专利名称：一种检测展青霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测展青霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒。
背景技术：
展青霉素(I^tulin，PAT)主要是由水分含量较高、营养丰富的水果及蔬菜在保存 温度较高、通风不良的贮存条件下，由部分真菌(扩张青霉、展青霉、棒型青霉等)产生的一 种次级代谢产物。分子式为C7H6O4，熔点100°C，分子量为154，为无色针状结晶，能溶于水、 乙醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿。Glister于1941年在牛津大学首先发现并分离纯化的。早期， 展青霉素被认为是一种广谱抗生素，可用于人感冒的治疗，但随后动物实验发现，它对实验 动物具有较强的急性和亚急性毒性、免疫毒性、致畸、致突变作用，从此对展青霉素的研究 重点转移到其毒性及对食品和饲料的污染上。展青霉素主要污染苹果、山楂及其果汁制品， 并且已成为判断苹果汁质量的一个重要指标。因此，中国和欧盟等国家规定苹果、山楂制品 中展青霉素最高允许量为50 μ g/kg。展青霉素的检测方法主要包括薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和气相 色谱法(GC)等，但上述方法均难以实现对批量样品的快速检测。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种展青霉素半抗原化合物。本发明所提供的展青霉素半抗原化合物，其结构式如式I所示
权利要求
1.一种展青霉素单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No. 3392的展青霉素单克隆抗体 杂交瘤细胞株PAT分泌产生的。
2.保藏编号为CGMCCNo. 3392的展青霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株PAT。
3.一种化合物，其结构式如式I所示
4.权利要求3中所述化合物与载体蛋白的偶联物；所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状 腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白。
5.权利要求3所述化合物和/或权利要求4所述化合物与载体蛋白的偶联物在制备展 青霉素单克隆抗体中的应用。
6.权利要求3中所述化合物、权利要求4中所述偶联物和/或权利要求1中所述展青 霉素单克隆抗体在制备检测展青霉素的酶联免疫试剂盒中的应用。
7.—种检测展青霉素的酶联免疫试剂盒，为下述1)、2)、；3)或4)中任一所述酶联免疫 试剂盒1)酶联免疫试剂盒中包括权利要求4中所述偶联物、权利要求1中所述展青霉素单克 隆抗体和酶标记抗抗体；其中，所述偶联物作为包被原；2)酶联免疫试剂盒中包括权利要求3中所述化合物的酶标记物、权利要求1中所述展 青霉素单克隆抗体和抗抗体；其中，所述抗抗体作为包被原；3)酶联免疫试剂盒中包括权利要求3中所述化合物的酶标记物、权利要求1中所述展 青霉素单克隆抗体；其中，所述展青霉素单克隆抗体作为包被原；4)酶联免疫试剂盒中包括权利要求4中所述偶联物、权利要求1中所述展青霉素单克 隆抗体的酶标记物；其中，所述偶联物作为包被原。
8.—种检测样品中展青霉素的方法，为如下1)或幻所述1)所述待测样品为果汁；用权利要求7所述试剂盒对所述果汁进行检测；2)所述待测样品为水果；将所述水果进行勻浆处理，得到勻浆组织，再将所述勻浆组 织离心，取上清液，将上清液进行稀释后，得到上清液稀释液，用权利要求7所述试剂盒对 所述上清液稀释液进行检测。
9.一种制备权利要求3中所述化合物的方法，包括如下步骤将展青霉素、戊二酸酐和 4-二甲氨基吡啶以1 18 5的摩尔比溶于无水四氢呋喃中，37°C振荡反应池，终止反应， 得到权利要求3中所述化合物。
10.一种制备权利要求4中所述化合物与载体蛋白的偶联物的方法，包括如下步骤将 权利要求3中所述化合物、N-羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺以1 3 3的摩尔比 溶于无水四氢呋喃，振荡反应5h，除去沉淀和四氢呋喃，残留物溶于DMS0，向其中滴入溶于 0. 2mol/L NaHC03m6.0% (质量百分含量)载体蛋白的溶液，室温避光条件下，振荡反应过夜，透析3d，得到所述化合物与载体蛋白的偶联物。
全文摘要
本发明公开了一种检测展青霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒。该酶联免疫试剂盒，包括展青霉素单克隆抗体。展青霉素单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCCNo.3392的展青霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株PAT分泌产生的。本发明的酶联免疫试剂盒主要采用间接竞争ELISA方法定性或定量检测水果或果汁中展青霉素的含量。本发明试剂盒及检测方法对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批量样品；采用高特异性的展青霉素单克隆抗体，检验方法方便易行，具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点。本发明的试剂盒将在展青霉素的检测中发挥重要作用。
文档编号G01N33/566GK102081094SQ20091024130
公开日2011年6月1日 申请日期2009年11月27日 优先权日2009年11月27日
发明者史为民, 吴小平, 徐飞, 江海洋, 潘净如, 王战辉, 王照鹏, 王进, 米铁军 申请人:北京维德维康生物技术有限公司