病毒探针
[0063] SEQ ID NO. 2 ：5 ; GGTGGTCTAAGTCCTGAGtacag
[0064] (3)猪副嗜血杆菌探针
[0065] SEQ ID NO. 3 ：5 ; cgttAGTCACAGAAGAAGCACC
[0066] (4)猪流感病毒探针
[0067] SEQ ID NO. 4 :5 ' gTACTGACCAACAAACTCTcta
[0068] (5)猪肺炎支原体探针
[0069] SEQ ID NO. 5 ：5 ; cCGGGCTTATGAAATTATTaa
[0070] (6)猪圆环病毒II型探针
[0071] SEQ ID NO. 6 ：5 ; CATAGGTGAGGGCTGTGGc
[0072] (7)猪细小病毒探针
[0073] SEQ ID NO. 7 ：5 ; CACACCAGCAGCACCTAGaagt
[0074] (8)猪蓝耳病毒探针
[0075] SEQ ID NO. 8 ：5 ; cTGACGCACCAGGATGAGC
[0076] (9)猪伪狂犬病病毒探针
[0077] SEQ ID NO. 9 ：5 ; tGAACATCCTCACCGACTTcat
[0078] (10)猪链球菌探针
[0079] SEQ ID NO. 10 ：5 ; cacagATCCAGATAGCGACATTC
[0080] 实施例2 :用于特异性扩增待检致病病原微生物特定保守核苷酸序列的引物的筛 选
[0081] 用于特异性扩增的引物的有效设计是决定实验成功的最关键环节。目前虽有一些 设计引物的软件和设计引物的一些基本原则，但根据这些设计软件和设计原则，可以设计 出多条不同的引物序列，而采用不同的引物序列会产生不同的效果，个别碱基的替换或增 减都会对试验结果产生重要影响。因此，对于扩增引物的设计并非是常规的软件设计所能 得到的。本实施例中，用于特异性扩增猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、猪瘟病毒、猪副嗜血杆 菌、猪流感病毒、猪肺炎支原体、猪圆环病毒II型、猪细小病毒、猪蓝耳病毒、猪伪狂犬病病 毒和猪链球菌病原基因最初设计有30对引物序列，具体如下：
[0082] N0. 1-1-1 ：5 ; GCGGTAATGGCGATGACAC
[0083] NO. 1-1-2 ：5 ; TCGATATCTCTTGCGCGGTTA
[0084] NO. 1-2-1 ：5 ; GCGGTAATGGCGATGACACCC
[0085] NO. 1-2-2 ：5 ; TCGATATCTCTTGCGCGGTTATCA
[0086] N0. 1-3-1 :5 ' GCGGTAATGGCGATGA
[0087] NO. 1-3-2 ：5 ; TCGATATCTCTTGCGCGG
[0088] NO. 2-1-1 :5 ' GACTAGCAAACGGAGGGACTA
[0089] NO. 2-1-2 ：5 ; GCCAGGGTTAAGGTGTGTCT
[0090] NO. 2-2-1 ：5 ; GACTAGCAAACGGAGGGACTAGCC
[0091] NO. 2-2-2 ：5 ; GCCAGGGTTAAGGTGTGTCTTGGG
[0092] NO. 2-3-1 :5 ' GACTAGCAAACGGAGGG
[0093] NO. 2-3-2 ：5 ; GCCAGGGTTAAGGTGTGT
[0094] NO. 3-1-1 ：5 ; TGATGAGGAAGGGTGGTGTTT
[0095] NO. 3-1-2 ：5 ; TACGCCCAGTCATTCCGATTA
[0096] NO. 3-2-1 :5 ' TGATGAGGAAGGGTGGTGTTTTAA
[0097] NO. 3-2-2 ：5 ; TACGCCCAGTCATTCCGATTAACGC
[0098] NO. 3-3-1 ：5 ; TGATGAGGAAGGGTGGTGT
[0099] NO. 3-3-2 ：5 ; TACGCCCAGTCATTCCGATT
[0100] NO. 4-1-1 ：5 ; TTATGCTGGAGCAAACAGC
[0101] NO. 4-1-2 ：5 ; ACATAGGCATCTGCATTTTGG
[0102] NO. 4-2-1 ：5 ; TTATGCTGGAGCAAACAGCTTCT
[0103] NO. 4-2-2 ：5 ; ACATAGGCATCTGCATTTTGGTAG
[0104] NO. 4-3-1 ：5 ; TTATGCTGGAGCAAAC
[0105] NO. 4-3-2 ：5 ; ACATAGGCATCTGCATT
[0106] NO. 5-1-1 ：5 ; GTGATGGGTGAACATGGTGAT
[0107] NO. 5-1-2 ：5 ; GTGAAATCCGTATTCTCCTCGTA
[0108] NO. 5-2-1 ：5 ; GTGATGGGTGAACATGGTGATCTTT
[0109] NO. 5-2-2 ：5 ; GTGAAATCCGTATTCTCCTCGTAAAT
[0110] NO. 5-3-1 ：5 ; GTGATGGGTGAACATGGT
[0111] NO. 5-3-2 ：5 ; GTGAAATCCGTATTCTCCT
[0112] NO. 6-1-1 ：5 ; AGGTTTGGGGGTAAAGTAGC
[0113] NO. 6-1-2 ：5 ; CTCTGTGCCCTTTGAATACTA
[0114] NO. 6-2-1 ：5 ; AGGTTTGGGGGTAAAGTAGCGGG
[0115] NO. 6-2-2 ：5 ; CTCTGTGCCCTTTGAATACTACAG
[0116] NO. 6-3-1 ：5 ; AGGTTTGGGGGTAAAG
[0117] NO. 6-3-2 ：5 ; CTCTGTGCCCTTTGAATA
[0118] NO. 7-1-1 :5 ' CAGAATCAGCAACCTCACCAC
[0119] NO. 7-1-2 ：5 ; GGGATCTGTTTGTTTGCCATGA
[0120] NO. 7-2-1 ：5 ; CAGAATCAGCAACCTCACCACCAAC
[0121] NO. 7-2-2 ：5 ; GGGATCTGTTTGTTTGCCATGAGTG
[0122] NO. 7-3-1 ：5 ; CAGAATCAGCAACCTCACC
[0123] NO. 7-3-2 ：5 ; GGGATCTGTTTGTTTGCCAT
[0124] NO. 8-1-1 ：5 ; ATGAGTGAACCCGTACTTGTG
[0125] NO. 8-1-2 ：5 ; GTTCTGCGATGGTGCTAGG
[0126] NO. 8-2-1 ：5 ; ATGAGTGAACCCGTACTTGTGCCC
[0127] NO. 8-2-2 ：5 ; GTTCTGCGATGGTGCTAGGGGG
[0128] NO. 8-3-1 ：5 ; ATGAGTGAACCCGTACTT
[0129] NO. 8-3-2 ：5 ; GTTCTGCGATGGTGCTA
[0130] NO. 9-1-1 ：5 ; GTTCAACGAGGGCCAGTACC
[0131] NO. 9-1-2 ：5 ; TGAAGCTGTCGTCGCTCCA
[0132] NO. 9-2-1 ：5 ; GTTCAACGAGGGCCAGTACCGGC
[0133] NO. 9-2-2 ：5 ; TGAAGCTGTCGTCGCTCCAGCA
[0134] NO. 9-3-1 ：5 ; GTTCAACGAGGGCCAGT
[0135] NO. 9-3-2 ：5 ; TGAAGCTGTCGTCGCTCC
[0136] NO. 10-1-1 ：5 ; AGCAGTTCGCACGGACAT
[0137] NO. 10-1-2 ：5 ; GACCCATTTGGACCATCTAAGTAA
[0138] NO. 10-2-1 ：5 ; AGCAGTTCGCACGGACATCCTTT
[0139] NO. 10-2-2 ：5 ; GACCCATTTGGACCATCTAAGTAA
[0140] NO. 10-3-1 ：5 ; AGCAGTTCGCACGGAC
[0141] NO. 10-3-2 ：5 ; GACCCATTTGGACCATCTAA
[0142] 在同一个RT-PCR反应体系中对上述引物的扩增效率进行测试，结果发现，针对每 种病原体的不同引物对，扩增效率差别明显，根据扩增条带的亮度大小，最终确定适用的10 对扩增引物如下：
[0143] NO. 1-1-1 :5 ' GCGGTAATGGCGATGACAC ； (SEQ ID NO. 11)
[0144] NO. 1-1-2 ：5 ; TCGATATCTCTTGCGCGGTTA ； (SEQ ID NO. 12)
[0145] NO. 2-1-1 :5 ' GACTAGCAAACGGAGGGACTA ；(SEQ ID NO. 13)
[0146] NO. 2-1-2 :5 ' GCCAGGGTTAAGGTGTGTCT ; (SEQ ID NO. 14)
[0147] NO. 3-1-1 :5 ' TGATGAGGAAGGGTGGTGTTT ; (SEQ ID NO. 15)
[0148] NO. 3-1-2 :5 ' TACGCCCAGTCATTCCGATTA ; (SEQ ID NO. 16)
[0149] NO. 4-1-1 :5 ' TTATGCTGGAGCAAACAGC ； (SEQ ID NO. 17)
[0150] NO. 4-1-2 ：5 ; ACATAGGCATCTGCATTTTGG；(SEQ ID NO. 18)
[0151] NO. 5-1-1 ：5 ; GTGATGGGTGAACATGGTGAT ； (SEQ ID NO. 19)
[0152] NO. 5-1-2 ：5 ; GTGAAATCCG