D N0:1的多肤，列举出关于酶参数KM、Vmax、kcatW及 比活性的测定的原始数据。表3显示了在各个ZEN底物浓度下的反应速率，图2显示了各自所 属的米-曼图，和在表4中给出了相应的酶动力学参数。所使用的酶溶液具有68ng/l的浓度。 [0099] 表3:在不同的ZE脚农度下，具有SEQ ID NO: 1的多肤的反应速率。
[0100]
[0101]表4:具有SEQ ID No. I的多肤的酶动力学参数。
[01091
[0103] 所研究的多肤的比活性为：8.2抓/mg,对于沈Q ID No. 1; 10.5抓/mg,对于SEQ ID No.2;8.36U/mg，对于SEQIDNo.3;8.33U/mg，对于SEQIDNo.4;8.5抓/mg，对于沈QID No.5;9.95U/mg，对于SEQIDNo.6;3.83U/mg，对于SEQIDNo.7;2.57U/mg，对于沈QID 齡.8;4.8711/111旨，对于沈9 10齡.9;5.121]/111旨，对于沈9 10齡.10;3.8洲/111旨，对于沈9 10 齡.11;2.7811/111旨，对于沈9 10齡.12;6.431]/111旨，对于沈9 10齡.13;3.331]/111旨，对于沈9 10 No. 14;和7.7抓/mg,对于沈Q ID No. 15。
[0104] 所研究的多肤变体的比活性在表5和表6中列出。
[0105] 表5:具有SEQ ID No. 1的多肤的功能性变体的比活性；突变所位于的保守氨基酸 序列区段;和功能性变体相对于具有SEQ ID No. 1的萊本序列而旨的序列同一性。相对于具 有SEQ ID No. 1的氨基酸序列而
[0106] 言给出了突变的位置。如在实施例2中所描述的那样，
[0107] 借助于BLAST来测算序列同一性。
[010 引
[0114]
Lur。」 巧0:具巧化y iU lNo.Z的步职的功昵巧雙悴的〔u田巧。夭雙的化直足和WT具任 SEQ ID No.2的氨基酸序列而言的。如在实施例2中所 [0116]描述的那样，借助于BLAST来测算序列同一性。
[0117]
[0118] 实施例6:在被污染的玉米中的ZEN和ZEN衍生物的降解
[0119] 为了测定多肤在复杂基质中和在低pH值下降解天然存在的ZEN和ZEN衍生物的能 力，每次给被污染的玉米渗入不同浓度的具有SEQ ID No.1-6的多肤中的一种，并且追踪 ZEN和ZEN衍生物的降解。
[0120] 娠磨被污染的玉米并且将其在降解试验中使用，其中批料由Ig经娠磨的被污染的 玉米、8.9ml IOOmM乙酸盐缓冲液(pH = 4.0)和0.1ml多肤溶液组成。如在实施例5中所描述 的那样，制备经富集和经纯化的多肤溶液，其中将其稀释至10mU/ml、100mU/ml或l，000mU/ ml的浓度。因此，在批料中W绝对方式使用lmU( = lmU/克玉米）、IOmlK = IOmU/克玉米)或 100mLK = IOOmU/克玉米）。每个降解批料W25ml来实施制备，并且在37°C下在W100巧m进行 摇动的情况下进行溫育。在酶添加之前和在1小时的溫育后，分别取出Iml的样品，将多肤在 99°C下加热失活10分钟，并且将样品胆存于-20°C。在样品解冻后，通过离屯、分离开不溶性 成分。如在M. Sulyok等人(2007 ,Anal .Bioanal. Qiem. , 289,1505-1523)中所描述的那样，借 助于LC/MS/MS来测量ZENW及ZEN衍生物的浓度。在该玉米中ZEN和ZEN衍生物的含量为： 238邮b，对于ZEN; 15邮b，对于a-ZEl^; 23ppb，对于P-ZEl^; 32ppb，对于Z14G;和81 邮b，对于 Z14S。在表7中呈现了在所述降解试验中ZEN和ZEN衍生物含量下降的百分比。
[0121] 表7:不同多肤和多肤量的降解试验的相对于起始含量而言的W百分比表示的ZEN 和ZEN衍生物的减少。
[01221
[0123] 实施例7:用于W水解方式裂解ZEN和/或ZEN衍生物的包含多肤的添加剂
[0124] 为了制备用于W水解方式裂解ZEN的添加剂，借助于微量过滤和超滤(排阻极限： IOkDa)在标准条件下纯化经由己斯德毕赤酵母表达的具有SEQ ID No. 1、2、6和13的多肤的 发酵上清液，并且将其浓缩至大约9重量％的干物质浓度。随后，用喷雾干燥器（Bilchi的 Mini B290)同样在标准条件下将该含多肤的溶液进一步加工成干粉末。将运四种粉末相继 地命名为Z1、Z2、Z6和Z13。此外，将Z1、Z2、Z6或Z13与平均粒度为大约化m的膨润±，Wl重 量％的添加剂Z1、Z2、Z6或Z13和99重量％的膨润±的比例，在向上式摇动器中进行混合。将 如此获得的添加剂命名为添加剂21.8、22.8、26.8和213.8。此外，将21、22、26和213与膨润 ±和维生素-微量元素浓缩物，W0.1重量％的21、22、26或213,0.9重量％的维生素-微量元 素浓缩物，和99重量％的膨润±的比例，在向上式摇动器中进行混合。将如此获得的添加剂 命名为添加剂 21.8￥5、22.8￥5、26.8￥5和213.8￥5。100邑的添加剂21.8￥5、22.8￥5、26.8￥5和 213.8￥5包含20〇111肖硫酸铁、5〇111肖硫酸铜、13〇111肖氧化锋、13〇111肖氧化儘、2.55111肖碳酸巧、16〇111邑 维生素 E、6.5mg维生素 K3、6.5mg维生素 Bl、14mg维生素 B2、15mg维生素 B6、0.15mg维生素 BI 2、150mg烟酸、30mg泛酸和5.3mg叶酸。
[01巧]将所述添加剂在50mM Tris-HCl缓冲液(pH=8.2)中抽提30分钟，并且在同一缓冲 液中如此地进一步稀释，从而使得多肤的终浓度位于大约70ng/ml。
[0126] 随后，如在实施例5中所描述的那样，测定运些溶液的降解玉米赤霉締酬的效应。 相应的活性为:8.230U/g，对于Zl; 9.310U/g，对于Z2; 9.214U/g，对于Z6; 83U/g，对于Zl. B; 92U/g，对于Z2 . B; 90U/g，对于Z2 . C; 57U/g，对于Zl3 . B; 8U/g，对于Zl. BVS ; 9U/g，对于 Z2. BVS; 9U/g，对于Z6. BVS;和抓/g，对于Zl 3. BVS。
[0127] 如在实施例4中所描述的那样来施行添加剂Z1、Z2、Z6、Z13、Z1.B、Z2.B、Z6.B、 Z13. B、Z1. BVS、Z2. BVS、Z6. BVS和Z13. BVS 降解 ZEN 衍生物a-ZEL、P-ZEL、a-ZAL、P-ZAL、Z14G、 Z14S和ZAN的能力，但是使用I(K)山的具有大约70ng/ml的多肤浓度的多肤溶液来代替10化I 的细胞裂解物。在6小时的溫育后，起始量的仅仅最大15 %作为未水解的ZEN衍生物存在。 [012引实施例8:最佳溫度
[01巧]为了测定具有SEQ ID No.l、2、5、6、7、9、ll、12和15的多肤的最佳溫度，如在实施 例1中所描述的那样，将它们W具有C-末端6 X化S标签的方式进行克隆，在大肠杆菌中表 达，并纯化。在初步试验中，对于每种多肤，测算出那个浓度，在所述浓度下在试验条件 (Teorell Stenhagen缓冲液（Teorell和Stenhagen,Ein Universalpuffer fiir den pH-Bereich 2.Obis 12.0.Biochem Ztschrft,1938,299:第416-419页），抑 7.5,具有O.lmg/ ml BSA，在30°C下）下在3小时的试验持续时间后可W确保ZEN的完全转化。W所测算出的浓 度在用于测定最佳溫度的降解批料中使用所述制备物。该试验在PCR循环仪化ppendoW) 中，通过使用溫度梯度函数，在2〇°c+/-i(rc下，在4〇°c+/-i(rc下，和如果需要，在6〇°c+/-10°C下(在各自范围内10个溫度;预先确定的PCR循环仪的溫度)来进行。对于批料，在各自 最佳pH下给Teorell-Stenhagen缓冲液渗入相应的酶浓度W及0.1 mg/ml BSA和5ppm ZEN。 具有0.1 mg/ml BSA和5ppm ZEN而没有酶添加的批料用作阴性对照。在0小时、0.5小时、1小 时、2小时和3小时的溫育时间后，对于每个溫育溫度各自抽取一个样品，在99°C下加热失活 10分钟，并且胆存于-20°C。在解冻后，将样品转移到HPLC小瓶中。借助于HPLC-DAD来分析 ZEN、监EN和D监EN。为此，借助于尺寸为4.6mmX 150mm和颗粒大小为扣m的Zorbax SB-Aq C18柱通过色谱法来将代谢物分开。具有5mM乙酸锭的甲醇-水混合物用作流动相。在274nm 下记录UV-信号。代谢物的定量通过包括所携带的标准品系列来进行。最佳溫度的测算通过 测算出的降解曲线的斜率来进行，其中将斜率为最大时所处的溫度定义为最佳溫度。最佳 溫度显不在表8中。
[0130]表8:多肤的最佳溫度。
[0131]
[0132] 实施例9:溫度稳定性
[0133] 为了测定具有SEQ ID No.l、2、5、6、7、9、ll、12和15的多肤的溫度稳定性，如在实 施例1中所描述的那样，将它们W具有C-末端6XHis标签的方式进行克隆，在大肠杆菌中表 达，并纯化。将它们在具有梯度函数的PCR循环仪中在各自的最佳溫度+/-10°C下进行溫育。 在0分钟、15分钟、30分钟和60分钟后，对于每个批料和每个溫度抽取一个样品。随后，在降 解试验中，在具有0.1 mg/ml BSA和5ppm ZEN的处于各自最佳抑下的TeoreU-Stenhagen缓 冲液中，在批料中使用运些经预溫育的样品。在初步试验中，对于每种多肤，测算出那个浓 度，在所述浓度下在试验条件(Teore 11 Stenhagen缓冲液，pH 7.5,具有O.lmg/ml BSA，在 3(TC下）下在3小时的试验持续时间后可W确保ZEN的完全转化。在批料中使用各自所测算 出的酶浓度。在30°C下溫育所述降解批料。在O小时、0.5小时、1小时、2小时和3小时的溫育 时间后进行取样。随后，将多肤在99°C下加热失活10分钟，并且将样品胆存于-20°C。在解冻 后，将样品转移到HPLC小瓶中，并且如在实施例8中所描述的那样借助于HPLC-DAD来进行分 析。
[0134] 将溫度稳定性定义为运样的溫度，在所述溫度下多肤在15分钟的预溫育后具有 50%的残余活性，相比于最佳溫度而言。作为对于活性的量度，考虑降解曲线的斜率。溫度 稳定性显不在表9中。
[0135] 表9:多肤的溫度稳定性(在15分钟的预溫育后50%的残余活性）。
[013A1
[0137]实施例10:最佳抑
[0138] 为了测定具有沈Q ID齡.1、2、5、6、7、9、11、12和15的多肤的最佳抑，如在实施例1 中所描述的那样，将它们W具有C-末端6XHis标签的方式进行克隆，在大肠杆菌中表达，并 纯化。在初步试验中，对于每种多肤，测算出那个浓度，在所述浓度下在试验条件(Teorell Stenhagen缓冲液，pH 7.5，具有O. Img/ml BSA，在30°C下）下在3小时的试验持续时间后可 W确保ZEN的完全转化。在批料中使用各自的酶浓度。所述降解批料在处于3.0、4.0、5.0、 5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、11.0和12.0的抑值下的516扯日邑611缓冲液 中实施制备。为了进行降解，将具有0.1 mg/ml BSA和5ppm ZEN的降解批料在30°C下进行溫 育。在具有O.lmg/ml BSA和5ppm ZEN的处于pH 3.0、pH 7.O和pH 12.O下的Teorell-Stenhagen缓冲液中的批料用作阴性对照。在O小时、0.5小时、1小时、2小时和3小时的溫育 时间后进行取样。随后，将多肤在99°C下加热失活10分钟，并且将样品胆存于-20°C。在解冻 后，将样品转移到HPLC小瓶中，并且如在实施例8中所描述的那样借助于HPLC-DAD来进行分 析。最佳抑的测算通过测算出的降解曲线的斜率来进行，其中将在斜率为最大时所处的pH 值定义为最佳pH。最佳pH显示在表10中。
[0139] 表10:多肤的最佳抑。
[0140]
[0141] 实施例11:在抑5.0下的抑稳定性
[0142] 为了测定pH稳定性，将来自实施例10的多肤在处于pH 5. O和各自最佳pH下的 Teroell-Stenhagen缓冲液中在25°C下溫育1小时。在降解试