2,4-二取代-5-氯嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一类具有表皮生长因子受体EGFR抑制活性的噻吩并嘧啶或呋喃并嘧 啶类化合物及其药学上可接受的盐或药学上可接受的溶剂合物，其制备方法、包含该化合 物的药物组合物，以及这些化合物在制备用于预防或治疗与生物体内的表皮生长因子受体 (EGFR)相关的细胞异常增殖、形态变化以及运动功能亢进等相关的疾病，以及与血管新生 或癌转移相关的疾病的药物，尤其是用于治疗或预防肿瘤生长与转移的药物中的用途。
【背景技术】：
[0002] 表皮生长因子受体（EGFR、Erb-Bl)属于一种正常与恶性细胞增殖有关的蛋白质 家族。表皮生长因子受体的过度表现出现在至少70%的人类癌症（Seymour、L. K.、Curr Drug Targets2,2001，117133)例如，非小细胞肺癌、乳癌（breast cancer)、神经胶质 瘤（glioma)、头颈鱗状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma)及前列腺癌 (prostate cancer)(Raymond et al. >Drugs 60 suppl l、2000、discussion 41-2 ;Salomon et al.、Crit Rev Oncol Hematoll9、1995、183_232;Voldborg et al.、Ann Oncol 8、1997、 1197-1206)。因此EGFR-TK广泛被认可为开发及设计化合物之受到瞩目的标靶，所述化合 物可以特异性结合且抑制络氨酸激酶的活性以及其于癌细胞中的信号传导路径，也因此可 以作为诊断剂和治疗剂。举例来说EGFR络氨酸激酶（EGFR-TK)的可逆抑制剂（reversible inhibitor)，TARCEVA，为FDA核准用于治疗NSCLC及晚期胰腺癌。经过核准的其它抗-EGFR 标靶分子包括拉帕替尼（LAPATINIB)及艾瑞莎（IRESSA)。
[0003] 厄洛替尼（erlotinib)及吉非替尼（gefitinib)对所有患肺癌的病人的疗效是有 限的。当厄洛替尼（erlotinib)及吉非替尼（gefitinib)用于治疗所有的肺癌患者，患者 肿瘤收缩（tumor shrinkage)的可能性（反应率）为8-10%及肿瘤恶化的平均时间为约2 个月{shepherd et al NEJM 2004、Thatcher et al. Lancet 2005}。2004 年发现与 EGFR 的体细胞突变有关的肺癌以厄洛替尼（erlotinib)或吉非替尼（gefitinib)治疗后伴随着 明显的临床反应{Paez et al· Science 20004 ;Lynch et al.NEJM 2004 ;Pao et al PNAS 2004}〇
[0004] EGER的体细胞突变（somatic mutations)发生机率在NSCLC患者白人为10-15% 及在亚洲人为30-40%。EGFR的突变越来越频繁的发生于不吸烟者、女性、罹患腺癌 (adenocarcinoma)以及东亚人种患者{Shigematsu et al JNCI 2005}。至今已有6种潜在 的临床试验单纯化疗的EGFR突变病人都以厄洛替尼（erlotinib)或吉非替尼（gefitinib) 有效。这些研究能前瞻性的诊断或治疗超过200位EGFR突变病人。以吉非替尼（gefitinib) 及厄洛替尼（erP各tinib)治疗的患者他们共同表现出放射线反应率（response rate)范 围从60%至82%及其恶化的平均时间为9. 4到13. 3个月。这些结果相较于晚期NSCLC 钼类药物化疗（platin-based chemotherapy)(分别为20-30 %及3-4个月）为3-4倍大 {Schiller、et al JC0 2002}。最近刚完成第III级临床试验，以吉非替尼（gefitinib)治 疗相较于传统化疗（conventional chemotherapy)，单纯的EGFR突变的化学治疗NSCLC患 者有显著的延长（危害率（hazard ratio) = 0.48 (95 % CI;0. 36-0. 64) ;P< 0.0001)无 恶化存活期及肿瘤反应率（71. 3对47.2%，P = 0.0001) {mok et al.EMSO meeting 2008}。 相反地，对于NSCLC晚期患者相较于作为其起初治疗的化疗，当EGFR野生型的NSCLC患者 接收到吉非替尼（gefitinib)有个更坏的结果{Mok et al EMSO meeting 2008}。因此， EGFR突变提供了一个比传统全身化疗更有效重要的选择方法（EGFR TKIs)给NSCLC患者。 在许多临床中心经常以EGER突变来评估NSCLC患者。
【发明内容】
[0005] 本发明是提供一种2,4-二取代-5-氯嘧啶类衍生物的制备方法以及这些化合物 的生物学评价。
[0006] 化合物示例：
[0007]
[0008]
[OGu。」
[0010]
【具体实施方式】
[0011] 下面结合具体实施例进一步阐述本发明。下述实施例应理解为仅用于说明本发明 而不是用于限制本发明的保护范围。
[0012] 下述实施例中所制得的化合物的结构是通过核磁共振0HNMR)和质谱（MS)予以 确定。
[0013] iNMR位移（δ )以百万分之一（ppm)的单位给出。iHNMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定的溶剂为氘代二甲亚砜（DMS0-d 6)，氘代氯仿（⑶Cl3)，内标为四甲 基硅烷（TMS)，化学位移是以10 6作为单位给出。
[0014] MS 的测定是用 FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪（生产商：Therm，型号：Finnigan LCQ advantage MAX)〇
[0015] IC5。值的测定是用NovoStar酶标仪（德国BMG公司）。
[0016] 薄层硅胶是使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板。
[0017] 硅胶柱层析是使用烟台黄海硅胶200~300目硅胶为载体。
[0018] HPLC测试是使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪（Sunfire C18 150X4. 6mm色谱 柱）和 Waters 2695-2996 高压液相色谱仪（Gimini C18 150X4. 6mm 色谱柱）。
[0019] 微波反应是使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
[0020] 另外，以下实施例中无特殊说明，反应均在氮气氛下进行。氩气氛是指反应瓶连接 一个约1L容积的氩气气球。
[0021] 以下实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
[0022] 中间体1-6
[0023]
[0024] 以上六个中间体的制备方法参照专利：W0 2012/061299。
[0025] 实施例1
[0026]
[0027]
[0028] 第一步：
[0029] 室温下将去甲托品醇（2. 565g，15mmol)和4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯（2. 095g， 16. 5mmol)溶解于二甲基亚砜（15ml)中，再向里加碳酸钾（4. 140g，30mmol)，室温搅拌反 应，直至TLC监测原料反应完全，将反应液倒入水中，向里加乙酸乙酯（100ml*3)萃取，再 用饱和氯化钠溶液（l〇〇ml*2)洗涤，得到的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩， 用硅胶柱色谱法纯化所得残留物，得到化合物7 :8-(4-硝基-3-甲氧基-苯基）-8-氮 杂-双环[3, 2,1]辛烷-3-醇（4. 08g，黄色固体），收率：97 %。MS m/z (ESI) :278 [M+1]; 4 MMR(300Hz，CDC13) :8.01(d，lH)，6.25(d，lH)，6. 14(d，lH)，4.28(s，2H)，4.08(s，lH)， 3. 93 (s，3H)，2. 40 (d，2H)，2. 13 (dd，4H)，1. 72 (m，4H)，1. 28 (d，1H)。
[0030] 第二步：
[0031] 室温下将化合物7溶解于甲醇（5ml)中，缓慢加入83mg钯炭（含水1 % )，通 入H2，室温搅拌反应直至TLC监测原料反应完全，抽滤，减压浓缩，得到中间体7 :8_ (4-氨 基-3-甲氧基-苯基）-8-氮杂-双环[3, 2,1]辛烧-3-醇（249mg，淡紫色固体）。MS m/z(ESI) :248 [M+l] ; 4 NMR(300Hz，CDC13-d3) :6. 63 (s，lH)，6.28 (d，2H)，4.02 (d，3H)， 3. 82 (s，3H)，2. 27 (m，5H)，2. 05 (d，3H)，1. 53 (d，2H)，1. 28 (d，1H)。
[0032] 第三步：
[0033] 将中间体1 (286mg，lmmol)和中间体7 (249mg，lmmol)溶解于仲丁醇（8ml)中，向 里加三氟乙酸74ul，100°C下反应直至TLC监测原料反应完全，冷却至室温后，向里加饱和 碳酸氢钠中和，乙酸乙酯（50ml*3)萃取，再用饱和氯化钠溶液（100ml*2)洗涤，得到的有 机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残留物，得到化合物9 (216mg， 黄色固体），收率：43%。m/z(ESI) :497·94[Μ+1] JH NMR(300Hz，CDCl3-d3) :8.25(m，lH)， 8. 16 (m，2H)，7. 59 (m，2H)，6. 26 (s，1H)，5. 99 (m，1H)，4. 08 (s，2H)，3. 98 (s，1H)，3. 80 (s，3H)， 2. 44 (dd，5H)，2. 05 (d，2H)，1. 62 (t，4H)，1. 25 (s，1H)。
[0034] 第四步：
[0035] 称量化合物9(216mg，0. 43mmol)于单口瓶中，向里加铁粉（122mg，2. 17mmol)、氯 化铵（115mg，2. 17mmol)，再加入15ml四氢呋喃和水的混合溶液（比例为1 : 1)，65°C下加 热回流，直至TLC监测原料反应完全，冷却至室温后，抽滤，减压浓缩，向里加水（100ml)乙 酸乙酯（50ml*3)萃取，再用饱和氯化钠溶液（100ml*2)洗涤，得到的有机相用无水硫酸钠 干燥，减压浓缩，用硅胶柱色谱法纯化所得残留物，得到化合物10 (115mg，淡黄色固体），收 率：57%。m/z(ESI) :467·96[Μ+1]。
[0036] 第五步：
[0037] 将化合物 10(115mg，0. 25_〇1)和丙烯酸（26. 6mg，0. 37_〇1)溶解于 Ν，Ν-二 甲基甲酰胺（5ml)中，再向里加1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亚胺盐酸盐（71mg， 0. 37mmol)，室温搅拌反