专利名称：鱼体中硝基苯类物质的色谱检测方法
技术领域：
本发明涉及一种有机物质的检测方法，具体地讲是一种鱼体中硝 基苯类物质的色谱;险测方法。
背景技术：
硝基苯类物质是重要的化工原料，据统计，全球每年排放到环境 中的硝基苯类化合物约为3万吨，而且随着现代化学工业的发展，硝 基苯的全球需求量正以每年3. 1%的速率增长。因此，通过各种途径 进入到环境，尤其水中的硝基苯的数量也越来越多，而由于水的污染 引起的水产品硝基苯污染现象也越来越严重。硝基苯类污染物属于生 物难降解的物质，不能直接用生化方法处理，此外硝基苯类物质容易 在生物体内积累，能够致癌、致畸、致突变，对人和动物的毒性很大。 因此水产品，尤其鱼类中硝基苯类物质的提取和检测就显得尤为重 要。
目前，鱼类中硝基苯类物质的检测一般采用索氏提取、离心分离， 然后用色谱检测，但是索氏提取的方法存在花费时间长、溶剂用量大、 效率不高的缺点。因此需要一种更加简单有效的方法来进行鱼类中硝 基苯类物质的提取和检测来更加方便快捷的检测水中硝基苯类物质 的污染对水生生物鱼的污染情况。本方法也可以用于其他类似物质中 硝基苯类物质的检测。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种鱼体中硝基苯类物质检测方法，以在短时间内用较少的有机溶剂快速获得较好的提 取和4企测步支果。
本发明是通过以下技术方案实现的 一种鱼体中硝基苯类物质的检测方法，包括以下步骤
1) 将鱼肉样品匀浆后置于有机溶剂提取剂中提取以获得硝基苯 类物质粗提物；
2) 用分离柱分离所得的硝基苯类物质粗提物以获得纯提取物；
3) 将步骤2)中所得的纯提取物浓缩得到浓缩液；
4) 采用色谱检测所述浓缩液中硝基苯类物质的浓度并计算出鱼 体中硝基苯类物质的含量。
其中，在所述步骤l)的提取步骤中先后在电,兹搅拌和超声震荡 条件下进行；所述电磁搅拌的转速优选为30-500 rpm，时间优选为 10-120 min,可以为单次或多次搅拌；所述超声震荡的时间可为1-30 min;所述提取液可以为二氯曱烷、正己烷或石油醚等有才几溶剂；所 述提取液的体积可以为5-100 ml;
步骤2)中所述的分离柱中依次装填有0. 2-5cm无水硫酸钠、 2-20 cm中性分离硅胶、0. 2-5 cm无水硫酸钠；所述分离柱上方可覆 盖有定量滤纸；
步骤3)通过先用无水硫酸钠干燥，然后用氮吹气仪或液体浓缩 器浓缩来进行；
所述色i普检测采用常规色谱仪分析状态，釆用中等极性的石英毛 细管色谱柱；所述色谱柱的柱长、内径、液膜厚度分别为20-60m、0. 25-0. 4m、 0. 25-0. 35 jum;柱温i殳定如下60-8(TC停留2-6 min, 以7-18。C/tnin升温至120-16(TC并停留2-6 min,再以8-15。C/min 升温至210-240。C并停留l-5min;分流比为1-15;进样口温度为 240-270°C;检测器温度为270-320°C;进样量为ljal;所述色谦检 测仪中所用的检测器为FID或ECD检测器。。
本发明采用电^ 兹搅拌和超声破碎提取来代替传统的索氏提取，可
果，检测限>0. 01 mg/kg，线性验证结果表明该方法适于硝基苯的含
量测定。该方法克服了传统提取方法耗时长、有机溶剂用量大的缺点，
能够更加快速有效地检测水中硝基苯类物质的污染对水生生物鱼的
污染情况。
图1是本发明色谱^r测方法验证结果示意图，其显示该方法所得 的峰面积与硝基苯浓度之间的线性关系。
具体实施例方式
本发明所用术语"硝基苯类物质"是指苯环上的氢原子经或未经 取代基取代的硝基苯，其中所述取代基包括氢、羟基、烃基、卣素等。 举例来说，本文的硝基苯类物质包括硝基苯；邻、间、对硝基曱苯； 邻、间、对硝基苯酚等。 '
本发明所述的硝基苯类物质的检测方法，包括以下步骤 1)在分析天平(分度值< 0. lmg )上准确称取表面用蒸馏水洗 净的不含鳞、骨、内脏的新鲜块状鱼肉样品0. 2_20g (可才艮据实际需要增加)；将样品在含有适量(优选1-50 ml)生理盐水的研钵或匀 浆器中研磨至样品基本匀浆，通常研磨时间为2-20 min,研钵或匀 浆器优选由金属、陶瓷或玻璃等材料制成；然后转移至烧杯中，通常 选用10-250 ml或更大容积的烧杯；加入^是取剂，通常为二氯曱烷、 正己烷或石油醚等有机溶剂，放入由金属陶瓷或聚四氟乙烯材料制成 的转子，用铝箔封口，以30-500 rpm的转速在磁力搅拌器上搅拌 10-120 min，然后置于超声波液体清洗器上超声破碎l-30min,然后 即可获得粗提物；
2 )将1 )中所得的粗提物通过分离柱并收集在10-250 ml烧杯 中，再用10-100ml提取剂冲洗分离柱并将其收集同一烧杯中获得纯 提取物，其中所述分离柱为玻璃分离柱，优选5-100cm,其内依次装 填有0. 2-5cm无水硫酸钠、2-20 cm中性分离硅胶、0.2-5 cm无水 硫酸钠，所述分离柱上方还可覆盖有定量滤纸，在粗提物通过分离柱 之前可以先用10-lOOml提取剂冲洗分离柱，用抽滤器快速抽滤后弃 去冲洗液；
3) 在2)中所得的纯提取物中添加少量无水硫酸钠干燥至溶液 澄清透明，然后用氮吹仪或液体浓缩器进行浓缩获得浓缩液，所述浓 缩液的体积通常为小于1-2 ml，加入提取剂(无水二氯曱烷或正己 烷)将其样品瓶中定容至1-2 ml。
4) 采用色谱检测所得浓缩液中硝基苯类物质的浓度并计算鱼体 中硝基苯类物质的含量，使用常规气相色谱仪来分析状态，检测中所 用的色谱柱为适合用于检测半挥发性有机物的中等极性石英毛细管色谱柱，所述石英毛细管色谱柱的柱长、内径、液膜厚度分别为 20-60m、 0. 25-0. 4mm、 0. 35 ju m;柱温程序设定如下60-80。C停留 2-6min，以7-18°C/min升温至120-160。C并4亭留2-6 min，再以8-15 。C/min升温至210-240。C并停留l-5min;分流比为1-15;进样口温 度为240-270。C;;险测器温度为270-320°C;进样量为1 ]u 1;载气和 尾气采用高纯氮，所述高纯氮纯度> 99. 999%;燃气采用高纯氢，所 述高纯氮纯度> 99. 999%;所述检测器为FID检测器或ECD检测器。 由于ECD对富电子物质的选择性较强，使用ECD可不用氢火焰燃烧气 体，但对操作条件的选择要求较严格且线性范围很窄，提取剂不适合 选用含氯有机溶剂，如二氯曱烷；FID检测器结构简单、稳定好且线 性范围宽，但其对富含电子的硝基苯类物质的选择性可能不如ECD敏 感。
鱼体肌肉中硝基苯类物质含量通过下式来计算
其中，Cs代表标准溶液中硝基苯类物质含量，其单位为毫克每 升(mg/1 ) ; As代表标准溶液中的峰面积，其单位为微伏秒；Ax为样 品中硝基苯的峰面积，其单位为微伏秒；V为样品浓缩后的体积，其 单位为毫升(ml); W为鱼肉样品重量，其单位为克(g); R"/。为方法 的总回收率，通常为50-85%,其通过使用常规方法采用在空白溶液 中添加标准溶液来4企测。依据现有色谱;险测技术，采用不同的标准液 可以获得不同的物质含量。另外，本领域技术人员依据现有技术，还 可以理解到本方法不仅可以检测鱼体内的硝基苯类物质含量，还可以检测其他类似物质内的硝基苯类物质含量，并且通过选择适当的有机 溶剂，还可以提取和检测其他成分的含量。
图l是以硝基苯含量测定为例，采用常规方法进行该方法的线性 检测，对测得的硝基苯的峰面积对浓度作图(参见图1)，所得方程
为y=526. 65x+54. 145， R2=0. 9984，结果表明，硝基苯物质的浓度与 峰面积之间存在线性关系，该方法适用于硝基苯的含量测定。采用常 用的方法检测该方法的检测限，对于FID和ECD检测器，检测限均> 0. 01 mg/kg。
权利要求
1、一种鱼体中硝基苯类物质的色谱检测方法，其特征在于包括以下步骤1)将鱼肉样品匀浆后置于有机溶剂提取剂中提取以获得硝基苯类物质粗提物；2)用分离柱分离所得的硝基苯类物质粗提物以获得纯提取物；3)将步骤2)中所得的纯提取物浓缩得到浓缩液；4)采用色谱检测所述浓缩液中硝基苯类物质的浓度并计算出鱼体中硝基苯类物质的含量。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于在所述步骤l) 的提取步骤中先后在电磁搅拌和超声震荡条件下进行。
3、 根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述电》兹搅拌在 30-500 rpm转速下进4亍，搅拌时间为10-120 min,所述电》兹搅拌分 一次或多次进行。
4、 根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述超声震荡的 时间为1-30 min。
5、 根据权利要求l、 2、 3或4所述的方法，其特征在于所述 有机溶剂提取剂为二氯曱烷、正己烷或石油醚。
6、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述分离柱中依 次装填有0. 2-5cm无水硫酸钠、2-20 cm中性分离硅胶、0.2-5 cm 无水》危酸钠。
7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述分离柱上方覆盖有定量滤纸。 .
8、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述色i普检测采 用常规色谱仪分析状态，采用中等极性的石英毛细管色谱柱，所述色 谱柱的柱长、内径、液膜厚度分别为20-60m、 0. 25-0. 4m、 0. 25-0. 35 M m。
9、 根据权利要求8所述的方法，其特征在于柱温设定如下 60-80。C停留2-6 min,以7-18。C/min升温至120-160。C并停留2-6 min，再以8-15。C/min升温至210-240。C并停留l-5min，分流比为 1-15;进样口温度为240-27(TC;检测器温度为270-32(TC;进样量 为lial。
10、 根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述色谱检测仪 中所用的检测器为FID或ECD检测器。
全文摘要
本发明涉及一种鱼体中硝基苯类物质的色谱检测方法，所述方法包括四个步骤(1)将鱼肉样品匀浆后置于有机溶剂中提取以获得硝基苯类物质粗提物；(2)用分离柱分离所得的硝基苯类物质粗提物以获得纯提取物；(3)将所得的纯溶液浓缩得到浓缩液；(4)采用色谱检测方式检测所得浓缩液中的硝基苯浓度并计算鱼体中硝基苯类物质的含量，其中所述硝基苯类物质粗提物的提取步骤中采用电磁搅拌提取和超声波超声提取，以在短时间内使用较少的有机溶剂快速获得较好的提取和检测效果。本方法可以快速、方便、有效地检测鱼体中硝基苯类物质，检测限≥0.01mg/kg，也可以用于其他类似物质中硝基苯类物质的检测。
文档编号G01N30/00GK101576541SQ20091007954
公开日2009年11月11日 申请日期2009年3月6日 优先权日2009年3月6日
发明者红 倪, 刘征涛 申请人:刘征涛