一种磷脂酸的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于磷脂技术领域，具体涉及一种磷脂酸的制备方法。
【背景技术】
[0002]磷脂酸(PA )是一种简单的磷脂，是动植物细胞膜、核膜、质体膜的基本成分，是生命的基础物质。脂酸是一种酸性磷脂，是由甘油基、脂肪酸基团、磷酸基组成。脂肪酸基团常为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸等。从化学结构上看，PA为两性化合物，脂肪酸基团的一端具有强的亲油性，而磷酸基团的一端具有强的亲水性。磷脂酸在生物体内含量虽然很少，但却是甘油酯和大多数磷脂的合成的中间体，同时磷脂酸是细胞内重要的第二信使。磷脂酸广泛应用于在食品、药品、化妆品中。
[0003]现有关于磷脂酸的制备方法比较多，有薄层色谱分离、溶剂提取、酶转化以及化学合成等方法。薄层色谱分离、溶剂提取、酶转化法等均以天然磷脂为原料，天然磷脂主要从大豆、花生、葵花子、油菜籽、红化籽、芥籽、芝麻仁、橄榄仁、玉米、棉籽等提取，或是从蛋黄提取。上述现有的方法普遍存在制备量少，工艺繁琐，成本高等缺点。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种磷脂酸的制备方法，该制备方法工艺简洁、能耗和成本较低，易于实现工业化生产，且可大量制备磷脂酸。
[0005]本发明的上述目的是通过采取如下技术手段来实现的:一种磷脂酸的制备方法，包括以下步骤:取粗卵磷脂溶于有机溶剂中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，将粗卵磷脂溶液与磷脂酶D水溶液混合进行酶催化反应，反应完毕分离出有机相，将有机相浓缩干，得浓缩物，将浓缩物采用萃取剂萃取并低温沉淀，保温后取萃取剂不溶物浓缩干后过层析柱，采用洗脱溶剂洗脱后将洗脱液干燥，即获得较高纯度的磷脂酸。
[0006]在上述磷脂酸的制备方法中:
本发明所述的粗卵磷脂的来源优选为大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，所述的粗卵磷脂中磷脂酰胆碱含量不低于10%。
[0007]本发明所述的有机溶剂优选为乙酸乙酯、乙酸丁酯或正己烷；所述的粗卵磷脂溶液的浓度优选为100~200g/L。
[0008]本发明所述的磷脂酶D水溶液中磷脂酶D的酶活优选为4~5U/mL，其pH优选为5.6?6.5o
[0009]本发明所述的粗卵磷脂溶液与所述的磷脂酶D水溶液的体积比优选为1~4:1。
[0010]本发明酶催化反应的温度优选为30~37°C，时间优选为30~40小时。
[0011]本发明所述的萃取剂优选为甲醇，其体积百分含量优选为90~95%，甲醇的用量优选为粗卵磷脂总质量的5~10倍，体积质量比。
[0012]本发明萃取时的温度优选为40~50°C，萃取时间优选为3~5小时；低温沉淀时的温度优选为_10~5°C，保温时间优选为8~16小时。
[0013]本发明所述的层析柱为硅胶层析柱，硅胶与萃取剂不溶物的质量份配比优选为10-20:1，所述硅胶的目数优选为200~300目。
[0014]本发明所述的洗脱溶剂优选为正己烷、环己烷或二氯甲烷。
[0015]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:
(1)本发明所用的原料为大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，因磷脂酰胆碱含量较低而价格低廉；
(2)本发明整体工艺简洁，能耗和成本较低，易于实现规模化工业化，制得的磷脂酸含量60%以上，纯度较高，对我国磷脂工业，保健食品以及药品工业都将具有重要意义。
【具体实施方式】
[0016]以下实施例仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所述技术领域的普通技术人员依据以上本发明公开的内容和各参数所取范围，均可实现本发明的目的。
[0017]实施例1
取100g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰胆碱含量为10%)，加入1000mL乙酸丁酯中搅拌溶解，再配置含酶水溶液1000mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活为4U/mL，调节pH为5.6。混合有机相和水相，于37°C反应30小时。反应完毕分离出有机相，50°C减压脱去有机溶剂得到85克浓缩物。浓缩物用500mL 90%甲醇40°C溶解搅拌3小时，随后冷却至_10°C，保温8小时后分出不溶物，不溶物减压干燥得到甲醇不溶物60克。甲醇不溶物通过600克200目硅胶柱分离纯化，使用正己烷为洗脱剂，TLC追踪监测至洗脱液不含磷脂酸为止，合并洗脱液，正己烷洗脱液干燥即制得磷脂酸产品18g，经过HPLC检测磷脂酸含量约为65%。
[0018]实施例2
200g粗葵花籽卵磷脂原料(磷脂酰胆碱含量为15%)，加入1000mL乙酸丁酯中搅拌溶解，再配置含酶水溶液1000mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活为5U/mL，调节pH为6.5。混合有机相和水相，于30°C反应40小时。反应完毕分离出有机相，50°C减压脱去有机溶剂得到178克浓缩物。浓缩物用2000mL95%甲醇48°C溶解搅拌4小时，随后冷却至_10°C，保温16小时后分出不溶物，不溶物减压干燥得到甲醇不溶物128克。甲醇不溶物通过2600克300目硅胶柱分离纯化，使用正己烷为洗脱机，TLC追踪监测至洗脱液不含磷脂酸为止，合并洗脱液，环己烷洗脱液干燥即制得磷脂酸产品37g，经过HPLC检测磷脂酸含量约为67%。
[0019]实施例3
100g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰胆碱含量为16%)，加入1000mL乙酸乙酯中搅拌溶解，再配置含酶水溶液500mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活为4U/mL，调节pH为5.6。混合有机相和水相，于37°C反应30小时。反应完毕分离出有机相，50°C减压脱去有机溶剂得到87克浓缩物。浓缩物用700mL95%甲醇45°C溶解搅拌3.5小时，随后冷却至0°C，保温12小时后分出不溶物，不溶物减压干燥得到甲醇不溶物70克。甲醇不溶物通过1050克200目硅胶柱分离纯化，使用正己烷为洗脱机，TLC追踪监测至洗脱液不含磷脂酸为止，合并洗脱液，正己烷洗脱液干燥即制得磷脂酸产品20g，经过HPLC检测磷脂酸含量约为62%。
[0020]实施例4
150g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰胆碱含量为18%)，加入1000mL正己烷中搅拌溶解，再配置含酶水溶液300mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活为4.5U/mL，调节pH为5.8。混合有机相和水相，于35°C反应30小时。反应完毕分离出有机相，50°C减压脱去有机溶剂得到90克浓缩物。浓缩物用800mL92%甲醇50°C溶解搅拌5小时，随后冷却至_10°C，保温10小时后分出不溶物，不溶物减压干燥得到甲醇不溶物69克。甲醇不溶物通过1400克300目娃胶柱分离纯化，使用正己烷为洗脱机，TLC追踪监测至洗脱液不含磷脂酸为止，合并洗脱液，二氯甲烷洗脱液干燥即制得磷脂酸产品21g，经过HPLC检测磷脂酸含量约为65%。
[0021]实施例5
100g粗葵花籽卵磷脂原料(磷脂酰胆碱含量为19%)，加入1000mL乙酸丁酯中搅拌溶解，再配置含酶水溶液250mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活为5U/mL，调节pH为5.9。混合有机相和水相，于35°C反应35小时。反应完毕分离出有机相，50°C减压脱去有机溶剂得到92克浓缩物。浓缩物用900mL95%甲醇42°C溶解搅拌3小时，随后冷却至5°C，保温10小时后分出不溶物，不溶物减压干燥得到甲醇不溶物80克。甲醇不溶物通过1500克300目娃胶柱分离纯化，使用环己烷为洗脱机，TLC追踪监测至洗脱液不含磷脂酸为止，合并洗脱液，环己烷洗脱液干燥即制得磷脂酸产品20g，经过HPLC检测磷脂酸含量约为63%。
【主权项】
1.一种磷脂酸的制备方法，其特征是包括以下步骤:取粗卵磷脂溶于有机溶剂中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，将粗卵磷脂溶液与磷脂酶D水溶液混合进行酶催化反应，反应完毕分离出有机相，将有机相浓缩干，得浓缩物，将浓缩物采用萃取剂萃取并低温沉淀，保温后取萃取剂不溶物浓缩干后过层析柱，采用洗脱溶剂洗脱后将洗脱液干燥，即获得较高纯度的磷脂酸。2.根据权利要求1所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:所述的粗卵磷脂的来源为大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，所述的粗卵磷脂中磷脂酰胆碱含量不低于10%。3.根据权利要求1所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:所述的有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯或正己烷；所述的粗卵磷脂溶液的浓度为100~200g/L。4.根据权利要求1或3所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:所述的磷脂酶D水溶液中磷脂酶D的酶活为4~5U/mL，其pH为5.6-6.5。5.根据权利要求1、3或4所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:所述的粗卵磷脂溶液与所述的磷脂酶D水溶液的体积比为1~4:1。6.根据权利要求1所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:酶催化反应的温度为30-37°C，时间为30~40小时。7.根据权利要求1所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:所述的萃取剂为甲醇，其体积百分含量为90~95%，甲醇的用量为粗卵磷脂总质量的5~10倍，体积质量比。8.根据权利要求1或7所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:萃取时的温度为40~50°C，萃取时间为3~5小时；低温沉淀时的温度为_10~5°C，保温时间为8~16小时。9.根据权利要求1所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:所述的层析柱为硅胶层析柱，硅胶与萃取剂不溶物的质量份配比为10~20:1，所述硅胶的目数为200~300目。10.根据权利要求1所述的磷脂酸的制备方法，其特征是:所述的洗脱溶剂为正己烷、环己烷或二氯甲烷。
【专利摘要】本发明公开了一种磷脂酸的制备方法，包括以下步骤：取粗卵磷脂溶于有机溶剂中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，将粗卵磷脂溶液与磷脂酶D水溶液混合进行酶催化反应，反应完毕分离出有机相，将有机相浓缩干，得浓缩物，将浓缩物采用萃取剂萃取并低温沉淀，保温后取萃取剂不溶物浓缩干后过层析柱，采用洗脱溶剂洗脱后将洗脱液干燥，即获得较高纯度的磷脂酸。本发明所用的原料为大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，因磷脂酰胆碱含量较低而价格低廉；该方法整体工艺简洁，能耗和成本较低，易于实现规模化工业化，制得的磷脂酸含量60%以上，纯度较高，对我国磷脂工业，保健食品以及药品工业都将具有重要意义。
【IPC分类】C12P9/00
【公开号】CN105420301
【申请号】CN201510773773
【发明人】杜阳吉, 梁丽敏, 刘春凤, 卫娜
【申请人】广东省食品工业研究所
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月13日