专利名称：一种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法及应用的制作方法
一种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法及应用技术领域：
本发明涉及亲水色谱固定相技术领域，具体地说，是ー种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法及应用。
背景技木亲水作用色谱最早是由Alpert 提出[A.J.Alpert, J.Chromatogr.A, 1990,499,177]，是近年来色谱领域研究的热点之一。因其对极性化合物有很强的保留及很好的分离选择性，并且与质谱检测良好的兼容性和灵敏度等优点，应用方面也越来越广泛，也越来越受关注。随着对硅胶的表面修饰，将硅胶表面固载上糖作为ー种新型的亲水色谱固定相也得到了很快的发展[P.Hemstrom, et al, J.Sep.Sci, 2006, 29,1784]。糖基修饰的娃胶固定相具有高柱效、高选择性和稳定性，适用于分离各种强极性化合物，如单糖、寡糖、糖醇、核苷和氨基酸等，具有很广泛的应用前景。目前常见的多糖色谱固定相有利用点击化学所制备的键合多糖亲水色谱材料，如键合￠-环糊精[X.Liang, et al, Chem.commun, 2007,2491]和键合麦芽糖[X.Liang，et al，Anal.Methods，2010，2，217]，对极性化合物及寡糖样品都有很好的保留及很强的分离选择性。虽然改制备方法非常高效，但也存在它的缺陷，如步骤繁琐影响产率，还有反应过程中使用了大量有机试剂。基于以上的研究背景，发明人开发出了ー种新型的亲水色谱固定相及其制备方法，利用离子相互作用原理，将带不同电荷硅胶与阳离子多糖结合，以制备附聚型的多糖色谱固定相。此方法优势在于反应简单易控，稳定性高，在水系中涂覆更为环保安全。同时在糖生物学和糖蛋白组学中都取得了很好的应用。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法及应用。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:—种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相，其化学结构式如图8所示:其中Silica Gel为娃胶,带负电荷，saccharide为季铵化的多糖,带正电荷。一种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其具体步骤为:(I)硅胶预处理硅胶加入质量浓度为I 40%的盐酸或硝酸溶液中，加热回流搅拌I 48小时，过滤，水洗至中性，于100 160°C下干燥至恒重；(2)硅胶表面修饰将步骤(I)所得的活化硅胶 置于玻璃或者聚四氟こ烯反应容器中，在氮气氛围下加入有机溶剂，搅拌均匀，滴加硅烷试剂，保持温度为20 200°C条件下搅拌2 48小吋。待反应体系冷却至室温，减压过滤并用甲苯、丙酮、甲醇水、甲醇洗涤，固体产品在60 100°C条件下干燥12 36小时；所述的有机溶剂为与水不互溶的有机溶剂，包括甲苯、こ苯、ニ甲苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、正辛烷、环己烷等苯系物和烷烃；所述的有机溶剂的使用量为每克活化硅胶使用2 IOOmL有机溶剂；硅烷试剂结
构式为:
权利要求
1.一种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相，其特征在于，其化学结构式为:
2.一种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，其具体步骤为: (1)硅胶预处理 硅胶加入质量浓度为I 40%的盐酸或硝酸溶液中，加热回流搅拌I 48小时，过滤，水洗至中性，于100 160°C下干燥至恒重； (2)娃胶表面修饰 将步骤(I)所得的活化硅胶置于玻璃或者聚四氟こ烯反应容器中，在氮气氛围下加入有机溶剂，搅拌均匀，滴加硅烷试剂，保持温度为20 200°C条件下搅拌2 48小吋。待反应体系冷却至室温，减压过滤并用甲苯、丙酮、甲醇水、甲醇洗涤，固体产品在60 100°C条件下干燥12 36小时； (3)磺化过程 将步骤(2)所得产品加入到含有质量分数为30%过氧化氢溶液和含浓硫酸的甲醇溶液的混合溶液中，搅拌均匀，保持温度为10 40°C条件下搅拌2 48小时；反应结束后减压过滤并用水、甲醇洗涤，固体产品在60 100°C条件下干燥12 36小时； (4)涂覆过程 将步骤(3)所得产品与阳离子多糖水溶液混合，搅拌均匀，保持温度为10 40°C条件下搅拌I 60分钟；反应结束后减压过滤并用水、甲醇洗涤，固体产品在60 100°C条件下干燥12 36小时。
3.如权利要求2所述的ー种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤⑵中，所述的有机溶剂为与水不互溶的有机溶剂，包括甲苯、こ苯、ニ甲苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、正辛烷、环己烷等苯系物和烷烃。
4.如权利要求2所述的ー种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的有机溶剂的使用量为每克活化硅胶使用2 IOOmL有机溶齐U。
5.如权利要求2所述的ー种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，硅烷试剂结构式为:X3Si"9^A 其中，X为-OCH3,-OCH2CH3或-Cl，m= I 12，A为SH;硅烷试剂的使用量为每克活化娃胶使用0.5 5mmol。
6.如权利要求2所述的ー种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的混合溶液的使用量为每克硅胶使用2 IOOmL质量分数为30%过氧化氢溶液，1 1OmL甲醇溶液及0.01 ImL浓硫酸溶液。
7.如权利要求2所述的ー种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(4)中，所述的阳离子多糖包括阳离子纤维素，阳离子淀粉等等，分子量范围在100 200万之间。
8.如权利要求2所述的ー种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(4)中，所述的阳离子 多糖的使用量为每克硅胶使用0.01 lg，所配置的水溶液浓度为0.1 % 10%。
9.一种阳离子多糖涂覆型亲水色谱固定相在糖生物学和糖蛋白组学中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种阳离子多糖涂覆型色谱固定相的制备方法及应用，其中Silica Gel为硅胶，带负电荷，saccharide为季铵化的多糖，带正电荷。本发明提供了上述固定相材料的制备方法，利用离子相互作用，将表面磺化的硅胶与带正电荷的阳离子多糖在水溶液体系中结合，以制备附聚型的色谱固定相。该固定相得制备方法对比于传统的键合糖型固定相更为高效，方便，环保。同时具有很好的分离选择性，重复性和稳定性。对于分离其他类型的极性化合物有很大的应用潜在性，在糖生物学和糖蛋白组学都将有很广泛的应用。
文档编号B01J20/286GK103120932SQ201310066189
公开日2013年5月29日 申请日期2013年3月1日 优先权日2013年3月1日
发明者梁鑫淼, 柯燕雄, 盛骞莹 申请人:华东理工大学