一种新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的制备方法
【专利摘要】本发明提供一种基于苯丙氨酸的新型手性色谱柱固定相的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：第一步，硅胶球表面处理；第二步，苯丙氨酸手性选择器单体的制备；第三步，手性色谱柱固定相的制备。本发明方法具有的有益效果是：1)工艺路线简单、成本低廉、操作方便；2)制备的手性色谱柱固定相具有较宽的手性选择性；3)流动相适用范围广，固定相结合力好，不易流失，使用寿命长；4)分离时间短，不拖尾，柱效高等。
【专利说明】一种新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及属于液相色谱手性分离领域，具体涉及一种基于苯丙氨酸的新型手性 色谱柱固定相的制备方法。
【背景技术】
[0002] 手性是人类赖以生存的自然界的本质属性之一。生命现象中的化学过程都是在高 度不对称的环境中进行的。众所周知，手性化合物中单一光学纯对映体表现出不同毒性、药 理以及生物活性等特性，所以分离和纯化对映体在制药等很多科学领域得到越来越多的重 视。
[0003] 目前市场上出售的处方药中超过60%的药物分子中含有一个或多个手性中心，而 这类手性药物中的绝大多数是以外消旋的形式在市场销售。而手性药物往往只有对映体 的一种是有效成分，而另一种没有治疗效果甚至还会引起毒副作用，例如反应停，早在I960 年用作镇静和安眠药，用于治疗妊娠期的不良反应。但是后来发现，换孕早期的妇女服用此 药会引起胎儿严重畸形，使该药停止使用。1979年发现，仅R- (+)对映体沙利度胺具有镇静 和安眠作用。而S-(_)对映体对胎儿有致畸作用。到20世纪80年代以后人们才逐渐认识 到手性在药物中的重要性。
[0004] 中国专利申请号为99117305. 8公开了一种手性配体交换色谱固定相及其制备方 法，它以L-苯丙氨酸为原料，制备一类新型手性选择器，将其于涂敷于固定相上，可实现对 氨基酸样品的直接拆分。其不足之处在于分离所需时间较长，后流出组分拖尾较严重，而且 固定相容易流失，限制了它的使用寿命。中国申请专利（申请号为CN200480043803. X)公开 了一种化学键合手性固定相及制备方法，使用脯氨酸作为手性选择剂，通过化学键合的方 法将其键合于载体上，可对多种不同类型的手性化合物实现分离，其不足之处在于制备繁 琐，柱效不高，稳定性不好。本发明制备固定相工艺路线简单、成本低廉、操作方便；制备的 手性色谱柱固定相具有较宽的手性选择性；流动相适用范围广，固定相结合力好不易流失， 使用寿命长等；且分离时间短，不拖尾，柱效高。
【发明内容】
[0005] 本发明涉及一种基于苯丙氨酸酸的新型手性色谱柱固定相的制备方法，以苯丙氨 酸衍生物为母体，设计合成了具有下列通式的手性固定相：
[0006] 载体-连接基-多肽基团-NH-P
[0007]
【权利要求】
1. 一种新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的制备方法，其特征是：所述制备方法包括以 下步骤， 1) 载体娃胶球的前处理： 取5. Og娃胶球加入爺形瓶，再加入10mL的12mol/L的浓盐酸，加热回流1?24h ;过 滤除去浓盐酸，水洗硅胶球至呈中性，依次用丙酮和无水乙醚冲洗，真空干燥； 2) 苯丙氨酸手性单体的制备： (1) Z-苯丙氨酸的合成： 冰水浴下在装有1. 0L去离子水的三颈瓶中依次加入0. 1?lOmol氢氧化钠,0. 1? lOmol苯丙氨酸，搅拌全溶后，向溶液中滴加含有0. 1?lOmol节氧酰氯和0. 1?lOmol氢 氧化钠的1.0L去离子水溶液，室温下搅拌5?20h ;用乙醚萃取，在萃取出的水相中加入浓 盐酸，至水相呈酸性，加入乙酸乙酯萃取，水洗至呈中性，分出的有机相用无水硫酸钠干燥， 旋转蒸发除去乙酸乙酯，滤去硫酸钠；之后用四氯化碳及石油醚重结晶，干燥后即得Z-苯 丙氨酸； (2) Z-苯丙氨酸-芳香胺的反应： 称取0. 1?lOmol由步骤（1)制得的Z-苯丙氨酸加入三颈瓶中，再加入50?lOOOmLN， N-二甲基甲酰胺，加热搅拌溶解，再加入0. 1?10mol苯并三氮唑-N，N，K-四甲 基脲六氟磷酸酯，搅拌1?5h后加入0. 1?lOmol三乙胺，称取0. 1?lOmol芳香胺溶解 于50?500mL N，N-二甲基甲酰胺中加入到混合液中，常温搅拌1?10h，45°C下搅拌1? 50h，然后向三颈瓶中加入去离子水析出沉淀，过滤，滤饼真空干燥，用乙醇重结晶，抽滤，真 空干燥； (3) 脱去节氧基保护： 向250mL的三颈瓶中加入0. 1?lOmol步骤（2)产物，加入乙醇溶解，加入少量用乙醇 稀释的钯碳，通入氢气反应，当溶液冷却后没有固体析出时，停止反应，抽滤除去钯碳，滤液 浓缩干后，用四氢呋喃和石油醚重结晶； (4) 与Z-苯丙氨酸反应： 称取0. 1?lOmol的Z-苯丙氨酸在三颈瓶中，加入50?1000mL的N，N-二甲基甲酰 胺加热搅拌溶解，加入0.1?lOmol苯并三氮唑-Ν，Ν，Ν'，Ν'-四甲基脲六氟磷酸酯，搅 拌1?5h后加入0. 1?lOmol的三乙胺，称取0. 1?lOmol的步骤（3)产物溶解于50? 500mLN，N-二甲基甲酰胺中加入到混合液中，常温下搅拌1?10h，45°C下搅拌1?50h，然 后向三颈瓶中加入去离子水析出沉淀，过滤，滤饼真空干燥，用四氢呋喃重结晶，抽滤，真空 干燥； (5) Z-苯丙氨酸二肽衍生物的合成： 向250mL的三颈瓶中加入0. 1?lOmol步骤（4)产物，加入四氢呋喃溶解，加入少量用 四氢呋喃稀释的钯碳，通入氢气反应，当溶液冷却后没有固体析出时，停止反应，抽滤除去 钯碳，滤液浓缩干后，用四氢呋喃，和石油醚重结晶； (6) 手性单体的合成： 氮气保护下向反应瓶中加入〇· lmol?lOmol步骤（5)产物，然后加入10?1000mL 二氯甲烷，搅拌溶解，在加入用二氯甲烷稀释的〇. 1?lOmol异氰酸酯基硅氧烷，室温反应 10-24h，在氮气保护下滤去滤液，滤饼分别用50-500mL重蒸的二氯甲烷，石油醚洗涤，即得 手性单体； 3)手性固定相的制备： 取1?500mg在步骤2)中制得的手性单体加入茄形瓶中，然后加入在步骤1)中制得 的经过前处理载体硅胶球和适量甲苯，加热回流，用分水器除水1?l〇〇h后过滤，依次用丙 酮、乙醚冲洗滤出的固体，真空干燥，即得本新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相。
2. 根据权利要求1所述的新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的制备方法，其特征是：本 新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的结构通式为，
其中，η为1?10的任意整数；R1为苯甲基；P为芳基。
3. 根据权利要求1所述的新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的制备方法，其特征是：步 骤（1)中所述的苯丙氨酸为L-苯丙氨酸或者D-苯丙氨酸。
4. 根据权利要求1所述的新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的制备方法，其特征是：步 骤（2)中所述的芳香胺为苯胺、3, 5-二甲基苯胺、3, 5-二氯苯胺、3, 5-二甲氧基苯胺、3， 5_二氟苯胺、三苯甲基苯胺、α-萘胺和α-甲基萘胺中的一种。
5. 根据权利要求1所述的新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的制备方法，其特征是：步 骤（6)中所述的异氰酸酯基硅氧烷为3-异氰酸酯基丙基三乙氧基硅烷、4-异氰酸酯基丁基 二乙氧基娃烧、5-异氰酸酯基戊基二乙氧基娃烧、6-异氰酸酯基己基二乙氧基娃烧、7-异 氰酸酯基庚基三乙氧基硅烷、8-异氰酸酯基辛基三乙氧基硅烷、9-异氰酸酯基寅基三乙氧 基娃烧和1〇 _异氛酸醋基癸基二乙氧基娃烧中的一种。
6. 根据权利要求1-5任一所述的新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相的制备方法，其特 征在于：本新型苯丙氨酸手性色谱柱固定相用标准匀浆填充法装入4. 6mmX 250mm HPLC柱 中。
【文档编号】B01J20/29GK104289210SQ201410320290
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年7月2日 优先权日:2014年7月2日
【发明者】杨永刚, 李艺, 李宝宗, 王庆峰 申请人:苏州苏凯路化学科技有限公司