063] 6.制备水解莱菔子分离蛋白浓缩液
[0064]同实施例1，特征是:在搅拌下升温至95°C，再按照活性炭粉质量(kg):莱菔子分离 蛋白水解液体积(L)为1:20的比例，在95°C的条件下搅拌脱色2小时。真空过滤的相对真空 度为-0.09MPa，对收集的真空过滤液，栗入截留分子量为lKDa的超滤器中进行超滤，超滤表 压为0.2MPa，直至超滤截留液的蛋白质质量浓度达到20%时停止。对收集的超滤截留液，平 均分子量为2.5KDa。反渗透表压为0.5MPa，直至反渗透截留液中蛋白质质量浓度达到15% 时停止。对于收集的反渗透截留液，平均分子量为〇.5KDa。
【主权项】
1. 一种制备莱廉子分离蛋白粉和水解浓缩液的方法，其特征在于具体的工艺步骤如 下： 化制备莱廉子残渣 按照脱脂莱廉子粉质量(kg)与pH为3~4巧樣酸溶液的体积化)比为1:4~8的比例，先 将该巧樣酸溶液累入不诱钢水解罐，开启揽拌器和循环热水，待巧樣酸溶液升溫至30~40 °C时，再将脱脂莱廉子粉加入，接着，在30~40°C下揽拌水解4~8小时，水解完成后，将水解 物放料，进入碟式离屯、机，于5000~6000r/min的条件下进行第一次离屯、分离并分别收集第 一次水解离屯、分离渣和水解离屯、上层清液，对收集的第一次水解离屯、分离渣，用螺杆累累 入洗涂蓋中，加入纯净水进行揽拌洗涂两次，每次洗涂时间均为15~30分钟，每次洗涂时纯 净水加入体积均与上述巧樣酸溶液体积相同，每次洗涂完成后，都将洗涂物放料进入碟式 离屯、机，于5000~6000r/min的条件下进行离屯、分离并分别收集洗涂离屯、分离渣和洗涂离 屯、上层清液，对收集的第一次水解离屯、上层清液和两次洗涂离屯、上层清液，进行合并，即为 莱廉素水解液，用于莱廉素的制备;对收集的洗涂离屯、分离渣，即为莱廉子残渣，用于下一 步莱廉子分离蛋白提取液的制备； @制备莱廉子分离蛋白提取液 按第1步收集的莱廉子残渣质量化g)与pH为5~6.5巧樣酸溶液体积化)比为1:4~8的 比例，先将该巧樣酸溶液累入不诱钢提取罐，开启揽拌器和循环热水，待巧樣酸液升溫至45 ~65 °C时，再将莱廉子残渣加入，接着，在45~65 °C下揽拌提取3~5小时，提取完成后，将提 取物放料进入碟式离屯、机，于5000~6000r/min的条件下进行第一次离屯、并分别收集第一 次提取离屯、分离渣和第一次提取离屯、上层清液，对收集的第一次提取离屯、分离渣，加入巧 樣酸溶液进行第二次提取，第二次提取时巧樣酸溶液的加入体积、pH值、浓度、提取时间及 离屯、分离的条件均与第一次提取时相同，第二次提取和离屯、分离完成后，将第一次提取离 屯、上层清液和第二次提取离屯、上层清液合并，即制备出莱廉子分离蛋白提取液，用于下一 步制备莱廉子分离蛋白，对收集的第二次提取离屯、分离渣，进行洗涂离屯、操作，条件过程均 与第1步中洗涂离屯、操作相同，分别收集洗涂离屯、分离渣和洗涂清液，对收集的洗涂离屯、分 离渣，烘干后用作动物饲料或±壤改良剂;对收集的洗涂清液，进行回收巧樣酸处理，循环 使用； 目.制备莱廉子分离蛋白 对第2步收集的莱廉子分离蛋白提取液，累入截留分子量为50K~150KDa的超滤器中， 进行第一级超滤，W截留大分子多糖，超滤表压为0.05~0.2MPa，直至截留液出现明显沉淀 时停止，分别收集第一级超滤截留液和第一级超滤滤过液，对收集的第一级超滤截留液，进 行喷雾干燥，用于制备莱廉子多糖;对收集的第一级超滤滤过液，累入截留分子量为10K~ 30邸a的超滤器中，进行第二级超滤，超滤表压为0.05~0.2M化，直至截留液出现明显沉淀 时停止，分别收集第二级超滤截留液和第二级超滤滤过液，对收集的第二级超滤截留液，累 入碟式离屯、机，于3000~4000r/min的条件下进行离屯、分离，分别收集离屯、渣和离屯、清液， 对收集的离屯、渣，即为莱廉子分离蛋白，一部分用于制备莱廉子分离蛋白冻干粉，另一部分 用于制备莱廉子分离蛋白水解液;对收集的离屯、清液，与第二级超滤滤过液合并，累入截留 分子量为150~500Da的纳滤器中进行纳滤处理，纳滤表压为0.2~0.5MPa，直至纳滤截留液 体积为纳滤滤过液体积的~1/10时停止，分别收集纳滤截留液和纳滤滤过液，对收集的 纳滤截留液，含巧樣酸，与第2步收集的洗涂清液合并，调节抑至3~4,后可再次回收用于下 批次脱脂莱廉子粉水解，生成莱廉素和莱廉子残渣;对收集的纳滤滤过液，进行生化处理， 达标后排放； 势制备莱廉子分离蛋白冻干粉 将第3步收集的莱廉子分离蛋白用螺杆累累入冷冻干燥机，采用真空冷冻干燥法于-20 °C~-5(TC预先将莱廉子分离蛋白里面的水份冻结，冻结5~6小时，冻结实后将其放置于冷 冻干燥机内，开启真空累、真空计，再在真空无菌的环境下将莱廉子分离蛋白里面被冻结的 水份升华，冷冻干燥溫度为-6〇°C~-50°C，绝对真空度为20~50化，即得到莱廉子分离蛋白 冻干粉； 食制备莱廉子分离蛋白水解液 第3步完成后，将第3步收集的莱廉子分离蛋白用螺杆累累入水解罐，在揽拌下加入纯 净水分散10~20分钟，按莱廉子分离蛋白质量化g)与纯净水体积化)之比为1:10~20的比 例，向水解罐中加入物料，向水解罐夹层通入溫度为50°C~60°C的循环水升溫，待水解罐内 莱廉子分离蛋白分散液的溫度上升至50°C~60°C后，用稀氧化钢溶液调节其pH至8.5~ 9.5,再在揽拌下，按照诺维信3.0T碱性蛋白酶与莱廉子分离蛋白的质量之比为1:50~200 的比例加入该酶，，进行第一级酶水解，水解时间1~3小时，水解溫度为50°C~60°C，第一级 酶水解完成后，再在揽拌下加入诺维信复合风味蛋白酶，进行第二级酶水解，水解时间为3 ~5小时，水解溫度为50°C~60°C，加入该酶的质量与上述的诺维信3.0T碱性蛋白酶相同， 第二级酶水解完成后，即制备出莱廉子分离蛋白水解液，用于下步制备水解莱廉子分离蛋 白浓缩液； 良制备水解莱廉子分离蛋白浓缩液 第5步完成后，将第5步收集的莱廉子分离蛋白水解液用螺杆累累入脱色罐中，在揽拌 下升溫至80~95Γ，再按照活性炭粉质量化g):莱廉子分离蛋白水解液体积化)为1:10~20 的比例，加入活性炭粉，在80~95°C的条件下揽拌脱色1~2小时，脱色完成后，在相对真空 度为-0.06~-0.09MPa下进行真空过滤，分别收集真空过滤渣和真空过滤液，对收集的真空 过滤渣，即为废活性炭，送活性炭再生厂进行再生处理;对收集的真空过滤液，累入截留分 子量为化~3邸a的超滤器中进行超滤，超滤表压为0.05~0.2MPa，直至超滤截留液的蛋白 质质量浓度达到15~20%时停止，分别收集超滤截留液和超滤滤过液，对收集的超滤截留 液，即为水解莱廉子分离蛋白浓缩液A，平均分子量为2.5K~3.5脚a,用于配制营养类发用 洗涂剂;对于收集的超滤滤过液，进行反渗透浓缩，反渗透表压为0.1~0.5MPa，直至反渗透 截留液中蛋白质质量浓度达到10~15%时停止，分别收集反渗透滤过液和反渗透截留液， 对收集的反渗透滤过液，即为纯净水，可回用于下批次配制巧樣酸溶液;对于收集的反渗透 截留液，即为水解莱廉子分离蛋白浓缩液B，平均分子量为0.5K~2.5邸a，用于配制营养类 护肤产品。
【专利摘要】一种制备莱菔子分离蛋白粉和水解浓缩液的方法，涉及到蛋白质分离和水解的方法和技术。本发明以脱脂莱菔子粉为原料，先制备莱菔子分离蛋白提取液，再利用超滤技术分离浓缩制备莱菔子分离蛋白；最终经冷冻干燥制备莱菔子分离蛋白冻干粉；另一条工艺路线是将莱菔子分离蛋白酶解；最后利用反渗透技术制备水解莱菔子分离蛋白浓缩液。本发明具有操作简便，设备简单，反应条件温和，节约能源，生产成本低，是一种绿色的生产工艺，便于推广应用等特点。本方法制备的产品可广泛应用于食品和日化等领域。
【IPC分类】A61Q19/00, A61K8/64, C07K1/34, A61K8/97, C12P21/06
【公开号】CN105566444
【申请号】CN201610044381
【发明人】晏艳, 周小华, 石业新, 宿长琼, 余红梅, 杨洋, 袁德宽, 姚萍
【申请人】重庆大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月21日