输，连续定量加料，使物料和溶媒充分接触，设备内溶剂不断更新，最终连续出渣。同时在设备内部不断更新溶剂，溶剂在流动过程中不断获得物料的有效成份，浓度不断提高。在连续进液和连续出液的过程中，溶剂中存在连续的浓度梯度，从而使提取液可以获得比较快的浸出速度，也可以获得比较高的提取液浓度。超声波是指频率在20 50000kHz之间的机械波。其原理超声波能产生机械效应、空化效应及热效应，超声波发生器产生高于20kHz的超音频电信号，通过浸入式换能器转成同频率的机械振荡而传播到提取液介质中，并以超音频纵波的形式在提取液中疏密相间地向前辐射，使提取液振荡而产生许多的微小气泡。由于超音频纵波传播的负压和正压区交替作用产生超过10000个标准大气压的微小气泡并随即爆破，形成了对物料表面的细微局部撞击，使物料迅速击碎、分解。在这种被称作“空化”效应的过程中，连续不断作用于溶质，使中药材及其他天然物在溶液中产生“湍动”效应，使边界层减薄，产生的界面效应增大了固液两相的传质面积，产生的聚能效应活化了分离物质。在超声波的空化、粉碎等特殊作用下，细胞在溶媒中瞬时产生的空化泡崩溃而破裂，以使溶媒渗透到细胞内部，从而使细胞中的成分溶于溶剂之中，以加速相互的渗透、溶解。细胞的破裂为成分向溶媒的扩散提供了条件，提高了有效成分的提出率，从而达到了加速提取有效成分的目的。目前，岩藻黄质提取已经有了多个专利，中国专利CN 1706836A使用的提取溶剂为二甲基亚砜；中国专利CN 101565411A使用的是丙酮、70-99%乙醇或甲醇水溶液；中国专利CN101735178A使用的是1-20个碳原子的脂肪醇或其所组成的组，它们不是因为沸点高难于去除，就是会将海带中的大量无机盐一起提取出来，这些都加大了后续纯化的成本。纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯也要用到离子、大孔、聚酰胺等树脂，中国专利 CN101565411A纯化岩藻黄质使用的是硅胶；中国专利CN 101735178A纯化岩藻黄质使用的是大孔树脂、聚酰胺、活性碳和氧化铝的组；中国专利CN 1115166C纯化岩藻聚糖硫酸酯时用到阴阳离子交换树脂；但均是使用单一树脂或他们的组合，这样上完一种树脂柱再上另一种树脂柱，使得生产效率低，有效成分损失大，生产成本比较高。目前，只是利用海带提取岩藻黄质或提取岩藻聚糖硫酸酯，这样对海带的利用很不充分。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法。本发明的技术方案概述如下综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)去离子水洗净的海带经打浆机打浆后，用己烷或石油醚或体积比为0. 1 99. 9 99. 9 0. 1的己烷和石油醚的混合溶剂为提取溶剂，采用连续逆流提取技术，在避光、20°C 50°C，料液质量比为1 10 40的条件下提取40 90分钟，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加1 5质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另将所得海带浆渣加2-8质量倍体积百分浓度为50% 90% 的乙醇水溶液，在200 IOOOw超声提取30 60分钟，过滤，滤渣加2 8质量倍的水在 200 IOOOw超声提取30 60分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；(3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，用1 10倍柱体积去离子水、1 10倍柱体积的体积百分浓度为20% 80%乙醇水溶液、1 10倍柱体积的无水乙醇进行洗脱， 收集无水乙醇洗脱液，减压干燥或喷雾干燥，即得到纯化后的岩藻黄质提取物；将所述岩藻聚糖硫酸酯粗提液上混合树脂柱，用1 10倍柱体积去离子水进行洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥或喷雾干燥，即得到纯化后的岩藻聚糖硫酸酯提取物，所述混合树脂为离子交换树脂、大孔树脂和聚酰胺树脂中至少两种树脂的混合。所述提取溶剂为体积比10 30 90 70的己烷和石油醚的混合溶剂。所述己烷是指正己烷、2—甲基戊烷、3—甲基戊烷、2，2 —二甲基丁烷、2，3—二甲基丁烷或环己烷；所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚。所述料液比为1 20 ；35。所述混合树脂为离子交换树脂、大孔树脂和聚酰胺树脂中的任意两种树脂的混合，混合质量比为5 95 5 95。
所述离子交换树脂为阳离子交换树脂，型号为001 X 1 ;001 X 2 ;001 X 3 ;001 X 4 ； 001X7 ；001X7FC ；001X8 ；7320 ；OOlX 10 ；OOlX 16 ；DOOl ；D001FC ；D001SC ；DOO 1MB ；110 ； JKllO ；DKllO ；Dlll ；DlllFC ；DlllSC ；D112 ；D112SC ；122 ；724 ；D113 ；D113FC ；D113SC ； CD-180 ；D151。所述大孔树脂，型号为:AB-8；HPD-100 ；HPD-300 ；HPD722 ；DS401 ；X-5 ；NKA-II ； LKY134 ；DlOl ；D101-1 ；DlOlB ；DA201 ；DM2；D8 ；D6 ；ME-I ；ME-2 ；FL-I ；FL-2 ；SA-I ；XAD-I ； XAD-2 ；XAD-3 ；XAD-4 ；XAD-5 ；XAD-6 ；XAD-7 ；XAD-8 ；XAD-10 ；HP-20 ；HP-30 ；HP-40 ；HP-50。所述聚酰胺树脂为柱层析聚酰胺树脂，型号为14-30目；30-60目；60-100目； 100-120 目；200-400 目。本发明的方法节省了大量溶剂；可以将岩藻黄质提取物和岩藻聚糖硫酸酯提取出来，提高岩藻黄质的提取率的同时，减少了产品中无机盐质量；本发明使用的提取溶剂由于沸点低，溶剂很容易除去，溶剂残留很低。采用本发明的方法不仅提高了提取效率，减少了大量的无机盐、单糖、色素等杂质进入岩藻聚糖硫酸酯粗提液的量，有利于后续纯化。使用混合树脂纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯粗提液，使得无机盐、重金属、叶绿素等杂质一次性被除掉，有效成分损失少，可以大幅提高生产效率，降低生产成本。使用海带提取岩藻黄质后的海带浆渣，再用来提取岩藻聚糖硫酸酯，使得海带原料得到了充分利用。
具体实施例方式下面通过具体的实施例说明本发明综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，下面的描述仅是为了使本领域的技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。在本发明中使用海带提取岩藻黄质后的海带浆渣，再用来提取岩藻聚糖硫酸酯， 使得海带原料得到了充分利用。但本领域技术人员可以理解，也可直接用新鲜海带解冻打浆或干海带复水打浆为原料，按照本发明的方法也可以提取纯化岩藻聚糖硫酸酯。在本发明中使用混合树脂作为分离介质，在提高岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯含量的同时，除去了无机盐，重金属、叶绿素等无机和有机杂质，其中混合树脂选自离子交换树脂、大孔树脂和聚酰胺树脂的任意两种树脂的混合。各实施例中所指料液质量比指的是海带与提取溶剂的质量比。实施例1综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻后用去离子水洗净打浆，以正己烷为提取溶剂，在避光 40°C条件下使用连续逆流提取60分钟，其料液质量比为1 20，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)所得提取液减压浓缩挥尽正己烷，加入1. 5质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另在上述所得海带浆渣中，加入4质量倍体积百分浓度为80%乙醇水溶液，在400w超声提取60分钟，过滤，滤渣加4质量倍去离子水，400w超声提取60分钟，过滤，所得滤液为岩藻聚糖硫酸酯粗提液；
C3)将岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，混合树脂由质量比为20 80的阳离子交换树脂001 X 7与柱层析聚酰胺树脂30-60目组成，用4倍柱体积的去离子水、4倍柱体积的体积百分浓度为50%的乙醇水溶液洗涤，最后用4倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得纯化后的岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为52%，重金属含量小于 lOppm，砷盐含量 1. 66ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液上另一混合树脂柱，混合树脂为质量比由20 80的阳离子交换树脂001 X 7与聚酰胺树脂30-60目组成，用4倍柱体积的去离子水洗脱，收集去离水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量81 %，硫酸基含量33 %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1. 89ppm。实施例2综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以石油醚为提取溶剂，所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚，在避光35°C条件下使用连续逆流提取75分钟，料液的质量比为1 30，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽石油醚后，加入2质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另将所得海带浆渣加入6质量倍体积百分浓度为90%乙醇水溶液在700w功率下超声提取40分钟，过滤，滤渣加6质量倍去离子水，在700w功率下超声提取40分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；C3)将岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，混合树脂是由质量比为50 50为阳离子交换树脂001X4和大孔树脂HPD300组成，用5倍柱体积的去离子水，5倍柱体积的体积百分浓度为75%的乙醇水溶液洗涤，最后用6倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为57%，重金属含量小于5ppm，砷盐含量 0. 88ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液上另一混合树脂柱，混合树脂为质量比为50 50的阳离子交换树脂001 X 3和柱层析聚酰胺树脂14-30目组成，用5倍柱体积去离子水洗脱，收集去离水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量73 %，硫酸基含量M %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1. 96ppm。实施例3综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为50 50的正己烷和石油醚为提取溶剂，所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚，在避光40°C条件下使用连续逆流提取90分钟，料液的质量比为1 35，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂，加入4质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另将所得海带浆渣中，加入8质量倍体积百分浓度为50%的乙醇水溶液，在IOOOw超声提取30分钟，过滤，滤渣加8质量倍去离子水，在IOOOw超声提取30分钟，过滤，所得滤液为岩藻聚糖硫酸酯粗提液；C3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，混合树脂是由质量比为20 80的阳离子交换树脂001 Xl与柱层析聚酰胺树脂60-100目组成，用7倍柱体积的去离子水，7倍柱体积的体积百分浓度为35%的乙醇水溶液洗涤，最后用6倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为51 %，重金属含量小于 lOppm，砷盐含量 1. 62ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为20 80的阳离子交换树脂001X2和柱层析聚酰胺树脂200-400目组成，用7倍柱体积去离子水洗脱，收集洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量86 %，硫酸基含量37 %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1. 91ppm。实施例4综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为70 30的正己烷和石油醚为提取溶剂，所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚，在避光50°C条件下使用连续逆流提取90分钟，料液的质量比为1 10，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂，加入3质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中，加入2质量倍体积百分浓度为50%的乙醇水溶液，在500w超声提取50分钟，过滤，滤渣加5质量倍去离子水，在500w超声提取50分钟， 过滤，所得滤液为岩藻聚糖硫酸酯粗提液；(3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂是由质量比为20 80的阳离子交换树脂001 X 7FC和大孔树脂AB-8组成，用8倍柱体积的去离子水，8倍柱体积的体积百分浓度为20%的乙醇水溶液洗涤，最后用8倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为47%，重金属含量小于lOppm，砷盐含量 2. 45ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液上另一混合树脂柱，该混合树脂是由质量比为20 80 的阳离子交换树脂001X8和柱层析聚酰胺树脂30-60目组成，用8倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量46%，硫酸基含量 21%，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1.87ppm。实施例5综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为99. 9 0. 1的正己烷石油醚为提取溶剂，所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚，在避光 20°C条件下使用连续逆流提取40分钟，料液的质量比为1 40，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入5质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入5质量倍体积百分浓度为60%的乙醇水溶液，在600w超声提取55分钟，过滤，滤渣加7质量倍去离子水在600w超声提取55分钟， 过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；C3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为5 95的阳离子交换树脂7320和大孔树脂HPD100混合组成，用6倍柱体积的去离子水，4倍柱体积的体积百分浓度为40%的乙醇水溶液洗涤，最后用9倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质浸膏，岩藻黄质含量为43%，重金属含量小于lOppm，砷盐含量 2. 82ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为50 50 的阳离子交换树脂001 X 10和柱层析聚酰胺树脂14-30目组成，用6倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量53%，硫酸基含量
，重金属含量小于5ppm，砷盐含量1. 46ppm。实施例6综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以环己烷为提取溶剂，在避光 40°C条件下使用连续逆流提取50分钟，料液质量比为1 25，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入1质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入7质量倍体积百分浓度为70%的乙醇水溶液，在200w超声提取60分钟，过滤，滤渣加3质量倍去离子水在200w超声提取60分钟， 过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；C3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为95 5的阳离子交换树脂001 X 16和柱层析聚酰胺树脂14-30目混合组成，用3倍柱体积的去离子水， 4倍柱体积的体积百分浓度为20%的乙醇水溶液洗涤，最后用4倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为11%，重金属含量小于 5ppm，砷盐含量 0. 72ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为95 5的阳离子交换树脂DOOl和柱层析聚酰胺树脂14-30目组成，用3倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量33%，硫酸基含量11%， 重金属含量小于5ppm，砷盐含量0. 59ppm。实施例7综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为20 80的2 —甲基戊烷和石油醚为提取溶剂，所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚，在避光 30°C条件下使用连续逆流提取80分钟，料液质量比为1 15，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入3. 5质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入3质量倍体积百分浓度为55%的乙醇水溶液，在300w超声提取45分钟，过滤，滤渣加5. 5质量倍去离子水在300w超声提取45 分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；C3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为5 95的阳离子交换树脂D001FC和大孔树脂HPD722混合组成，用10倍柱体积的去离子水，10倍柱体积的体积百分浓度为30%的乙醇水溶液洗涤，最后用10倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为42%，重金属含量小于 lOppm，砷盐含量 2. 8Ippm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为5 95的阳离子交换树脂D001SC和柱层析聚酰胺树脂30-60目组成，用10倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量77 %，硫酸基含量 28 %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量2. 94ppm。
实施例8综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为10 90的正己烷和石油醚为提取溶剂，所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚，在避光30°C条件下使用连续逆流提取阳分钟，料液质量比为1 30，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入4. 5质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入4. 5质量倍体积百分浓度为85%的乙醇水溶液，在800w超声提取35分钟，过滤，滤渣加2质量倍去离子水在800w超声提取35 分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；(3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，混合树脂柱由质量比为50 50的大孔树脂DS401和柱层析聚酰胺树脂30-60目混合组成，用2倍柱体积的去离子水，1倍柱体积的体积百分浓度为80%的乙醇水溶液洗涤，最后用3倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为34%，重金属含量小于lOppm， 砷盐含量2. 54ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为50 50的大孔树脂X-5和柱层析聚酰胺树脂60-100目组成，用2倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量61 %，硫酸基含量，重金属含量小于lOppm，砷盐含量2. 46ppm。实施例9综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为0. 1 99.9的正己烷和石油醚为提取溶剂(石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚)，在避光40°C 条件下使用连续逆流提取85分钟，料液质量比为1 15，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入2. 5质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入5. 5质量倍体积百分浓度为75%的乙醇水溶液，在400w超声提取40分钟，过滤，滤渣加5质量倍去离子水在500w超声提取35 分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；C3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为5 95的大孔树脂NKA-II和聚酰胺30-60目混合组成，用1倍柱体积的去离子水，1倍柱体积的体积百分浓度为80%的乙醇水溶液洗涤，最后用1倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为观％，重金属含量小于lOppm，砷盐含量 1. 83ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为95 5的大孔树脂NKA-II和柱层析聚酰胺树脂30-60目组成，用9倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量56%，硫酸基含量22%，重金属含量小于lOppm，砷盐含量2. 31ppm。实施例10综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为90 10的3 —甲基戊烷和石油醚为提取溶剂，所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚，在避光 40°C条件下使用连续逆流提取75分钟，料液质量比为1 20，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入3质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入4质量倍体积百分浓度为80%的乙醇水溶液，在400w超声提取35分钟，过滤，滤渣加6质量倍去离子水在300w超声提取45分钟， 过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；C3)将所述岩藻黄质粗提液上另一混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为50 50 的大孔树脂LKY134和柱层析聚酰胺树脂30-60目混合组成，用5倍柱体积的去离子水，5 倍柱体积的体积百分浓度为50%的乙醇水溶液洗涤，最后用5倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为19%，重金属含量小于 lOppm，砷盐含量 1. 65ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为50 50的大孔树脂DlOl和柱层析聚酰胺树脂30-60目组成，用1倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量69 %，硫酸基含量27 %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1. 31ppm。实施例11综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为60 40的2，2 一二甲基丁烷和石油醚为提取溶剂(石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚)，在避光40°C条件下使用连续逆流提取65分钟，料液质量比为1 20，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入4质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入6质量倍体积百分浓度为70%的乙醇水溶液，在300w超声提取40分钟，过滤，滤渣加6. 5质量倍去离子水在400w超声提取30分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；(3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为50 50的阳离子交换树脂D001MB和大孔树脂D101-1混合组成，用4倍柱体积的去离子水，5倍柱体积的体积百分浓度为50%的乙醇水溶液洗涤，最后用7倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为沈％，重金属含量小于5ppm，砷盐含量0. 69ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为50 50的阳离子交换树脂D001MB和大孔树脂DlOlB组成，用4倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量43 %，硫酸基含量17 %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1. 48ppm。实施例12综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以正己烷为提取溶剂，在避光 35°C条件下使用连续逆流提取60分钟，料液质量比为1 25，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入2质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入7质量倍体积百分浓度为80%的乙醇水溶液，在400w超声提取45分钟，过滤，滤渣加7. 5质量倍去离子水在500w超声提取30分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；(3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为60 40的大孔树脂DA201和柱层析聚酰胺树脂30-60目组成，用5. 5倍柱体积的去离子水，7倍柱体积的体积百分浓度为25%的乙醇水溶液洗涤，最后用6倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为44%，重金属含量小于lOppm， 砷盐含量1. 54ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为40 60的阳离子交换树脂110和大孔树脂DM2组成，用7. 5倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量56 %，硫酸基含量27 %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1. 51ppm。实施例13综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将去离子水加入干海带浸泡3个小时复水后，清洗干净表面杂质，打浆，以2， 3 一二甲基丁烷为提取溶剂，在避光40°C条件下使用连续逆流提取70分钟，料液质量比为 1 35，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入5质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入6质量倍体积百分浓度为65%的乙醇水溶液，在700w超声提取30分钟，过滤，滤渣加7质量倍去离子水在800w超声提取30分钟， 过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；(3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为70 30的阳离子交换树脂JKllO和大孔树脂D8组成，用7倍柱体积的去离子水，5. 5倍柱体积的体积百分浓度为的乙醇水溶液洗涤，最后用2倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为12%，重金属含量小于lOppm，砷盐含量 1. 78ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为30 70的阳离子交换树脂DKllO和大孔树脂D6组成，用8倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，喷雾干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量61 %，硫酸基含量27 %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1. 83ppm。实施例14综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将去离子水加入干海带浸泡3个小时复水后，清洗干净表面杂质，打浆，以石油醚为提取溶剂(石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚)，在避光45°C条件下使用连续逆流提取50分钟，料液质量比为1 30，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入1质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入8质量倍体积百分浓度为80%的乙醇水溶液，在400w超声提取50分钟，过滤，滤渣加8质量倍去离子水在300w超声提取60分钟， 过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；
C3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为95 5的阳离子交换树脂Dl 13和大孔树脂XAD-4组成，用8倍柱体积的去离子水，9倍柱体积的体积百分浓度为30%的乙醇水溶液洗涤，最后用8倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为8. 5%，重金属含量小于5ppm，砷盐含量 0. 41ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为70 30的阳离子交换树脂D112和柱层析聚酰胺树脂30-60目组成，用7倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，喷雾干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量47%，硫酸基含量18%， 重金属含量小于5ppm，砷盐含量0. 69ppm。试验证明用型号为100-120目的柱层析聚酰胺树脂替代本实施例中的柱层析聚酰胺树脂30-60目，也可以对岩藻聚糖硫酸酯粗提液进行分离。实施例15综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后，以体积比为5 95的正己烷和石油醚为提取溶剂(石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚)，在避光32°C条件下使用连续逆流提取72分钟，料液质量比为1 28，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入2. 6质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入4. 7质量倍体积百分浓度为72%的乙醇水溶液，在350w超声提取42分钟，过滤，滤渣加6. 3质量倍去离子水在450w超声提取48 分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；C3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为70 30的阳离子交换树脂D151和大孔树脂XAD-10组成，用6. 3倍柱体积的去离子水，8倍柱体积的体积百分浓度为57%的乙醇水溶液洗涤，最后用5倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为5. 8 %，重金属含量小于5ppm，砷盐含量 0. 6 Ippm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为45 55的阳离子交换树脂CD180和大孔树脂HP-30组成，用7. 2倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，喷雾干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量43 %，硫酸基含量21 %，重金属含量小于lOppm，砷盐含量0. 93ppm。实施例16综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，包括如下步骤(1)将去离子水加入干海带浸泡3个小时复水后，清洗干净表面杂质，打浆，以体积比为30 70的正己烷和石油醚为提取溶剂，所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚，在避光30°C条件下使用连续逆流提取60分钟，料液质量比为1 25，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加入3质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另向所得海带浆渣中加入5质量倍体积百分浓度为75%的乙醇水溶液，在300w超声提取60分钟，过滤，滤渣加7质量倍去离子水在400w超声提取60分钟， 过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；
(3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，该混合树脂柱由质量比为65 35的阳离子交换树脂7M和大孔树脂SA-I组成，用5倍柱体积的去离子水，7倍柱体积的体积百分浓度为50%的乙醇水溶液洗涤，最后用8倍柱体积的无水乙醇洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥得岩藻黄质提取物，岩藻黄质含量为12. 6 %，重金属含量小于5ppm，砷盐含量 0. 73ppm ；将岩藻聚糖硫酸酯粗提液，上另一混合树脂柱，该混合树脂由质量比为20 80的阳离子交换树脂001 X 7和大孔树脂HP-50组成，用6倍柱体积去离子水洗脱，收集去离子水洗脱液，喷雾干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物，多糖含量59 %，硫酸基含量沈%，重金属含量小于lOppm，砷盐含量1. 22ppm。试验证明用型号为=Dlll；DlllFC ；DlllSC ；D112SC ；122 ；D113FC 或 D113SC 的阳离子交换树脂替代本实施例中的阳离子交换树脂001 X 7，也可以对岩藻聚糖硫酸酯粗提液进行分离。用型号为ME_1；ME-2；FL-I ；FL-2 ；XAD-I；XAD-2 ；XAD-3 ；XAD-5 ；XAD-6 ；XAD-7 ； XAD-8 ；HP-20或HP-40的本实施例中的大孔树脂替代大孔树脂HP-50，也可以对岩藻聚糖硫酸酯粗提液进行分离。
权利要求
1.综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征是包括如下步骤(1)去离子水洗净的海带经打浆机打浆后，用己烷或石油醚或体积比为0.1 99. 9 99. 9 0. 1的己烷和石油醚的混合溶剂为提取溶剂，采用连续逆流提取技术，在避光、20°C 50°C，料液质量比为1 10 40的条件下提取40 90分钟，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后，加1 5质量倍无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另将所得海带浆渣加2-8质量倍体积百分浓度为50% 90%的乙醇水溶液，在200 IOOOw超声提取30 60分钟，过滤，滤渣加2 8质量倍的水在200 IOOOw超声提取30 60分钟，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；(3)将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱，用1 10倍柱体积去离子水、1 10倍柱体积的体积百分浓度为20% 80%乙醇水溶液、1 10倍柱体积的无水乙醇进行洗脱，收集无水乙醇洗脱液，减压干燥或喷雾干燥，即得到纯化后的岩藻黄质提取物；将所述岩藻聚糖硫酸酯粗提液上混合树脂柱，用1 10倍柱体积去离子水进行洗脱，收集去离子水洗脱液，减压干燥或喷雾干燥，即得到纯化后的岩藻聚糖硫酸酯提取物，所述混合树脂为离子交换树脂、大孔树脂和聚酰胺树脂中任意两种树脂的混合。
2.根据权利要求1所述综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述提取溶剂为体积比10 30 90 70的己烷和石油醚的混合溶剂。
3.根据权利要求1或2所述综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述己烷是指正己烷、2 —甲基戊烷、3 —甲基戊烷、2，2 —二甲基丁烷、2，3 一二甲基丁烷或环己烷；所述石油醚是沸点在90摄氏度以下的低沸点石油醚。
4.根据权利要求1所述综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述料液比为1 20 35。
5.根据权利要求1所述综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 其特征在于所述混合树脂为离子交换树脂、大孔树脂和聚酰胺树脂中的任意两种树脂的混合，混合质量比为5 95 5 95。
6.根据权利要求1或5所述综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述离子交换树脂为阳离子交换树脂，型号为001X1 ;001X2 ；001X3 ； 001X4 ；001X7 ；001X7FC ；001X8 ；7320 ；OOlX 10 ；OOlX 16 ；DOOl ；D001FC ；D001SC ； D001MB ；110 JKllO ；DKllO ；Dlll ；DlllFC ；DlllSC；D112 ；D112SC ；122 ；724 ；D113 ；D113FC ； D113SC ；CD-180 或D151。
7.根据权利要求1或5所述综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述大孔树脂型号为:AB-8 ；HPD-100 ；HPD-300 ；HPD722 ；DS401 ；X-5 NKA-II ；LKY134 ；DlOl ；D101-1 ；DlOlB ；DA201 ；DM2 ；D8 ；D6 ；ME-I ；ME-2 ；FL-I ；FL-2 ；SA-I XAD-I ；XAD-2；XAD-3；XAD-4 ；XAD-5 ；XAD-6 ；XAD-7 ；XAD-8 ；XAD-10 ；HP-20 ；HP-30 ；HP-40 HP-50。
8.根据权利要求1或5所述综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述聚酰胺树脂为柱层析聚酰胺树脂，型号为14-30目；30-60目；60-100 目；100-120 目；200-400 目。
全文摘要
本发明公开了一种综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法，该方法包括如下步骤(1)将洗净的海带打浆，用己烷或石油醚采用连续逆流提取，过滤，得海带浆渣和提取液；(2)挥尽溶剂，加无水乙醇溶解，过滤，所得滤液即岩藻黄质粗提液；另将所得海带浆渣加乙醇水溶液，超声提取，过滤，滤渣加水超声提取，过滤，所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液；(3)将所述岩藻黄质粗提液和岩藻聚糖硫酸酯粗提液上混合树脂柱，并进行洗脱分离纯化。本发明的方法节省了大量溶剂；减少了产品中无机盐质量；有效成分损失少，可以大幅提高生产效率，降低生产成本，可以使原料得到了更充分的利用。
文档编号C07D303/32GK102321052SQ20111013947
公开日2012年1月18日 申请日期2011年5月26日 优先权日2011年5月26日
发明者吴巍, 於洪建 申请人:天津市尖峰天然产物研究开发有限公司