4个月以上，具有超强的耐寒能力，在-130?20°C中，其化学性质和物理结构不会改变，粘温系数低。
[0031]作为本发明所述三维细胞模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤(I)中种植于含有培养基的培养皿中的细胞是密度为80%的二维平板培养经胰酶消化及含血清培养基终止后重悬所得;所述步骤(2)中重新种植于含有培养基的培养皿的细胞是步骤(I)培养后所得细胞经胰酶消化及含血清培养基终止后重悬所得。
[0032]作为本发明所述三维细胞模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤(I)中将细胞按照1:2?1:3的比例种植于含有培养基的培养皿中。即所述步骤(I)中，将细胞按照种植后培养基中的细胞与二维平板培养基中的细胞的比例为1: 2?1: 3的比例种植于含有培养基的培养皿中。
[0033]本发明所述三维细胞模型的构建方法，具有以下有益效果:(I)不依赖传统三维细胞培养所需的基质胶:传统三维培养模型构建需要依赖基质胶，且构建过程中限速步骤多，而本发明所述方法简单，无明显限速步骤，排除了基质胶培养三维模型时易发生软化碎裂的问题，不受实验技术人员熟练程度等的影响；(2)本发明三维细胞模型的构建方法简单、时间跨度小:传统基于基质胶的三维培养模型构建时间约I?2周，本发明方法只需2?4天即可构建成型，构建时间大大缩短；(3)本发明三维细胞模型的构建方法，所构建的三维细胞模型稳定，易于检测:传统基质胶构建的三维细胞培养模型在培养过程中极易出现因为培养基浸泡而导致的模型膨胀软化剂碎裂，而本发明所述方法依靠磁悬浮方法构建三维细胞模型，无需基质胶，构建成功后的三维细胞团结构紧密，不易散开，因而较稳定，利于后续检测。
【附图说明】
[0034]图1为本发明所述方法构建得到的三维细胞模型在显微镜下的一个照片图。
[0035]图2为本发明所述方法构建得到的三维细胞模型在显微镜下的另一照片图。
[0036]图3为本发明所述方法构建得到的三维细胞模型在显微镜下的又一照片图。
[0037]图4为本发明所述方法构建得到的三维细胞模型在显微镜下的再一照片图。
[0038]图5为本发明所述方法中所述磁力控制装置的一种实施例的结构示意图。
[0039]图6为图5所示磁力控制装置另一视向的结构示意图。
[0040 ]图7为图5所示磁力控制装置又一视向的结构示意图。
[0041 ]图中，10为本体，20为磁性体。
【具体实施方式】
[0042]为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
[0043]实施例1
[0044]本发明三维细胞模型的构建方法的一种实施例，本实施例所述三维细胞模型的构建方法包括以下步骤:
[0045](I)将密度为80%的二维平板培养的细胞经胰酶消化及含血清培养基终止后重悬，然后将细胞按照1:2?1:3的比例种植于含有培养基的培养皿中，所述培养皿可采用6孔培养板、12孔培养板、24孔培养板、96孔培养板或384孔培养板等，然后将铁磁性纳米颗粒加入到培养基中并混匀，所述铁磁性纳米颗粒的加入量为:每10000细胞中加入0.5?5微升的铁磁性纳米颗粒，培养至细胞密度达到80?90 %，得到含有铁磁性纳米颗粒的细胞；
[0046](2)将步骤(I)培养后所得细胞经胰酶消化及含血清培养基终止后重悬，重新种植于含有培养基的培养皿中，所述培养皿可采用6孔培养板、12孔培养板、24孔培养板、96孔培养板或384孔培养板等，在培养皿的上方放置与所述培养皿嵌合的磁力控制装置，所述磁力控制装置包括本体和设于所述本体上的磁性体，所述磁性体在所述本体上的分布位置及所述磁性体的数量与所述培养皿上的孔相对应，然后培养18?36小时，即得三维细胞模型。
[0047]所述步骤(I)所用铁磁性纳米颗粒可直接购于市场，亦可采用以下方法制备得到:
[0048](a)取一容器，加入FeCl2和FeCl3得溶液A，所述溶液A中Fe2+/Fe3+的摩尔比为0.75;
[0049](b)在搅拌状态下将氨水加入步骤(a)所得溶液A中，所述氨水与所述溶液A的体积比为2:3?2:6，所述氨水的质量百分浓度为30% ;
[0050](c)将含有氨水的溶液A在80°C下加热，至出现沉淀物质，得到Fe3O4;
[0051](d)向步骤(C)所得沉淀物质中加入含有表面活性剂的乙醇，所述表面活性剂与Fe3O4的摩尔比为1:5，然后再在80°C下继续加热25min，至反应完全;所述表面活性剂为油酰肌氨酸和月桂酰肌氨酸，所述表面活性剂中，所述月桂酸肌氨酸的摩尔含量为O?30% ;
[0052](e)用磁铁吸住分离，然后用蒸馏水对沉淀洗涤多次，除去可溶性杂质；
[0053](f)在60?80 °C的真空环境下对洗涤后的沉淀进行过度水分，即得铁磁性纳米颗粒。
[0054]优选地，上述所述铁磁性纳米颗粒的制备方法还包括以下步骤:
[0055](g)检测步骤(f)得到的铁磁性纳米颗粒的Zeta电位，如为负电荷，将所述铁磁性纳米颗粒中加入多聚赖氨酸，得到多聚赖氨酸修饰的Fe3O4铁磁性纳米颗粒。
[0056]本实施例中所用磁力控制装置的结构图如附图5、6、7所示，所述磁性控制装置包括本体10和设于所述本体10上的磁性体20，所述磁性体20在所述本体10上的分布位置及所述磁性体20的数量与所述培养皿上的孔对应，本实施例中所用磁性控制装置中，所述磁性体20为96个，且均匀的分布在所述本体10上，与96孔培养板上的孔一一对应。当所述培养皿采用其他孔数的培养板时，所述磁性控制装置中磁性体20的分布位置和数量需与培养板上的孔数一一对应，且所述磁性控制装置能够与培养板嵌合一起。
[0057]本实施例所构建的三维细胞模型在显微镜下进行观察，如附图1?5所示，由附图1?5中所述三维细胞模型在显微镜下的照片可看出，采用本实施例所述方法能够有效构建得到三维细胞模型，而且所构建的三维细胞团结构紧密，不易散开，利于后续检测。
[0058]最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详
[0059]细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
【主权项】
1.一种三维细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将细胞种植于含有培养基的培养皿中，然后将铁磁性纳米颗粒加入到培养基中并混匀，培养至细胞密度达到80?90%，得到含有铁磁性纳米颗粒的细胞； (2)将步骤(I)所得含有铁磁性纳米颗粒的细胞重新种植于含有培养基的培养皿中，在培养皿的上方放置与所述培养皿嵌合的磁力控制装置，然后培养18?36小时，即得三维细胞模型； 所述步骤(2)中的磁力控制装置与所述培养皿嵌合设置，且所述磁力控制装置设有磁性体。2.如权利要求1所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中的培养皿为6孔培养板、12孔培养板、24孔培养板、96孔培养板或384孔培养板;所述磁力控制装置包括本体和设于所述本体上的磁性体，所述磁性体在所述本体上的分布位置及所述磁性体的数量与所述培养皿上的孔相对应。3.如权利要求1所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(I)中加入的铁磁性纳米颗粒的量为:每10000细胞中加入0.5?5微升的铁磁性纳米颗粒。4.如权利要求1所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述铁磁性纳米颗粒采用以下方法制备而成: (a)取一容器，加入FeCl2和FeCl3得溶液A，所述溶液A中Fe2VFe3+的摩尔比为0.75; (b)在搅拌状态下将氨水加入步骤(a)所得溶液A中； (c)将含有氨水的溶液A在80°C下加热，至出现沉淀物质，得到Fe3O4; (d)向步骤(c)所得沉淀物质中加入含有表面活性剂的乙醇，然后再在80°C下继续加热15?30min，至反应完全;所述表面活性剂为油酰肌氨酸和月桂酰肌氨酸； (e)用磁铁吸住分离，然后用蒸馏水对沉淀洗涤多次，除去可溶性杂质； (f)在60?80°C的真空环境下对洗涤后的沉淀进行过度水分，即得铁磁性纳米颗粒。5.如权利要求4所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(b)中加入的氨水与所述溶液A的体积比为2:3?2:6，所述氨水的质量百分浓度为20?35%。6.如权利要求4所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(d)中表面活性剂与Fe3O4的摩尔比为1: 3?7;所述表面活性剂中，所述月桂酸肌氨酸的摩尔含量为O?30%。7.如权利要求4所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述铁磁性纳米颗粒的制备方法中还包括以下步骤: (g)检测步骤⑴得到的铁磁性纳米颗粒的Zeta电位，如为负电荷，将所述铁磁性纳米颗粒中加入多聚赖氨酸，得到多聚赖氨酸修饰的Fe3O4铁磁性纳米颗粒。8.如权利要求4所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述铁磁性纳米颗粒的平均粒径为9nm。9.如权利要求1所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(I)中种植于含有培养基的培养皿中的细胞是密度为80%的二维平板培养经胰酶消化及含血清培养基终止后重悬所得;所述步骤(2)中重新种植于含有培养基的培养皿的细胞是步骤(I)培养后所得细胞经胰酶消化及含血清培养基终止后重悬所得。10.如权利要求9所述的三维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(I)中将细胞按照1:2?1:3的比例种植于含有培养基的培养皿中。
【专利摘要】本发明公开一种三维细胞模型的构建方法，所述方法包括以下步骤：(1)将细胞种植于含有培养基的培养皿中，然后将铁磁性纳米颗粒加入到培养基中并混匀，培养至细胞密度达到80～90％，得到含有铁磁性纳米颗粒的细胞；(2)将步骤(1)所得含有铁磁性纳米颗粒的细胞重新种植于含有培养基的培养皿中，在培养皿的上方放置与所述培养皿嵌合的磁力控制装置，然后培养18～36小时，即得三维细胞模型；所述步骤(2)中的磁力控制装置与所述培养皿嵌合设置，且所述磁力控制装置设有磁性体。本发明所述方法能够快速高效构建得到三维细胞模型，且所构建的三维细胞模型结构紧密，不易散开，更加稳定。
【IPC分类】C12N13/00, C12N5/00
【公开号】CN105671029
【申请号】CN201610128744
【发明人】万香波
【申请人】万香波, 范新娟
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月8日