专利名称：利用foxo3a的多态性和单元型预测和促进健康衰老和长寿的方法
技术领域：
本发明涉及一种利用F0X03A的多态性和单元型(haplotype)在诊断中预测健康衰老和长寿或在制定治疗和干预方案中促进健康衰老和长寿的方法。相关申请的交叉引用本申请部分基于2008年8月10日提交的美国临时专利申请61/087，722并要求其优先权，通过引用将其并入本文。关于联邦政府资助的研究或开发的声明本发明是在来自国立老化研究所(the National Institute on Aging)的资助1 ROl AG027060-01(限定了健康衰老表现型)的政府支持下完成的。美国政府的支持通过来自国立心、月市、血液研究所(the National Heart, Lung, and Blood Institute)的合约 N01-HC-05102、来自国立老化研究所的合约N01-AG-4-2149及资助5 UOl AG019349-05和 K08 AG22788-02提供了额外的资金。美国政府对本发明持有一定权力。夏威夷社区基金会也通过资助2004-0463提供了进一步的支持。
背景技术：
F0X03A基因属于叉头(forichead)转录因子家族，其特征在于独特的叉头域 (forkhead domain) 0该基因有可能通过表达细胞死亡所必需的基因来发挥作为凋亡触发子(trigger)的功能。该基因与MLL基因的易位与继发性的急性白血病相关。已经发现了编码相同蛋白的可变剪切的转录本变体。所述F0X03A基因是DAF-16的人类同源基因之一，已有记载表明DAF-16基因可延长模式生物秀丽隐杆线虫(C. elegans) (Murphy CT (2006) The search for DAF-16/F0X0 transcriptional targets !approaches and discoveries. Exp Gerontol 41 :910-921)及 1111(D. melanogaster.) (Giannakou ME^ (2007) Dynamics of the action of dFOXO on adult mortality in Drosophila. Aging Cell 6 :429-438)白勺寿命。所述F0X03A基因位于人类染色体6q21处，从108987719位到109112664位(NCBI ver. 36)，由4个能够可变表达的外显子组成，其可变表达均得到相同的蛋白(变体#1记载于NM_001455. 3文件中；变体#2记载于NM_201559. 2文件中)。F0X03A蛋白由673个氨基酸构成，大小为71，277Da。在NCBI的“NP_963853”文件中限定的F0X03A的氨基酸序列被表示为序列编号1，如下所示MAEAPASPAPLSPLEVELDPEFEPQSRPRSCTWPLQRPELQASPAKPSGETAADSMIPEEEDDEDDEDGGGRAGSAMAIGGGGGSGTLGSGLLLEDSARVLAPGGQDPGSGPAT
AAGGLSGGTQALLQPQQPLPPPQPGAAGGSGQPRKCSSRRNAWGNLSYADLITRAIESSPDKRLTLSQIYEWMVRCVPYFKDKGDSNSSAGWKNSIRHNLSLHSRFMRVQNEGTGKSSffffIINPDGGKSGKAPRRRAVSMDNSNKYTKSRGRAAKKKAALQTAPESADDSPSQLSKWPGSPTSRSSDELDAWTDFRSRTNSNASTVSGRLSPIMASTELDEVQDD
DAPLSPMLYSSSASLSPSVSKPCTVELPRLTDMAGTMNLNDGLTENLMDDLLDNITLPPSQPSPTGGLMQRSSSFPYTTKGSGLGSPTSSFNSTVFGPSSLNSLRQSPMQTIQENKPATFSSMSHYGNQTLQDLLTSDSLSHSDVMMTQSDPLMSQASTAVSAQNSRRNVMLRNDPMMSFAAQPNQGSLVNQNLLHHQHQTQGALGGSRALSNSVSNMGLSESSSLGSAKHQQQSPVSQSMQTLSDSLSGSSLYSTSANLPVMGHEKFPSDLDLDMFNGSLECDMESIIRSELMDADGLDFNFDSLISTQNVVGLNVGNFTGAKQASSQSWVPGF0X03A 与 YWHAB/14-3-3-β 和 YWHAZ/14-3-3- ζ 相互作用，UniftOt 通用蛋白资源(www. uniprot. org),这是胞菜隔离(cytosolic sequestration)所必须的。通过氧化应激，与STK4相互作用，这会妨碍与YWHAB/14-3-3- β的相互作用并导致核易位。F0X03A的亚细胞定位在细胞质和胞浆中。在没有存活因子时，它通过氧化应激易位到细胞核中。存在存活因子(如IGF-1)时，F0X03A的Thr_32及Ser_253位被AKT1/PKB磷酸化。该磷酸化的形式随后与14-3-3蛋白相互作用并保留在细胞质中。存活因子的撤回诱导去磷酸化并促进易位到细胞核中，去磷酸化的蛋白在细胞核中诱导靶基因的转录并触发凋亡。尽管 AKT1/PKB看上去并不直接地使Ser-315磷酸化，但它可能活化其它能触发该残基磷酸化的激酶。通过氧化应激，F0X03A的Ser-209位被STK4磷酸化，这导致了从YWHAB/14-3-3- β 中的解离及核易位。人类的长寿具有多个决定因素，是一种复杂的表现型。尽管非遗传因素(包括饮食、体力活动、卫生习惯及心理因素)十分重要，人类寿命中高达50%的变化都可以用遗传学差异来解释卜5。一些研究显示，在平均寿命的群体中，人类寿命中大约25%的变化可以用遗传因素来解释，但是在具有更大量例外的幸存者的群体中，对寿命的遗传贡献可能更高。 例如，对九旬老人及百岁老人的家族研究显示，胞亲相对风险(测定对复杂表现型的潜在遗传贡献的常用方法)6特别高，并随着先证者的年龄增长而提高η°。然而，通常情况下，对人类中候选的“长寿-相关的”基因(以下称为“长寿基因”)的研究都是令人失望的。除了 ApoE基因3外，在各群体之间几乎没有可重复的情况。与之相反，模式生物的衰老中，已有若干重大的遗传发现"_13。例如，单个基因、特别是被认为是胰岛素/IGF-I (IIS)信号通路的一部分的单个基因的变异，就能导致模式生
物寿命的重大差别14<8。提高SIR-2活性的突变或降低胰岛素/IGF-I信号转导的突变都通过活化DAF-16/ F0X0蛋白延长了秀丽隐杆线虫的寿命19’2°。在哺乳动物细胞中，Sir2的同源基因“SIRT1” 影响若干可影响寿命的下游转录事件，包括对应激(stress)的细胞响应。SIRTl通过调节 F0X0(叉头框转录)因子完成该影响，所述F0M)因子是可作为IIS通路中的感应器及在一些哺乳动物中还可作为长寿的调节子发挥功能的蛋白家族17。哺乳动物(及其它物种)中的基因敲除模型同样支持所述IIS假说。例如，脂肪特异性的胰岛素受体敲除(FIRKO)的小鼠具有降低的脂肪质量、对年龄相关性肥胖症的防护及更长的寿命21。IIS通路中的许多其它突变看上去会影响小鼠中的长寿。所述突变包括IGF-I受体22、IRS-I22, IRS-223、PAPP-A24中的突变及Ames侏儒小鼠突变22。胰岛素信号转导的基本分子通路在进化过程中是保守的，在酵母、蝇、蠕虫、 啮齿动物及人类中可观察到该现象的证据25。蠕虫中该通路的关键调节子是转录因子 DAF-16 (异常的多尔形成-16)，该转录因子是通过抑制胰岛素/IGF-I信号转导来大幅延长秀丽隐杆线虫的寿命所必须的16。某些因子看上去以daf-16依赖的方式延长秀丽隐杆线虫的寿命，如AMP激酶26、14-3-3蛋白27、lin-4微小RNA28及热休克因子29。某些物种中， DAF-16的同源基因与衰老表现型及长寿相联系3°。例如，应激响应的Jun-N-K末端激酶 (JNK)通路看上去需要FOXO来延长果蝇的寿命31，当蝇过表达dFOXO (DAF-16的直向同源基因)时，可以显著地延长寿命32。对DAF-16/F0M)上如此多样的一系列信号显著性的趋同作用表明，该蛋白可能是影响衰老及长寿的信号转导网络中的一个重要的、进化保守的“节点。人类的DAF-16 的同源基因包括 4 个 FOXO :F0X01、F0X03A、F0X04 和 F0X06。因此， 很容易假设，在F0M)及相关基因中，单核苷酸多态性(SNP)的形式的普遍的、天然的变异可能会影响人类的长寿。由于F0XCX3B是17号染色体上的一个假基因，“F0X0”与“F0X03A”含义相同。这是一个很吸引人的假设。由于长期以来氧化应激都是一个假定的衰老机制，胰岛素、F0X0、氧化应激及人类长寿之间的联系将会特别有趣。1956年以来，衰老的自由基理论假设日积月累暴露于活性氧分子中所引起的DNA、细胞及组织的损伤是导致衰老的部分原因33，尽管该假设还未被普遍接受，多年来已积累了支持性的证据34’35。因此，F0M)可以在胰岛素信号转导、自由基及人类的衰老/长寿之间提供可能的分叉点或桥梁。在将IIS通路中的基因与人类的长寿联系起来这方面，已有一些现有的工作36’37， 包括Suh等的最近一个有意思的报导38，该报导将功能上重要的IGF-I受体的突变与例外的长寿联系了起来，但我们并未发现关于F0M)基因与人类长寿之间关联的任何公开的报导。 现有研究已经发现了 FOXO基因和其它的衰老表现型(包括4年存活和中风风险39及过早绝经4°)之间的联系。然而，人类长寿是一个包括疾病-特异性风险及个体衰老速率的复杂的表现型。 对其遗传祖先的研究十分具有挑战性。对长寿的研究也许会被较小的遗传效应量、群体分层假象、群体异质性、缺乏足够数量的长寿研究参与者及其它问题所影响3’4’41。因此，为了评价与IIS信号转导相关的基因对人类长寿的潜在遗传贡献，我们选择了一个大的、同种的、长寿的男性群体，该群体的衰老表现型特色鲜明，同时，我们进行了针对5个与IIS通路有关联的候选的长寿基因的巢式病例(nested-case)对照研究。这些基因是基于先前的与主要来自于基因敲除、转基因的、突变的及其它衰老的模式生物3’4’14_17’36’42的衰老表现型的关联挑选出的。优先选择与胰岛素敏感性和葡萄糖(能量)稳态相关的基因。由于慢性病及残疾的患病率的提高，群体的快速衰老将引发对社会的空前挑战45。 对衰老机制(包括对我们如何衰老具有普遍影响的生物学通路)更好的了解，对于降低我们的年龄相关性疾病和残疾的风险具有重要意义。有很多生物学上貌似可能的人类长寿的候选基因，但是目前仅有一个发现，即ApoE基因的发现，可在多个群体中广泛重复3。该基因对衰老表现型、特别是心血管疾病和痴呆具有普遍影响，因而影响实现长久而健康生活的能力。
发明内容
找出对人类衰老表现型和长寿具有普遍影响的基因的挑战性表明，在进行人类研究之前，利用模式生物来鉴定出先验的潜在候选基因也许是很有用的。因此，我们根据与模式生物的衰老或在先的人类研究的序列和/或功能的同源性，选择研究人类胰岛素/IGF-I 信号通路和/或氧化应激响应系统中的若干候选基因。我们从这些信号通路中制定了一份人类候选基因的清单，并评定出在日本人群体中所述候选基因的变异频率约为10%以上。 由于资源有限，仅从每个基因中选取3个SNP来研究。如果可能的话，从连锁不平衡(LD) 区域选出所述SNP，以提供对各基因最大的覆盖度。总之，本发明提供了检测F0X03A “GCC”单元型(例如与寿命延长相关的F0X03A 单元型，此处所述的寿命延长被定义为受试人多活15年以上的可能性)的组合物和方法。 在优选的实施方式中，所检测的F0X03A单元型与寿命延长的可能性提高相关，或与寿命延长的可能性降低相关，然而，本发明必须包括用于检测与寿命延长的可能性提高或降低均无关的F0X03A单元型的材料和方法和/或可将年龄相关性疾病的风险降到最低(例如“正常的”或“野生型的”基因型)的材料和方法。年龄相关性疾病是指冠心病(CHD)(也称为冠状动脉病)、中风、癌症、慢性阻塞性肺病(COPD)或其它慢性肺病、帕金森氏病、糖尿病、 肥胖症、痴呆(及一般认知功能)、衰弱(行走能力)或其它年龄相关性疾病或生理不健全和/或认知缺损。上述F0X03A “GCC”单元型可能与人类的肥胖症也有关。所述“GCC”单元型包括数万DNA碱基。该区域中的其它SNP证实了与此处记载的3个SNP的连锁不平衡。可以预料到，在所述GCC单元型中，还会鉴定出同样与长寿及健康衰老相关并可能对预测年龄相关性疾病有用的另外的SNP。所述“GCC单元型”可以作为 DNA(在F0X03A基因内或与之相邻的DNA)改变的其他类型的替代品，最终发现所述GCC单元型是可以预测例外的长寿和/或健康衰老的“功能变体”。这些其它的改变可以是倒位、 重复、缺失的形式，还可以包括以前未知的其它基因或转录本，例如“L0C100130966”基因。 L0C100130966与mif 二 3同源物2的SMT3抑制因子类似，经鉴定位于F0X03A基因的2号外显子内，所述2号外显子在“GCC”单元型内。L0C100130966的DNA序列记载于GenBank 登录号ID# “XM_001725519”中，L0C100130966预测的氨基酸序列记载于GenBank文件 “XP_001725571” 中。单元型分析可用于潜在地预测哪些患者可以从强制性保健(aggressive wellness)或疾病预防/治疗干预中受益。可通过试剂盒的形式提供单元型分析。风险计算器可采用所述信息来评估疾病、残疾或死亡的可能性，或来确定某人能存活多少年或能在没有疾病的情况下存活多少年。这样的信息对患者、健康保险公司、长期护理保险公司及医师或其他健康护理提供者针对患者的长期需求提供一些指导而言十分重要。可以开发这样的药物改变F0X03A基因的作用、改变F0X03A蛋白的细胞定位和/或它与其它蛋白的相互作用、或改变所述基因所产生的蛋白的量或类型，从而影响健康或与衰老相关的疾病。小鼠中的同源序列可能与卵巢功能早衰有关(Castrilion DH,Miao L,Kollipara R, Horner Jff, DePinho RA. Suppression of ovarian follicle activation in mice by the transcription factor Foxo3A. Science. 2003 Jul 11 ；301 (5630) :215-8)。因此，类似的单元型分析在兽医的应用中也很有用。以下的说明书仅以实施例的方式，参照附图和表格，使本发明的特征更为明显。
图1显示用表10中记载的引物和条件来检测F0X03A G/T变体的ARMS-PCR测定法的结果。图2显示用表10中记载的引物来检测F0X03A G/T变体的ARMS-PCR测定法的概要。以下表格是说明书的一部分表1. 1991-93 年的 HHP/HAAS 定群(cohort)的基线特征(baseline Characteristics)(η = 3, 741)表2.病例-对照状态的基线特征表3.人类长寿的候选基因及病例和对照中的MAF表4.病例-对照状态的F0X03A3基因型表5.基线处的基因型组之间健康状况的差异表6.对应于F0X03A基因型的胰岛素敏感性的表现型表7.与F0X03A3基因型相关的衰老相关表现型的患病率表8.最高到达年龄的基因型分布表9.鉴定rs^02^2G_T多态性的引物表10.鉴定rs^02^2G_T多态性的PCR条件发明详述A.夏威夷寿命研究研究群体该巢式病例-对照研究是作为夏威夷寿命研究的一部分实施的，该研究是从檀香山心脏计划(HHP)和檀香山亚洲衰老研究(HAAQ的原始群体中得到的健康衰老的嵌入式 (embedded)定群研究。HHP是一项从1965年开始的在8，006个日本裔的美国男性中进行的基于群体的、心血管疾病的前瞻性研究。HHP的参与者是从9，877个具有有效联系信息的男性中招募的，这些男性出生于1900-1919年之间，并在1965年居住于瓦胡岛61。研究参与者的父母均来自日本，通常来自于日本的西部和南部(94%来自于中央区或较远的西部和南部)；其中49%的亲源来自于广岛和山口的邻近地区61’62。尽管大部分参与者都出生在夏威夷(88% )，由于地理来源的原因，理论上仍存在将病例-对照状态与等位基因频率混杂的可能性。因此，对于某些分析，利用条件逻辑回归模型，根据亲代的所属地区将病例和对照分层。分析显示，数据集内没有群体分层(population stratification)白勺iiEig (-SHIIt^ )。所述HHP定群的招募、设计和过程已在别处详细叙述62。简言之，研究登记时 (1965-1968年)，参与者年龄为45-68岁(平均年龄M岁)。从HHP开始时，通过监控当地报纸(英语及日语)的讣告及监视医院出院记录，获取偶发性冠心病和中风的发展以及各种原因导致的死亡率的信息61。在1991-1993年检查的跟踪调查发现，仅有5个男性无法
追溯死亡信息63。本研究的所有参与者是从更新至2007年8月的研究参与者的记录中所得。来自 HHP的测试4的存档的表现型数据和血液样本(1991-1993年)被用作该巢式病例-对照研究的基线测试，这与檀香山亚洲衰老研究(HAAS)的开始一致。HAAS是作为HHP的扩展研究开始的，该项目是针对老年人中的神经退行性疾病、认知功能和其它衰老表现型的研究64。 测试4中，参与者包括3，741位年龄为71-93岁的男性(平均年龄77. 9 士4. 7岁)，大约是原始HHP数量的一半64。为了本巢式病例-对照研究的目的，“病例”(长寿表现型)被定义为招募时在1910 年美国出生的定群的特异性存活率中，其存活至少占前1 %的所有HHP参与者(最小年龄 95岁)κ 5。一共研究了 213例到2007年8月存活到至少95岁的个体。其中的176例个体已经死亡(平均死亡年龄97. 5岁；SD 2. 1 ；95-106岁的范围内)，37例个体依然存活(平均年龄98. 7岁；SD 2. 1 ；97-106岁的范围内)。对照是由来自于HHP/HAAS定群中的402例个体组成的，所述个体死亡时接近于 1910年美国出生的定群的特异性存活率中的中等年龄的人的平均死亡年龄(约为77岁)。 为了实现病例对照的比例大约为1 2，我们抽取了 HHP/HAAS研究群体中死亡年龄最高为81岁的个体作为对照。我们的对照群体的死亡平均年龄是78. 5岁(SD 1. 8，73-81岁的范围内)。这比美国男性群体的死亡平均年龄略高，但这也与夏威夷的日本-美国男性的平均预期寿命较高相符，上一个报导指出所述日本-美国男性的平均预期寿命要比白人男性高3. 5岁67。所有病例和对照都是家庭主要来自于日本中西部的日本人种61’62。所述过程是根据伦理指南完成，其得到了库亚基尼医学中心的伦理审查委员会的批准。从所有研究参与者或其家庭代表人(如果参与者无法提供同意的话)处获取书面知情同意书。基因分型我们针对5个候选基因中的每一个均选择了 3个SNP。我们选择的是对模式生物中的衰老通路具有详尽记载的影响的基因。所有基因都是基于假设的与IIS通路的联系或潜在的与能量稳态、葡萄糖和/或脂质代谢的联系选择的，参见图1。SNP是基于HapMap或 JSNP数据库(snp. ims. u-tokyo. ac. jp)中报导的它们的次要等位基因频率(minor allele frequencies, MAP)选择的。利用PureGene 系统(Gentra Systems, Inc.)分离细胞总 DNA 并利用 PicoGreen 染色法(Molecular Probes,Eugene,OR)定量，利用等位基因鉴别分析进行候选基因的SNP 的基因分型。从ABI购买Taq Man (Applied Biosystems, he.)试剂，选择在日本人群体中频率彡 0. 1 的 SNP(http//www. ncbi. nlm. nih. gov/projects/SNP/)。在标准条件下用iTaq Gold(Perkin-Elmer, Corp)进行PCR扩增，用iTaq Man 测定法检测PCR产物，用 6-FAM-标记的FRET探针检测一个等位基因，并用VIC-标记的探针检测另一个等位基因， 用小沟结合物(MGB)猝灭剂来增强该测定的检测。用ABI Prism 7000序列检测系统测定 PCR产物。通过一个综合的数据库系统(MS Excel, Microsoft, Inc)管理基因型的数据。还评估了各基因分型板上的所有阳性对照的一致性。检测了阳性标记物是否偏离哈迪-温伯格平衡(Hardy-Weinberg Equilibrium)。检出率超过 98%。统计分析评估了 SNP是否偏离哈迪-温伯格平衡。利用Matfect软件程序，用皮尔森卡方检验(Pearson chi-square test)来比较病例和对照的相同基因型的频率68。为了评估关联强度，用SAS的逻辑回归模型估计优势比69。进一步采用广义线性模型(GLM)和协方差分析(ANCOVA)，通过F0X03A的基因型来比较健康的研究参与者所占比例。对于病例和对照中衰老表现型的分析，用学生t检验来比较连续变量的分布，用卡方来比较比例变量的分布。
结果1991-1993年的检查中HHP/HAAS研究群体的基线特征如表1所示。平均年龄为 77. 9岁，该群体的100%都是日本人种的男性。列出了生物学特征、一般健康状况、患病率及机能状态。表1. 1991-93 年的 HHP/HAAS 定群的基线特征(n = 3，741)
基线测试的变量(1991-93年)平均值±SD最小-最大生物学特征年龄(岁)77.88 ±4.6971-93体重指数(BMI)kg/m223.43 ±3.1612.25-39.34腰/臀比0.94 ± 0.060.73-1.27总胆固醇(mg/dl)*189.73 ±33.1681-382甘油三酯水平(mg/dl)*148.96 ±93.8532-1369HDL (mg/dl)*50.94 ± 13.3620-129葡萄糖(mg/dl)*113.03 ±29.444-399胰岛素(mIU/L)*16.82 ±32.481.5-1164—般健康状况自评的健康“不良”(％)32.88—患病率CHD (%)19.38_中风(％)4.73一癌症c%；)13.84—糖尿病(％)58.11——身体机能和认知功能下身(行走困难)(％)20.47一上身(握力，以kg计)30.09 ±6.880-55认知评分(CASI)82.24 ± 16.370-100*禁食的值从该1991-93年基线群体中，我们选择了到2007年时存活到95岁以上的所有参与者作为“长寿”病例(η = 213)。随后，我们选择了 81岁之前死亡的所有参与者作为“平均”寿命的对照(η = 402)。病例和对照的基线特征如表2所示。基线测试时，在生物学特征方面，长寿的病例更老、更瘦(较小的腰臀比)，具有较低的甘油三酯(边界)水平、较低的葡萄糖水平、较低的胰岛素水平及较高的F0X03A3等位基因出现率。所述病例还有较好的自评健康度以及较低的心血管疾病(CHD和中风)及癌症的患病率。在机能上，他们看上去行走能力更强，但握力较差。认知评分上没有显著性差异。表2.病例-对照状态的基线特征
权利要求
1.一种诊断受试者中长寿素因的方法，所述方法包括从所述受试者的组织样本中确定所述受试者在6号染色体上F0X03A基因中的109015211位的rs2802292基因座/多态性处是否具有至少一个“G”等位基因。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述长寿指至少多活15岁，所述素因进一步包括免患至少一种与衰老相关的慢性病的素因。
3.如权利要求2所述的方法，其中，所述至少一种与衰老相关的慢性病选自于由糖尿病、冠状动脉病和癌症组成的组。
4.一种诊断受试者中长寿素因的方法，所述方法包括从所述受试者的组织样本中确定所述受试者在6号染色体上F0X03A基因中的109041巧4位的rs2764264基因座/多态性处是否具有至少一个“C”等位基因。
5.如权利要求1所述的方法，其中，所述长寿指至少多活15岁，所述素因进一步包括免患至少一种与衰老相关的慢性病的素因。
6.如权利要求2所述的方法，其中，所述至少一种与衰老相关的慢性病选自于由糖尿病、冠状动脉病和癌症组成的组。
7.—种诊断受试者中长寿素因的方法，所述方法包括从所述受试者的组织样本中确定所述受试者在6号染色体上F0X03A基因中的109080791位的rsl3217795基因座/多态性处是否具有至少一个“C”等位基因。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述长寿是至少多活15岁，所述素因进一步包括免患至少一种与衰老相关的慢性病的素因。
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述至少一种与衰老相关的慢性病选自于由糖尿病、冠状动脉病和癌症组成的组。
10.如权利要求1所述的方法，其中，所述长寿指至少多活15岁，所述素因进一步包括免患至少一种与衰老相关的慢性病的素因。
11.一种诊断受试者中长寿素因的方法，所述方法包括从所述受试者的组织样本中确定所述受试者是否具有“GCC”单元型，所述“GCC”单元型分别是F0X03A基因中的基因座/多态性、rs2764264基因座/多态性、rsl3217795基因座/多态性。
12.—种诊断非人类受试者中长寿素因的方法，所述方法包括从所述受试者的组织样本中确定所述受试者是否具有“GCC”单元型的非人类同源基因，所述“GCC”单元型分别是 F0X03A基因中的rs2802292基因座/多态性、rs2764264基因座/多态性、rsl3217795基因座/多态性。
13.—种包括在一个或多个容器中的第一核酸或与第一靶核酸序列的互补物以及使用说明的试剂盒，所述第一核酸具有足够的长度来与所述第一靶核酸序列的位置杂交，所述位置选自于由6号染色体上F0X03A基因中的109015211位的rs2802292基因座/多态性的“G”等位基因、6号染色体上F0X03A基因中的109015211位的rs2802292基因座/多态性的“G”等位基因及6号染色体上F0X03A基因中的1090411M位的rs2764264基因座/多态性的“C”等位基因组成的组，其中，所述第一核酸与所述第一靶核酸序列在所述位置杂 、-父。
14.一种检测F0X03A单元型的至少一个等位基因存在的方法，所述方法包括以下步骤a)收集受试者的细胞样本；b)从所述样本的细胞中分离核酸样本；c)在使所述等位基因的杂交和扩增发生的条件下，将所述核酸样本与至少一个引物接触，所述引物与F0X03A单元型的至少一个等位基因的5'和3'特异性地杂交；及d)利用等位基因检测方法检测扩增产物。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述至少一个引物选自于由序列编号5-8组成的组。
16.一种通过监控与长寿相关的基因的基因表达水平来监控用治疗药剂对受试者的治疗的方法，所述方法包括a)在给予所述治疗药剂前，从受试者处获取给药前的样本；b)检测所述给药前的样本中的基因表达水平；c)从受试者处获取一个或多个给药后的样本；d)检测所述给药后的样本中的基因表达水平；e)比较所述给药前的样本和所述给药后的样本中的基因表达水平以确定所述治疗药剂对基因表达的作用；及f)基于所述治疗药剂对基因表达的作用，改变对受试者的治疗。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述检测基因的表达水平包括确定与长寿相关的基因中蛋白、mRNA或DNA转录水平中的至少一个。
18.如权利要求16所述的方法，其中，所述与长寿相关的基因选自于由F0X03A、 L0C100130966.F0X03A的非人类同源基因及L0C100130966的非人类同源基因组成的组。
19.在风险计算器中利用“GCC”F0X03A单元型存在与否以帮助预测死亡、年龄相关性疾病或未来的身体机能的用途。
全文摘要
本发明提供了涉及鉴定和利用来自FOXO3A基因的遗传信息的方法和组合物，所述方法和组合物可用于确定并提高个体长寿的可能性及在衰老过程中保持身体机能和认知功能的可能性，所述方法和组合物还可用于确定并降低个体患以下疾病的可能性心血管疾病、代谢疾病、或年龄相关性疾病，包括冠状动脉(心脏)病、中风、癌症、慢性肺病、糖尿病、帕金森氏病和痴呆。
文档编号G01N33/15GK102177255SQ200980140170
公开日2011年9月7日 申请日期2009年8月10日 优先权日2008年8月10日
发明者布拉德利·约翰·威尔科克斯, 戴维·J·库尔巴, 蒂莫斯·艾奇逊·唐隆 申请人:库基尼医学中心