专利名称：：一种光敏杀虫剂的生物测定方法
技术领域：
：本发明涉及生物测定方法，具体是一种光敏杀虫剂对农业害虫触杀毒性的生物测定方法。
背景技术：
：目前控制农业害虫危害的主要手段仍然是采用化学杀虫剂防治，尤其是对于虫口密度较大的重要危害区的应急防治更是如此。化学防治虽然具有快速、高效、使用方便等优点，但是大范围长期使用化学农药，已导致农业害虫产生抗药性，使化学农药的防治效能降低，加重农药污染等一系列问题。光敏杀虫剂是一种高效、低毒、廉价、无污染的新型杀虫剂，因而被认为是一种应用领域广阔、极具发展前途的无公害绿色杀虫剂。任何杀虫剂投放到田间使用前必须经过室内的筛选过程，因此探索出简便实用有效的生物测定方法就成为杀虫剂防治的基础。李明等(李明，陈志龙，王建国.卟吩类化合物对果腹果蝇的光活化毒力，中国公共卫生，2004，20(9):1027-1028)采用喂食法对果腹果蝇进行了卟吩类光敏杀虫剂的毒力测定。但果腹果蝇体积较小，对于较大体积的害虫应该采用何种方法进行光敏杀虫剂的毒力测定，还应根据试虫的特点确定；YINKun等2008年(YINKun，MAEn-bo，XUECh皿-rong，WUHai-hua，GUOYa-ping，ZHANGJian-zhen.InsecticidalActivitiesof5—AminolevulinicAcidonOxyachinensisandEffectonThreeKindsofEnzymes,ScientlaAgriculturaSinica，2008，41(7):2003-2007)采用注射法研究了ALA光敏杀虫剂对中华稻蝗的毒杀效应，获得LDs。值为3.61mg/g。该方法不是测定ALA毒性的最适方法，未能真实地测出ALA的有效活性，导致测试出来的剂量大大超过致死剂量，既浪费药剂，还给害虫施加了较大的选择压力；我们采用了点滴法、浸液法、喷雾法和传统药膜法研究了ALA对中华稻蝗的毒性，但这些方法不同浓度间无差异，而且没有规律性，均不能准确、真实有效地评价ALA对试虫的毒性效应，可能原因是这些生物测定法影响了ALA有效作用方式。
发明内容针对以上缺陷，本发明的目的在于提供一种可较准确测定出光敏杀虫剂对害虫的有效剂量的生物测定方法，该方法适合较大体积的害虫。本发明提供的一种光敏杀虫剂的生物测定方法，包括如下步骤(1)配制4-7个不同浓度的光敏杀虫剂溶液；(2)在4-7个直管容器中分别放置一张与内壁面积一致的滤纸；(3)将不同浓度的光敏杀虫剂溶液分别滴加在上述直管容器中的滤纸上直到饱和，将试虫置入其中；(4)水平滚动直管，试虫触药后，将试虫转移至另一容器，然后用灯光照射20min以上，测定试虫的死亡率，确定光敏杀虫剂对试虫的最低有效剂量。3所述试虫尤其适用于体积较大的害虫，可以用镊子或毛笔等器具移入。所述滤纸，其厚度根据杀虫剂溶液滴加的量而定。所述直管容器为玻璃直管，其大小视被试害虫的体积而定。所述灯光为白炽灯光源，光照强度2000-30001x。光照时确保试虫容器温度不得超过35°C，防止温度过高，影响试虫正常生长发育。所述光照射是因为光敏杀虫剂通过渗透作用进入虫体后，只有在光照下会表现出光敏性从而对害虫造成光敏毒性。本发明采用的水平滚动使虫体全身充分接触药剂而发挥触杀作用，避免了腿部支撑力较强的害虫不能与药膜充分接触。本发明采用玻璃直管，玻璃器皿对杀虫剂溶液的吸附性小，降低滤纸中的杀虫剂损耗，这样能使测试出来的致死剂量数据准确。本发明可较准确测定出光敏杀虫剂对于害虫的最低有效剂量，尤其适合较大体积的害虫，既能有效毒杀害虫，又大大地减轻了药剂浪费和对环境污染。具体实施例方式中华稻蝗是水稻产区的重要害虫之一，近年来其发生频繁，给农业生产带来了严重为害。本发明以中华稻蝗作为试虫，采用ALA光敏杀虫剂对中华稻蝗进行生物测定。实施例1步骤1:用无菌水配制4个不同浓度的光敏杀虫剂溶液，如表1，另加1个无菌水对照，配制好的药液加进小玻璃瓶中，用记号笔标记对照和光敏杀虫剂溶液浓度。步骤2:选用口径周长10.5cm、高10cm的玻璃直管，按照相应的长度和宽度裁剪5张滤纸。步骤3:将厚度为lmm的滤纸巻进玻璃直管中，用移液器吸取1.5ml不同浓度的药液分别加到4个直管中的滤纸上，旋转玻璃直管以促进药液迅速均匀地渗透整个滤纸，对照组加入相同量的无菌水。用镊子将中华稻蝗置入上述玻璃直管中，用尼龙纱布封紧管口。步骤4:水平滚动直管8min，让虫体各部位充分均匀地粘附上药液而发挥其触杀作用。每个施药容器大约取35头试虫，每个浓度设三个重复。触药后，将试虫移进内有新鲜麦苗的100ml烧杯中，置暗室中17『，然后用60W(光照强度约20001x)的白炽灯从烧杯顶部照射试虫，1盏灯照4个烧杯(光源中心距烧杯垂直距离为10cm)，2h后停止光照。记录死亡虫数，判断死亡标准为，用毛笔轻触虫体，不能爬行视为死亡。记录相应浓度下的虫子总数、活虫数和死虫数。求出毒力回归方程和LC5。，计算各处理的中子的死亡率并应用SPSS软件分析不同浓度之间的差异显著性，结果见表1。a置暗室中17h原因是ALA光敏杀虫剂是原卟啉IX合成的前体物质，ALA通过渗透作用进入虫体后，转化为原卟啉IX，暗室喂养过称是为了原卟啉IX在体内富集，富集的原卟啉IX只有在光照下会表现出光敏性从而对害虫造成光敏毒性。表1中华稻蝗2龄若虫在不同浓度ALA处理下的毒性测定4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>可以看出，采用本发明处理中华稻蝗的死亡率随处理浓度的提高而增加，能真实反映ALA光敏杀虫剂的实际杀虫活性，能准确测定出药剂对于试虫的最低有效剂量，既能有效毒杀害虫，又大大地减轻了药剂浪费和农业环境污染。权利要求一种光敏杀虫剂的生物测定方法，其特征在于(1)配制4-7个不同浓度的光敏杀虫剂溶液；(2)在4-7个直管容器中分别放置一张与内壁面积一致的滤纸；(3)将不同浓度的光敏杀虫剂溶液分别滴加在上述直管容器中的滤纸上直到饱和，将试虫置入其中；(4)水平滚动直管，试虫触药后，将试虫转移至另一容器，然后用灯光照射20min以上，测定试虫的死亡率，确定光敏杀虫剂对试虫的最低有效剂量。2.如权利要求1所述的光敏杀虫剂的生物测定方法，其特征在于，所述试虫是体积较大的害虫。3.如权利要求1所述的光敏杀虫剂的生物测定方法，其特征在于，所述直管容器为玻璃直管。4.如权利要求1所述的光敏杀虫剂的生物测定方法，其特征在于，所述灯光为白炽灯光，光照强度2000-30001x。全文摘要本发明涉及一种光敏杀虫剂对农业害虫的生物测定方法。是在直管容器中放置一张与其内壁面积一致的、光敏杀虫剂处理达到饱和的滤纸，将所试害虫置入其中，水平滚动直管，试虫触药后用光照射，以测定害虫的死亡率。本发明提供的方法适用于所有具有触杀性光敏杀虫剂，对体积较大的农业害虫均能够进行有效的生物测定，可准确测定出药剂对于害虫的最低有效剂量，既能有效毒杀害虫，又能有效地减轻药剂浪费。文档编号G01N33/00GK101776672SQ20091026393公开日2010年7月14日申请日期2009年12月25日优先权日2009年12月25日发明者张建珍,杨美玲,郭亚平,阴琨,马恩波申请人:山西大学