一种降解酚水的耐高盐热带假丝酵母菌的制作方法
【专利摘要】一种降解酚水的耐高盐热带假丝酵母菌，命名为：假丝酵母FD-ICandidasp.FD-1，在国家专利局指定的保藏单位保藏，保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2014年5月4日，保藏地点：中国武汉武汉大学，保藏号CCTCCNO:M2014180。本发明的优点是：（1)通过驯化的FD-1菌种降解苯酚的效率大大提高，最高可适应并完全降解浓度为1000mg/L的苯酚。（2)该菌降解苯酚的最适培养温度为25°C~37°C，最适pH为6.0~7.0，所适应的温度范围及pH范围均较广，而且能够耐高盐，其最高耐盐度可达到5%，远高出海水的平均盐度（3.5%)，是一种具有良好的应用前景的微生物。
【专利说明】一种降解酚水的耐高盐热带假丝酵母菌
【技术领域】
[0001] 本项发明涉及酵母菌领域。
【背景技术】
[0002] 苯酚是造纸、炼焦、炼油、塑料、纺织、陶瓷等工业废水中的主要污染物，苯酚及其 衍生物属芳香族化合物，是原生质毒物，对生物体具有毒害作用[1]，而且很难被降解。酚类 化合物被美国国家环保局列为129种优先控制污染物黑名单中的一种 ]。由于酚的毒性涉 及水生生物的生长和繁殖，污染饮用水源，对水体造成严重污染[3]。含酚废水在我国水污 染控制中被列为重点解决的有害废水之一。去除工业废水中酚类物质的方法包括微生物降 解、萃取、活性炭吸附和化学氧化等，其中利用微生物降解是一种经济有效且无二次污染的 方法。国内外学者对如何利用微生物清除废水中酚及其衍生物进行了大量的研究，得到一 些可以降解苯酚溶液的菌株，但基本上很少有利用于工业含酚废水的实际处理。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的就是针对目前国内外学者对如何利用微生物清除废水中酚及其衍 生物进行了大量的研究，得到一些可以降解苯酚溶液的菌株，但基本上很少有利用于工业 含酚废水的实际处理之不足，而提供一种降解酚水的耐高盐热带假丝酵母。 本降解酚水的耐高盐热带假丝酵母命名为：假丝酵母FD-KCandida sp.FD-Ι)，在国家 专利局指定的保减单位保减，保减单位名称：中国典型培养物保减中心，保减日期：2014年 5月4日，保藏地点：中国武汉武汉大学，保藏号C C T C CNO :M2014180 本发明的优点是： (1) 通过驯化的FD-I菌种降解苯酚的效率大大提高，最高可适应并完全降解浓度为 1000mg/L的苯酚，在接种的比例以及其他条件保持不变的情况下，接种的菌的浓度越大，降 解需要的时间越短。 (2) 该菌降解苯酚的最适培养温度为25°C?37°C，最适pH为6. (Γ7. 0,所适应的温度 范围及pH范围均较广，而且能够耐高盐，其最高耐盐度可达到5%，远高出海水的平均盐度 (3. 5%)，是一种具有良好的应用前景的微生物。在其他条件不变的情况下，降解时溶液中加 入少量的培养基原料会增加降解的速率，但过量的添加培养基原料一是经济损失较大，二 是其效果不会成比例增加，本实验确定的培养基最优加入比例为0.05%。最适的接种比例为 4% 〇 说明书附图
[0004] 附图1为苯酚溶液标准曲线图。 附图2为FD-I对不同浓度苯酚溶液的降解过程A曲线图。 附图3为FD-I对不同浓度苯酚溶液的降解过程B曲线图。 附图4为FD-I对不同浓度苯酚溶液的降解过程C曲线图。 附图5为FD-I对不同浓度苯酚溶液的降解过程D曲线图。 附图6为各因素对苯酚降解的影响素A曲线图。 附图7为各因素对苯酚降解的影响素B曲线图。 附图8为各因素对苯酚降解的影响素C曲线图。 附图9为各因素对苯酚降解的影响素D曲线图。 附图10为各因素对苯酚降解的影响素E曲线图。
【具体实施方式】
[0005] 假丝酵母FD-I (Candida sp. FD-I)菌种的分离、培养和鉴定 1. 1培养基 I. I. I LB培养基 蛋白胨1%，NaCl 1%，酵母膏0. 5%，琼脂（固体培养基）1. 5%。 I. 1. 2 无机盐筛选培养基 K2HPO4 0· 5g / L，NaCl 0· 2g / L，MnSO4 · H2O 0· 02g / L, CaCl 0. 05g / L, KH2PO4 0. 5g / L, MgSO4 · 7H20 0. Ig / L, Fe2(SO4)3 · H2O 0. 005g / L, (NH4)2SO4 Ig / L，苯酚Ig / L，琼脂I. 5% (固体培养基)。 1.2菌种的分离与富集 直接从工业含酚废水池中取污泥，经稀释101、1〇2、1〇3、1〇 4、1〇5、IO6倍后涂于LB平板上 培养，挑取单菌落用LB液体培养基扩大培养。 1.3菌种的驯化 当LB液体培养基中的菌经培养达到对数生长期后，将菌液逐级接入到苯酚含量为 500mg / L，1000 mg / L，1500 mg / L及2000 mg / L的LB液体培养基中。然后将能够适 应最大浓度苯酚的菌液接种到含苯酚为500 mg / L及1000 mg / L的无机盐培养基中，以 适应最高浓度的菌液的菌株作为菌种保存备用。 1.4菌株鉴定 1.4. 1革兰氏染色法观察平板培养菌落特征，并革兰氏染色，于显微镜下观察其形态。 1. 4. 2分子标记鉴定分别PCR扩增菌的18S rDNA及ITS序列，然后进行BLAST比对， 再用MEGA4软件构建系统发育树，得到FD-I的系统发育关系。 1. 4. 2. I 18S rDNA 序列扩增 引物：5，-CCAACCTGGTTGATCCTGCCAGTA-3 '（正向）;5，-CCTTGTTACGACTTCACCTTCCTCT-3， (反向）。 PCR扩增18S rDNA基因的反应条件如表1-1 : 表1-1 PCR扩增18S rDNA基因的反应步骤
【权利要求】
1. 一种降解酚水的耐高盐热带假丝酵母菌，其特征在于命名为：假丝酵母FD-I (Candida sp.FD-Ι)，在国家专利局指定的保藏单位保藏，保藏单位名称：中国典型培养物 保藏中心，保藏日期：2014年5月4日，保藏地点：中国武汉武汉大学，保藏号C C T C CN O :M 2014180。
【文档编号】C02F101/34GK104212728SQ201410199771
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年5月13日 优先权日:2014年5月13日
【发明者】李小燕, 范明星 申请人:范明星