LC-MS分析。检测仪器：1100系列高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器(DAD，美国 Agilent公司）；色谱柱为DevelosilC30-UG(4.6mmX250mm，5ym);流动相A:甲醇;流动相B: 甲基叔丁基醚;线性梯度洗脱:〇_15min:B为0 %; 15-22min:B由0 %升至22%; 22-48min:B维 持在22%;48-56111丨11:8由22%升至40% ;56-76111丨11:8为40%。流速为1.01111/111丨11;检测波长 ： 476nm;柱温:35°C;DAD全波长扫描范围：200~800nm;进样量为10yL。通过积分面积，以游离 虾青素为标准品绘制标准曲线，对虾青素单酯/双酯进行定量，并计算其纯度和回收率。 [0029] 实施例1
[0030]以南极磷虾来源的虾青素酯粗提物为原料，称取lkg虾青素酯粗提物，加入5L无水 乙醇，在55°C条件下搅拌，使其充分溶解，成为均匀体系。将该体系置于33°C条件下，静止 2h，然后过滤，收集滤液;滤液置于25°C条件下静置2h，经过滤收集析出物，滤液留用，将收 集得到的析出物利用20°C的95%乙醇溶液洗涤1次，将洗涤后的析出物进行减压干燥，得到 虾青素双酯；再将留用的滤液置于6°C条件下，静止2h，过滤收集析出物，滤液回收重复利 用，将收集得到的析出物利用l〇°C的95%乙醇溶液洗涤1次，将洗涤后的析出物进行减压干 燥，得到虾青素单酯。该实施例制备的虾青素单酯和双酯的纯度和回收率如下表所示：
[0032] 实施例2
[0033]以雨生红球藻来源的虾青素酯粗提物为原料，称取lkg虾青素酯粗提物，加入3L甲 醇，在50°C条件下搅拌，使其充分溶解，成为均匀体系。将该体系置于40°C条件下，静止6h， 然后过滤，收集滤液;滤液置于20°C条件下静置3h，经过滤收集析出物，滤液留用，将收集得 到的析出物利用18°C的无水乙醇洗涤2次，将洗涤后的析出物进行减压干燥，得到虾青素双 酯;再将留用的滤液置于l〇°C条件下，静止4h，过滤收集析出物，滤液回收重复利用，将收集 得到的析出物利用6°C的90%乙醇溶液洗涤2次，将洗涤后的析出物进行减压干燥，得到虾 青素单酯。该实施例制备的虾青素单酯和双酯的纯度和回收率如下表所示：
[0035] 实施例3
[0036]以雨生红球藻来源的虾青素酯粗提物为原料，称取lkg虾青素酯粗提物，加入4L体 积分数为90 %的乙醇水溶液，在55°C条件下搅拌，使其充分溶解，成为均匀体系。将该体系 置于42°C条件下，静止lh，然后过滤，收集滤液;滤液置于26°C条件下静置4h，经过滤收集析 出物，滤液留用，将收集得到的析出物利用16°C的85%乙醇溶液洗涤3次，将洗涤后的析出 物进行减压干燥，得到虾青素双酯;再将留用的滤液置于4°C条件下，静止4h，过滤收集析出 物，滤液回收重复利用，将收集得到的析出物利用4°C的75 %乙醇溶液洗涤2次，将洗涤后的 析出物进行减压干燥，得到虾青素单酯。该实施例制备的虾青素单酯和双酯的纯度和回收 率如下表所示：
[0038]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任 何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等 效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所 作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【主权项】
1. 一种利用溶剂分级冷却结晶制备虾青素单酯和虾青素双酯的方法，其特征在于，所 述的方法包含有如下的步骤： 1) 将虾青素酯粗提物加入到无水乙醇中，在50~70°C条件下搅拌，至充分溶解，然后将 上述溶液体系置于35~38°C条件下静止放置1~6h，然后经离心或过滤，收集清液； 2) 将步骤1)收集得到的清液或滤液置于18~28°C条件下静止放置1~6h，然后经离心 或过滤，收集析出物； 3) 将步骤2)得到的析出物用乙醇溶液洗涤，然后对析出物进行干燥，得到虾青素双酯； 4) 将步骤2)步得到的离心清液或滤液置于4~15°C条件下，静止后进行离心或过滤，收 集析出物和滤液； 5) 将步骤4)收集得到的析出物用乙醇溶液进行洗涤，然后经干燥得到虾青素单酯。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中虾青素酯粗提物的制备方法 如下： 以雨生红球藻、南极磷虾、对虾、蟹为原料，以乙醇、乙酸乙酯和正己烷中的一种或几种 作为提取溶剂，按照料液比为1:3~20浸提1~24h，浸提结束后，经过滤或离心收集浸提液， 然后浸提液经减压浓缩至无溶剂流出，回收浸提溶剂，得到的浓缩物即为虾青素酯粗提物。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中的乙醇溶液为无水乙醇或体 积分数为70~95%的乙醇水溶液。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中洗涤的温度为15~20°C。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤4)中所得的滤液返回步骤1)重复 利用。6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤5)中的乙醇溶液为无水乙醇或体 积分数70~95%的乙醇水溶液。7. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤5)中洗涤的温度为4~10°C。
【专利摘要】本发明提供一种利用溶剂分级冷却结晶制备虾青素单酯和虾青素双酯的方法，选用低级脂肪醇在适当加热的条件下对虾青素酯粗提物中各组分具有较好的溶解性，而随着温度的降低，对不同极性的组分的溶解度变化差异较大，若在醇中加入适量的水，则可使溶剂的极性发生变化，更有利于虾青素酯的分离，而且，由于甘油和水的无限混溶性，使得虾青素酯粗提物中的甘油更容易被除去，同时，水的存在更利于除去体系中的高极性杂质，如：叶绿素及其盐，脂肪酸盐等。而醇对脂肪酸具有良好的溶解性，使得脂肪酸也可被除去。由此可见，利用饱和低级脂肪醇的复合溶剂对虾青素酯粗提物进行分级结晶分离，可获得良好的分离效果。本工艺流程简单，无污染，易于工业化。
【IPC分类】C07C403/24
【公开号】CN105418472
【申请号】CN201510817376
【发明人】薛长湖, 周庆新, 徐杰, 王静凤, 李兆杰, 杨澍, 姜晓明
【申请人】中国海洋大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月21日