溫育48小时，并且与阳性对照 的作用比较（即CYP诱导物：50咖奥美拉挫，CYP1A2;和IOiiM利福平，CYP3A4)。通过使用LC-MS/MS监测特异性CYP探针底物的代谢物形成测定CYP活性（非那西下，CYP1A2;和睾酬， CYP3A4)。通过RT-PCR分析CYP信使核糖核酸(mRNA) W证实CYP诱导潜能。结果如表7中所示。
[0144] 在暴露于化合物1后在全部3个肝细胞批号中CYP1A2或CYP3A4活性和mRNA水平的 改变均低于阳性对照的20%。运些体外数据表明在暴露于人肝细胞中48小时后，化合物1具 有的诱导CYP1A2或CYP3A4的潜能较低。
[0145] 表7.化合物I在人肝细胞中的CYP1A2和CYP3A4诱导 [01461
[0147] a表示为相对于溶剂对照的倍数改变
[0148] NRi未报道，因为响应低于赋形剂对照
[0149] NR嗦报道，因为细胞毒性
[0150] 实施例13.流出物潜在的渗透性
[0151] 使用Caco-2和MadinDarby犬肾(MDCK)野生型细胞系评价化合物1的渗透性。使细 胞暴露于顶面上（巧慢A-至-B方向上的渗透性)或底外侧（巧慢B-至-A方向上的渗透性）的 缓冲液中的药物并且在37 °C溫育1小时。结果如表7中所示。在MDCK和化CO-2细胞系中在A-至-B方向上的渗透性均较高(分别为33和ISxlO-6Cm/秒）。
[0152] 通过使用人P-即(MDR)超表达的MDCK细胞系对化合物1是否为流出物转运蛋白底 物进行评价。在该细胞系中检测赋形剂转运(流出率= 35.1)，表明化合物1是P-gp底物。参 见表8。
[0153] 表8.化c〇-2、MDCK-WT和MDCK-MDR1细胞系中流出率和化合物1回收的概述
[0154]
[0155] 体内药代动力学
[0156] 实施例14.静脉内推注给药
[0157] 在静脉内施用单一推注剂量后，化合物1在所有测试种类中具有低全身清除率和 长半衰期。参见表9。化合物1在小鼠、大鼠、狗和猴子的肝血流中的清除率值表示约为 5.4%、3.6%、13%和26%。分布体积大于全身水体积，表明化合物1分布于组织。
[0158] 表9.单一 IV推注施用后化合物1的平均药代动力学参数
[0159]
[0160] 3hbf，肝血流
[0161] b对小鼠、大鼠和猴子测量的剂量分别为0.32、〇 .47、0.5和0.46mg/kgDPK计算基于 标示剂量。
[0162] 实施例15. 口服生物利用度
[0163] 如表10中所示，给小鼠、大鼠和猴子施用单剂量的化合物1后，化合物1的口服生物 利用度高(>80% )。在猴子中的生物利用度(大于100%)可W解释为IV与口服剂量之间的10 倍差异。化合物1在所有种类中被快速吸收，其中在给药的约1-3小时内观察到最大全身浓 度。
[0164] 表10.给小鼠、大鼠、狗和猴子单一口服施用后化合物1的平均药代动力学参数
[01 化]
[0166] a 赋形剂:q.2%，mc/1% 化S
[0167] b 喷雾干燥的分散液，赋形剂：2 % tPGS/1.5 %HPMCAS-HF/1.5 % PVP-VA，含有 50mM 巧樣酸盐抑5
[016引。对小鼠、大鼠和猴子测量的剂量分别为0.95、0.68、2.6和4.4mg/kgDPK计算基于 标示剂量。
[0169] 表11提供国际专利申请公开号W02011/087776r' 776申请"）中所述的PI3K抑制剂 的药代动力学数据，所述PI3K抑制剂各自具有与化合物1相同的核屯、药效团结构。分别参见 第229、229、234和242页上的'776申请的化合物705、709、735和772。静脉内递送后化合物1 的全身血浆清除率显著地(2.5倍一8倍)低于使用其它化合物在研究中观察到的结果。血浆 清除率数据与静脉内数据、口服暴露、AUC和Cmax值一致。运些数据表明化合物1与运些化合 物相比具有预料不到的有利的药代动力学特性。
[0170] 表11. 口服施用的化合物1与对比化合物相比的平均药代动力学参数
[0171]
[0172] I静脉内推注研究，0.5mg/kg标示剂量;赋形剂355阳G400八5 %NMP/40 %水
[0173] 2 口腔管饲法研究，3mg/kg标示剂量;赋形剂0.2 %MC/1 %化S
[0174] 实施例16.大鼠中的组织分布
[0175] 化合物1在5mg/kg 口服剂量施用于雄性大鼠后充分分布入大部分组织。参见表12。 脑和脑脊髓液(CSF)是显示极低暴露于化合物1的器官，其中Cmax分别为lllng/g和27ng/mL (<0.1 %的血浆暴露）。化合物1充分分布于肝和肾，其中Cmax分别为11400和4770ng/g。组织 与血浆比遵循肝〉肾〉屯、脏〉肺〉脾〉脑乂 SF的趋势。化合物1在每个检查器官中的消除动力学 遵循血浆动力学。没有证据显示单剂量施用后化合物1的组织蓄积。
[0176] 表12.单一 5mg/kg 口服剂量后化合物1的平均组织和血浆浓度W及组织与血浆比
[01771
[0178] B化=低于可计量限。将化合物W在含有50mM巧樣酸盐pH5的2%TPGS/1.5% HPMCAS-HF/ 1.5 % PVP-VA中的喷雾干燥的分散液给药。
[0179 ]实施例17.小鼠 CIA模型中的化合物1
[0180] 将化合物lW2.5mg/kg BID(5mg/kg/天）、5mg/kg BID(l〇mg/kg/天）或lOmg/kg BID(20mg/kg/天)在治疗小鼠的胶原蛋白诱发的关节炎(CIA)模型中测试。W30mg/kg BID (60mg/kg/天）口服给予用作参比标准品的Syk小分子抑制剂福他替尼。将化合物在12/12-小时BID给药方案中给药10天，直到研究结束。用0.2%MC，1 %化S配制化合物1。给药体积为 lOmL/kg。在最终剂量后2、4和12小时采集末端血浆样品。采集全部4个爪和膝并且加工处理 用于组织病理学。
[0181] 使用化合物1治疗在CIA模型中显示显著的有益效果，正如通过评价临床关节炎评 分和关节的组织病理学所确定的。与赋形剂对照相比，用2.5mg/kg BID化合物1 (*d2-l 1)、 5mg/kg BID化合物l(*d2-ll)、10mg/kg BID化合物l(*d2-ll)或30mg/kg BID福他替尼（* d2-ll)治疗的小鼠的每日测定的关节炎评分显著地下降至正常。参见图1。当仅考虑登记时 显示临床关节炎征候的那些爪（治疗爪）时，使用5mg/kg BID化合物l(*d5-ll)或lOmg/kg BID化合物l(*d2-ll)治疗的小鼠的临床关节炎评分显著下降，但使用30mg/kg BID福他替 尼治疗组没有运种情况。参见图2。当仅考虑登记时未显示临床关节炎征候的那些爪(预防 爪)时，与赋形剂对照组比较，使用2.5mg/kg BID化合物1(*(12,4-11)、5111旨/1^化合物1810(* d2-ll)、10mg/kg化合物lBID(*d2-ll)或30mg/kg BID福他替尼（*d5-9)治疗的小鼠的临床 关节炎评分均显著下降。参见图3。
[0182] 如表13中所示，与赋形剂对照组相比，用30mg/kg BID福他替尼（25% )、2.5mg/kg BID化合物1 (28% )、5mg/kg BID化合物1 (63% )或lOmg/kg BID化合物1 (89% )治疗的小鼠 的表示为曲线下的面积(AUC)的临床关节炎评分显著下降至正常。当仅考虑治疗爪时，用 lOmg/kg BID化合物1(79%)治疗的小鼠的关节炎评分AUC显著地下降。当仅考虑预防爪时， 与赋形剂对照组相比，用30mg/kg BID福他替尼(32%)、2.5mg/kg BID化合物l(42%)、5mg/ kg BID化合物I (81 % )和IOmg/kg BID化合物I (98 % )治疗的小鼠的关节炎评分AUC均显著 地下降。
[0183] 表13. CIA模型中化合物1的临床关节炎评分
[0184]
[01化]卸<0.05AN0VA或与赋形剂对比的克(鲁斯卡尔)-瓦(利斯)二氏检验
[0186] 实施例18.小鼠 I抓模型中的化合物1
[0187] 在CD40诱导的结肠炎模型中测试PI3K 丫抑制剂化合物1，W便测定其对疾病过程 的作用。通过将抗-CD40单克隆抗体(激动剂，即活化抗体对于中和抗体)注入T和B细胞缺陷 小鼠 （Rag 1-/-小鼠）W便诱发全身性和肠性炎症、导致通过先天免疫途经的结肠炎和消耗 性疾病来诱发I抓的CD40模型（参见，例如Immunity 25，309-318，2006年8月）。简言之，给 Ragl敲除小鼠 IP注射抗-CD40单克隆抗体FGK45。从第0天开始，用PBS、赋形剂或5mg/kg b. i . d.或lOmg/kg b. i . d.化合物1治疗小鼠。将化合物1W10/14-小时b. i . d.给药方案IP施 用7天。用5%NMP/15%阳G-400/80%的0.5%HPMC-E50水溶液配制化合物1。在研究结束时， 在最终剂量后2小时采集血清和结肠样品用于药物浓度分析。在本研究期间每日测量体重。 在研究结束时，分析在最终剂量后2小时采集的血浆样品中的化合物1浓度。使用高效液相 色谱法/串连质谱化PLC/MS/MS)法测定浓度。
[018引注射抗-CD40单克隆抗体并用赋形剂或PBS治疗的小鼠在第1天开始时具有体重减 轻(测量为距离基线的百分比改变)并且在第3-4天时达到峰值，然后恢复至基线。正如图4 中所示，体重减轻诱发的疾病在PBS治疗组中在第3和4天时分别为17.2%和17%，且赋形剂 治疗组中在第3和4天时分别为12.8%和12.6%。图4还显示与赋形剂对照组相比，使用5mg/ 1^6.1.(1.(卸<0.05(13，**9<0.01(14)或10111邑/1^6.1.(1.(**卸<0.001(13-4)化合物1治疗的 小鼠中体重减轻得到显著抑制。
[0189] 表14化合物1在CD40-诱导的I抓模型中的组织浓度
[0190]
[0191] 尽管为清楚理解的目的已经通过示例和实施例在一定程度上详细描述了上述本 发明，但是显而易见的，本领域技术人员根据本发明的教导可W在不脱离待批权利要求精 神或范围的情况下对本发明进行一些改变和变型。
【主权项】
1. 下式的化合物： 或具约字上η」接受的盐。2. 药物组合物，包含根据权利要求1的化合物和药学上可接受的载体、辅料或赋形剂。3. 治疗选自自身免疫疾病或炎性疾病的疾病或病症或减轻其严重性的方法，所述自身 免疫疾病或炎性疾病选自哮喘、特应性皮炎、鼻炎、过敏性疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、脓 毒性休克、特发性肺纤维化、中风、烧伤、关节病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、动脉粥 样硬化、急性胰腺炎、银肩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病和格雷夫斯病，该方法包 括对所述患者施用权利要求1的化合物或其炎或其药物组合物的步骤。4. 权利要求3的方法，其中所述疾病或障碍是类风湿性关节炎。5. 抑制生物样品中ΡΙ3Κ-γ激酶活性的方法，包括使所述生物样品接触权利要求1的化 合物或包含该化合物的组合物。6. 选择性地抑制ΡΙ3Κ-γ同工型超过抑制至少另一种ΡΙ3Κ同工型的方法，包括使生物 样品接触权利要求1的化合物或包含该化合物的组合物，或者对有此需要的患者施用权利 要求1的化合物或包含该化合物的组合物。7. 权利要求6的方法，其中至少另一种ΡΙ3Κ同工型选自ΡΙ3Κ-α、ΡΙ3Κ-β、ΡΙ3Κ-δ及其组 合。
【专利摘要】本发明涉及用作PI3Kγ的选择性抑制剂的化合物。本发明还提供包含该化合物的药学上可接受的组合物和使用该组合物治疗各种疾病、病症或障碍的方法。
【IPC分类】A61K31/437, A61P1/00, C07D471/04, A61P29/00
【公开号】CN105722838
【申请号】CN201480060785
【发明人】M·J·鲍伊德, A·阿洛诺夫, H·奥多德, J·格林
【申请人】沃泰克斯药物股份有限公司
【公开日】2016年6月29日
【申请日】2014年9月25日
【公告号】CA2925601A1, WO2015048318A1