B型肝炎慢性化素因的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及包括与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因在内的B型肝炎 慢性化和/或病症发展的素因的检测方法、对慢性B型肝炎或其病症发展进行检测的方法、 用于检测B型肝炎慢性化和/或病症发展的素因的试剂、W及包含该试剂的B型肝炎慢性化 和/或病症发展的检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 据称，世界人口的1/3比例的人感染B型肝炎病毒化BVKB型肝炎可大致分为一时 性终止的一时性感染和慢性肝炎。对于急性肝炎，在感染后经1~6个月的潜伏期即出现症 状，几周后进入恢复阶段。然而，在急性肝炎的发病患者中，有1~2%的人具有暴发性肝炎 的发病危险性，暴发性肝炎的发病患者中有70~80%会死亡。
[0003] 另外，由于感染的皿V不从体内清除而在肝脏中停留6个月W上会成为携带者。8~ 9成的携带者在历经无症状期、一时性肝炎期、肝炎平静期之后，W无症状携带者的状态度 过。然而，其中的1~2成会转变成慢性肝炎，其中的一部分会进一步转变成肝硬化、肝癌。据 称，B型肝炎病毒慢性携带者多数分布在东南亚、东太平洋地区，特别是在日本约有150万人 为B型肝炎感染者。
[0004] 皿V感染后的过程有许多分支，人们主要探究了与慢性肝炎、肝癌有关的病毒一方 的遗传因素。然而，近年来，关于宿主一方的遗传因素的探究也在开展之中，根据使用包括 日本人在内的亚洲人样本的全基因组关联分析(Genome Wide Association Study:GWAS)， 报告了与B型慢性肝炎(C皿)有关的新的遗传因素。提出了在皿V持续感染、病毒清除方面， HLA-DPAl和HLA-DPBl与其相关(非专利文献1、非专利文献2)，还提出了HLA-DR与具有连锁 不平衡的HLA-DQ的关联性(非专利文献3)。然而，在使用GWAS的分析中，与慢性化相关的其 他影响力较大的遗传因素未被发现。另外，针对癌变而言，根据近年的GWAS可见，中国报告 了几个宿主遗传因素(非专利文献4和5)。
[0005] 现有技术文献
[0006] 非专利文献
[0007] 非专利文献l:Kamatani Y,Wattanapokayakit S,Ochi H,Kawaguchi T, Takahashi A,et al.(2009)A genome-wide association study identifies variants in the HLA-DP locus associated with chronic hepatitis B in Asians.Nat Genet 41:591-595.
[000引 非专利文献2:Nishida N,et.al. ,Genome-Wide Association Sl:udy Confirming Association of HLA-DP with Protection against Chronic Hepatitis B and Viral Clearance in Japanese and Korean Plos ONE June 2012 vol.7,Issue 5,e39175 [0009]非专利文献3:Mbarek H，0chi H，Urabe Y，Kumar V，Kubo M，et al.(2011)A genome-wide association study of chronic hepatitis B identified novel risk locus in a Japanese population.Hum Mol Genet 20:3884-3892
[0010] 非专利文献4:Li S，Qian J，Yang Y，Zhao W，Dai J，et al . (2012)GWAS Identifies Novel Susceptibility Loci on 6p21.32and 21q21.3for Hepatocellular Carcinoma in Chronic Hepatitis B Virus Carriers.PloS Genet 7(5):e39175
[0011] 非专利文献5:Jiang DK，Sun J，Cao G，Liu Y，Lin D，et al.(2013)Genetic variants in STAT4 and HLA-DQ genes confer risk of hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma.Nat Genet 45:72-5
【发明内容】
[0012] 发明要解决的课题
[0013] 对于HLA-DP而言，虽然已存在通过B型慢性肝炎患者组和比较对照组对等位基因 频率进行比较的报告（非专利文献1)，但是，在该等位基因频率的研究中，由于使用非肝炎 患者组作为比较对照组，因而所引起的问题是，尚不明确该实验结果是否反映了B型慢性肝 炎患者组和健康者组的差异。另外，关于病症发展，与HLA-DPB等位基因的关联也未作研究。
[0014] 因此，本发明的目的在于，使用健康者组、皿V患者组、B型慢性肝炎组和B型肝炎病 症发展组(肝硬化或肝癌)来进行分析，鉴定对B型慢性肝炎和病症发展具有敏感性和抵抗 性的等位基因，从而提供包括与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因在内的B型 肝炎慢性化和/或病症发展的遗传素因的检测方法、慢性B型肝炎、肝硬化或肝癌的检测方 法、用于检测B型肝炎慢性化和/或病症发展的素因的试剂和包含该试剂的B型肝炎慢性化 和/或病症发展的检测试剂盒。
[0015] 解决课题的方法
[0016] 本发明者等人使用健康者组、HBV患者组、B型慢性肝炎组和B型肝炎病症发展组 (肝硬化或肝癌），实施关于HLA-DP的分型，找出了与B型肝炎慢性化有关的等位基因。由此， 建立了使用该等位基因的B型肝炎慢性化和病症发展的素因的检测方法、对慢性B型肝炎、 肝硬化或肝癌进行检测的方法、用于检测B型肝炎慢性化和病症发展的素因的试剂和包括 该试剂的B型肝炎慢性化和病症发展的检测试剂盒。
[0017] 目P，本发明提供了如下技术方案。
[0018] (1) -种B型肝炎慢性化和/或病症发展的素因的检测方法，所述方法包括：
[0019] a)比较工序:将与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因和检测体中对应 于所述等位基因的碱基序列或氨基酸序列进行比较；
[0020] b)分析工序:对检测体中对应于所述等位基因的位点的碱基或氨基酸残基是否与 等位基因的碱基或氨基酸残基一致进行分析;W及，
[0021] C)确定工序:对检测体的B型肝炎是否发生慢性化和/或病症是否发展进行确定。
[0022] (2)如（1)所述的方法，与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因对B型肝 炎慢性化和/或病症发展具有敏感性或者抵抗性。
[0023] (3)如(2)所述的方法，所述与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因的组 合是下述组合中的任意一种:仅所述具有敏感性的等位基因的组合、仅所述具有抵抗性的 等位基因的组合、或者所述具有敏感性的等位基因与所述具有抵抗性的等位基因的组合。
[0024] (4)如(2)或(3)所述的方法，对所述B型肝炎慢性化具有敏感性的等位基因是HLA-DPB1*05: Ol和HLA-DPB1*09: Ol，对所述B型肝炎慢性化具有抵抗性的等位基因是HLA-DPB1* 04:02、化4-0?81*04:01和化4-0?81*02:01，对所述8型慢性肝炎的病症发展具有抵抗性的 等位基因是HLA-DPB1*02: Ol。
[0025] (5)如(2)~(4)中任一项所述的方法，所述对B型肝炎慢性化具有抵抗性的等位基 因的组合是HLA-DPB1*02: Ol、HLA-DPB1*04: Ol或HLA-DPB1*04:0 巧肌 LA-DPB1*05: Ol或HLA-DPB1*09:01。
[0026] (6)根据(1)~(5)所述的方法，对B型肝炎慢性化和/或病症发展进行检测的方法。
[0027] (7)-种用于检测B型肝炎慢性化和/或病症发展的素因的试剂，其含有检测与B型 肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因的引物。
[0028] (8)如（7)所述的试剂，与所述B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因对B 型肝炎慢性化和/或病症发展具有敏感性或者抵抗性。
[0029] (9)如(8)所述的试剂，与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因的组合是 下述组合中的任意一种:仅所述具有敏感性的等位基因的组合、仅所述具有抵抗性的等位 基因的组合、或者所述具有敏感性的等位基因和所述具有抵抗性的等位基因的组合。
[0030] (10)如（8)或（9)所述的试剂，所述对B型肝炎慢性化具有敏感性的等位基因是 化八-0?81*05:01和化4-0?81*09:01，对所述8型肝炎慢性他具抵抗性的等位基因是化八-DPB1*04:02、HLA-DPB1*04: Ol和HLA-DPB1*02: Ol，对所述B型慢性肝炎的病症发展具有抵抗 性的等位基因是HLA-DPB1*02: Ol。
[0031] (11)如(8)~（10)中任一项所述的试剂，对所述B型肝炎慢性化具有抵抗性的等位 基因的组合是化A-DPB1 *02:01、HLA-DPB1 *04:01 或HLA-DPB1 *04:02 和HLA-DPB1 *05:01 或 HLA-DPB1*09:01。
[0032] (12)-种试剂盒，其含有(7)~（11)中任一项所述的用于检测B型肝炎慢性化和/ 或病症发展的素因的试剂，所述试剂包含与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基 因。
[0033] 发明效果
[0034] 在本发明中，对于皿V患者组，通过进行与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等 位基因的分析，能阐明B型肝炎慢性化和/或病症发展的分子机理、并能鉴定药物祀点候选 分子。另外，通过对皿V携带者进行分析，可对该携带者进行分类，从而分成易于发生慢性化 和病症发展的组、W及难W发生慢性化和病症发展的组，其优势在于，能够提供有助于确定 后续治疗方针的信息。从而能预防B型肝炎慢性化和/或病症发展，防止恶化，且能进行合适 的治疗。
[0035] 另外，关于B型肝炎慢性化和病症发展的遗传因素，没有明确包括日本人在内的亚 洲人和西方人之间是否存在同样的倾向。通过本发明的与B型肝炎慢性化和/或病症发展相 关的等位基因，能确定专用于包括日本人在内的亚洲人的B型肝炎慢性化和/或病症发展的 治疗方针、鉴定药物祀点候选分子。
[0036] 进而，还能开发精度更高的检测试剂盒，除了含有该等位基因之外，还含有其他免 疫相关基因的单核巧酸多态性(SNP)。
【附图说明】
[0037] 图1是表示根据本发明的等位基因和DPB1*01:01:01的氨基酸序列的序列比对的 图。
【具体实施方式】
[0038] 本发明设及包括与B型肝炎慢性化和/或病症发展有关的等位基因在内的B型肝炎 慢性化和/或病症发展的遗传素因的检测方法、对慢性B型肝炎和/或其病症发展进行检测 的方法、用于检测B型肝炎慢性化和/或病症发展的素因的试剂、W及包括该试剂的B型肝炎 慢性化和/或病症发展的检测试剂盒。下面对本发明进行说明。
[0039] (1)本发明的与B型肝炎慢性化和/或病症发展相关的等位基因
[0040] 本发明设及与B型肝炎慢性化和/或病症发展相关的等位基因。所谓与B型肝炎慢 性化、病症发展相关的等位基因，是指对B型肝炎慢性化、病症发展具有敏感性(B型肝炎容 易发生慢性化、容易发生病症发展)或具有抵抗性(B型肝炎难W发生慢性化、难W发生病症 发展)的等位基因。
[0041] 在本发明中，"B型肝炎慢性化"是指皿V持续感染的状态，作为发病的主要原因，可 W举出下述情况:来自于皿V持续感染者的母婴感染(垂直感染）的情况;在婴幼儿时期，由 于医疗行为等原因，导致皿V持续感染者的血液、体液侵入至体内的情况;在使用如使身体 的免疫力降低的免疫抑制剂、抗癌