专利名称：一种酶催化合成坦西莫司的方法
技术领域：
本发明涉及一种坦西莫司的制备方法，特别涉及一种酶催化合成坦西莫司的方法。
背景技术：
坦西莫司(temsirolimus)，又名西罗莫司酯化物；雷帕霉素-42-[3_羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙烯酸酯，其是一种由惠氏医药(现已合并到辉瑞医药)研发用于治疗进展性肾癌的靶向性抗肿瘤药物，2007年获FDA批文。坦西莫司可以特异性的抑制mTOR激酶， 从而抑制肿瘤细胞的增殖、生长，使肿瘤细胞停滞在Gl期；同时，它还可以抑制VEGF的合成，从而抑制肿瘤血管的形成。坦西莫司通过雷帕霉素42位羟基与2，2 二羟甲基丙酸酯化得到。雷帕霉素是一个大环内酯类免疫抑制剂，其分子内具有多个羟基，因此区位特异性的酯化反应有一定的困难，特别是31位羟基。美国专利US 5362718(实施例10)提供了一种雷帕霉素42位羟基酯化制备坦西莫司(原研公司代号CCI-779)的方法，该方法的缺点是不具有区位选择性，在得到42位酯化的坦西莫司外，生成31位酯化和31，42 二酯化的副产物。美国专利US 6277983提供了一种区位选择性的合成坦西莫司的方法，通过形成31位硅烷化保护的中间产物合成坦西莫司，该方法虽然提高了雷帕霉素42位酯化的区位选择性，但是反应步骤复杂，此外，由于雷帕霉素对酸碱不稳定，反应生成的副产物较多，收率低，成本高。酶催化方法相对于化学合成方法，反应条件温和，反应特异性高，因而在区位特异性的合成上广受推崇。美国专利US 7^8144提供了几个脂肪酶催化合成坦西莫司的方法。 该方法将异亚丙基保护的2，2 二羟甲基丙酸通过乙烯基或异丙烯基活化，然后用脂肪酶转酰化得到异亚丙基保护的坦西莫司，进一步水解得到坦西莫司。该方法具有反应条件温和， 特异性高的优点。但是反应合成烯醇酯侧链需要昂贵的过渡金属钯催化，并在乙酸乙烯酯中回流，存在一定的安全隐患；所合成的烯醇酯侧链不稳定，纯化困难；商业化生产，有必要筛选出价格更低廉的其它酶催化剂；此外，脂肪酶催化反应的时候产生副产物乙醛，乙醛低沸点(21°C )低闪电(_40°C )，容易爆炸，而且对酶、对人体有毒害作用，这些缺点限制了该方法的工业化应用。综上，需要提供一种成本更加低廉、操作更方便、更加安全有效的坦西莫司的合成方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种改进的酶催化合成坦西莫司的方法，其成本更加低廉、操作更方便、更加安全有效。为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案一种以雷帕霉素为原料通过酶催化合成坦西莫司的方法，该方法采取以下合成路线·
权利要求
1. 一种以雷帕霉素为原料通过酶催化合成坦西莫司的方法，其特征在于所述方法采取以下合成路线
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于化合物1中，X= SR1、SC5H4N, OC6H5, OC6H4R1、OC6H4OH、OC6H4OR1、OC6H4CH = CH2、OC6H4NH2、OC6H4NHR1、OC6H4NR2、OC6H4CONH2、 OC6H4CONHRi, OC6H4CONR2, OC6H4W, OC6H3W2^ OC6H2W3^ OC6H4CHO, OC6H4COR1, OC6H4COOR1, OC6H4NO2, OC6H3 (NO2) 2、OC6H2 (NO2) 3、OC6H3 (W) (NO2)、OC10H6NO2、OC10H5 (NO2) 2、OC10H4 (NO2) 3、OC10H5 (W) (NO2)、 SC6H4NO2, SC6H3(NO2)2^SC6H2 (NO2) 3、SC6H3(W) (NO2)、OC6H4CF3^OC6H3(CF3)2^OC6H2 (CF3) 3、OC6H4CN, OC6H3(CN)2、OC6H2(CN)3、OC(OR1)CH2,OC(H)C(H)OR1、ON = C(Rj) (COR2)、ON = C(Rj) (R2)、0N = C(CN) (C00R1)及ONHCOR1中的任一种，其中R1，R2，W的定义同权利要求1，Y为CR3R4, R3，R4 的定义同权利要求1。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于化合物1中，X为4-硝基苯酚基或3-硝基苯酚基，Y为CR3R4, R3, R4的定义同权利要求1。
4.根据权利要求1至3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于化合物1中，Y为 C (CH3) 2、C (CH2CH3) 2、C (CH2CH2CH3) 2 或 C (CH3) (CH2CH3) 2。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的水解酶为来源于微生物黑曲霉、皱落假丝酵母、米黑根毛酶、南极假丝酵母、洋葱假单胞菌、荧光假单胞菌、嗜热真菌、枯草杆菌、茄病镰刀菌、腐皮镰刀菌、产碱杆菌、雪白根霉、爪哇毛霉以及米根霉的脂肪酶中的任意一种或多种。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所用的水解酶是嗜热真菌的脂肪酶TLL和茄病镰刀菌的脂肪酶 Lipase Novozyme 51032。
7.根据权利要求1或5或6所述的方法，其特征在于所述的脂肪酶的形式是固定化的。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，还添加有助于酶催化反应的分子筛，所述分子筛的孔径不超过20人。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于步骤(1)中，添加的分子筛为为4A、5A、 10XU3X分子筛或它们的任意组合。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，酶催化反应在温度0 70°C 下进行，所述溶剂为甲苯、叔丁基甲醚、乙醚、异丙醚、四氢呋喃、二氯甲烷、己烷、乙腈或它们的任意组合。
全文摘要
本发明涉及一种新型的酶催化合成坦西莫司的方法，其以雷帕霉素为原料，使雷帕霉素与取代的-1，3-二氧六环-5-羧酸酯衍生物在水解酶的作用下，在溶剂中反应得到坦西莫司前体，坦西莫司前体再经常规的去保护反应即得到坦西莫司，所述的水解酶为蛋白酶、脂肪酶、酰基转移酶中的任一种或多种，酶可以为天然来源或通过分子生物学手段重组获得。本发明与已有方法相比，更方便且更安全有效，成本降低，更适合商业生产坦西莫司。
文档编号C12P17/18GK102424829SQ20111032800
公开日2012年4月25日 申请日期2011年10月26日 优先权日2011年10月26日
发明者包华芳, 哈利·刘, 朱健, 朱惠霖, 王欣, 胡惜朝, 郦剑勇, 陈晓霞, 陶军华 申请人:杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司, 苏州汉酶生物技术有限公司