到 的、与c 1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子。
[0048]上述一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变为所述单链DNA分子3'末端碱基之外 一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变。
[0049] 为了解决上述技术问题，本发明还提供了上述方法在下述1)-4)任一中的应用：
[0050] 1)在鉴别或辅助鉴别大白菜根肿病抗性中的应用；
[0051] 2)在选育大白菜根肿病抗病品种中的应用；
[0052] 3)大白菜育种中的应用；
[0053] 4)预测大白菜根肿病抗性中的应用。
[0054]上述方法中，所述等位基因特异性PCR的模板为待测大白菜的基因组DNA。
[0055]本发明根据上述SNP位点还开发了一种大白菜的育种方法，包括检测待测大白菜 基因组A0220509373G/T位点的多态性或基因型，选择基因组A0220509373G/T位点的多态性 或基因型为TT的待测大白菜作为亲本进行育种。
[0056] 上述方法中，所述TT是A0220509373G/T位点为T的纯合型，所述GG是 A0220509373G/T位点为C的纯合型，所述TG是A0220509373G/T位点为T和G的杂合型。
[0057]本发明根据上述SNP位点还开发了一组鉴别或辅助鉴别大白菜根肿病抗性的引物 组，所述引物由引物1、引物2和引物3组成。
[0058] 所述引物1为如下al)或a2):
[0059] al)序列1所示的单链DNA分子。
[0060] a2)将al)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到 的、与al)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子。
[0061] 所述引物2为如下bl)或b2):
[0062] bl)序列2所示的单链DNA分子。
[0063] b2)将bl)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到 的、与b 1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子。
[0064] 所述引物3为如下cl)或c2):
[0065] cl)序列3所示的单链DNA分子。
[0066] c2)将cl)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到 的、与c 1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子。
[0067]上述一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变为所述单链DNA分子3'末端碱基之外 一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变。
[0068] 上述引物组中，所述序列1所示的单链DNA分子、所述序列2所示的单链DNA分子与 所述序列3所示的单链DNA分子的摩尔比为12:12:30。
[0069]本发明根据上述SNP位点还开发了含有上述引物组的鉴别或辅助鉴别大白菜根肿 病抗性的试剂或试剂盒。
[0070] 本发明中所涉及的大白菜根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae Woron)所引起的;所述芸薹根肿菌具体为芸薹根肿菌4号生理小种。
[0071]实验证明，利用本发明所提供的SNP位点与其对应的引物对大白菜根肿病抗性的 鉴定结果与利用常规检测方法的鉴定结果相比较，其准确率可以达到92.6%。表明，可利用 本发明所提供的SNP位点与其对应的引物对大白菜根肿病抗性进行鉴定，也可用于选育大 白菜根肿病抗病品种。本发明的优点是分子标记(SNP位点）为共显性，鉴定结果准确可靠、 省时省力、降低了劳动成本，本发明的应用将对加快大白菜抗根肿病育种进程起到重要作 用。
【附图说明】
[0072]图1为A0220509373G/T位点在68份DH群体中的基因分型鉴定图。
【具体实施方式】
[0073]下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为 常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0074]实施例1、分子标记的获得
[0075]为了更好更快地筛选获得抗根肿病资源，促进分子标记辅助选择育种实践的进 行，通过对由68个株系构成的DH群体结合根肿病表型进行QTL定位，在A02染色体上获得了 1 个与根肿病抗性紧密连锁的主效QTL。在该区间进一步设计并筛选SNP标记，最终发现在在 A2染色体第20509373位的碱基有一个G/T突变的SNP位点（序列表序列4中第301位核苷酸）， 该SNP位点命名为A0220509373G/T位点。根据A0220509373G/T SNP位点，设计如下可用于 KASP技术的特异的引物作为分子标记：上游引物A0220509373-FF、上游引物A0220509373-FV 和下游引物 A0220509373-R。
[0076] 上述 A0220509373-FF、A0220509373-FV 和 A0220509373-R 引物委托英国 LGC (Laboratory of the Government Chemist政府化学家实验室)有限公司获得。
[0077] A0220509373-FF、A0220509373-FV 和 A0220509373-R 引物序列特征如下：
[0078] 上游引物 A0220509373-FF:
[0079] GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTTTGTCTGGAATAAGTTGTGTACTGAAAt(序列1);
[0080] 上游引物 A0220509373-FV:
[0081 ] GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTTTGTCTGGAATAAGTTGTGTACTGAAAg(序列2);
[0082] 下游引物 A0220509373-R:
[0083] ACACGCTCAAATTAAAATACCATCACAA(序列3)。
[0084] 上述上游引物最后一位碱基g/t对应A02染色体上第20509373位的SNP位点，即序 列表序列4中第301位核苷酸。
[0085]实施例2、A0220509373分子标记在鉴定大白菜根肿病4号生理小种抗性中的应用
[0086] 1、分子标记鉴定抗大白菜根肿病和大白菜根肿病材料
[0087] i)DNA 提取
[0088] 常规CTAB法分别提取表1中68份DH群体的基因组DNA。
[0089]用琼脂糖电泳和Nanodrop2100分别检测所提取DNA的质量，发现提取的基因组DNA 均达到了相关的质量要求，即琼脂糖电泳显示DNA条带单一，没有明显弥散;Nan〇dr〇p2100 检测A260/280介于1.8-2.0之间（DNA样品没有蛋白污染）；A260/230介于1.8-2.0之间（DNA 样品盐离子浓度低）；270nm没有明显的光吸收(DNA样品没有酚污染）；用于竞争性等位基因 特异性PCR技术检测的DNA用量为4~10ng/每样品。稀释DNA浓度成为lOng/μΙ备用，得到待 测 DNA。
[0090] 2)基于竞争性等位基因特异性PCR
[0091 ]按照英国LGC(Laboratory of the Government Chemist政府化学家实验室）有限 公司提供的标准实验流程，即基于竞争性等位基因特异性PCR技术的实验流程进行实验，以 下试剂除特殊说明为均为LGC公司提供的配套试剂，试剂用量、用法、以及整个实验步骤按 照LGC公司的操作指南GenetypingAssay，Manual Part#15004070 Rev · B进行。KASPar反应 在384微孔板或1536微孔板(Cat. No. 04729749001，Roche)中进行，反应体系为3ul或lul。 [0092]具体步骤为:首先利用K-pette分液工作站在微孔板中加入待测DNA模板(4ngAU) 1.5ul，60°C烘干。然后在Kraken操作系统下利用Meridian加样工作站向每个反应孔中加入 lXMaster mix(KBS-1016_002或Cat.No.KBS-1016_011，Laboratory of the Government Chemist)与引物预混液(实施例1的两条上游引物和下游引物按照摩尔浓度比6:6:15混合， 各引物终浓度为1〇μΜ)，Μ?χ分装完毕立即将微孔板依次放在Kube热封仪和Fusion激光封膜 仪上封膜。PCR反应在高通量水浴系统Hydrocycler中进行，具体程序为94°C预变性，15分 钟;94°C，20秒(变性)一61°C_55°C，1分钟(复性&延伸...