专利名称：一种基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备方法， 本发明还涉及采用所述的基于核酸适配子的有机砷化物分子印迹柱检测样本中有机砷化物的方法，属于有机砷化物检测技术领域。
背景技术：
海产品砷污染问题一直是食品安全领域关注的焦点。与陆地生物不同，海洋生物普遍具有较强的砷富集能力，鱼类、贝类、海藻等人类经常食用的海产品中均含有较高浓度的砷。海产品中的砷主要以有机砷化物的形态存在(如甲基胂酸、甲基亚胂酸、砷糖、砷胆碱等)，约占总砷的95%左右。目前，砷糖和砷胆碱的毒性尚未被证实，但甲基亚胂酸已被证实具有较强的细胞和生殖毒性，而甲基胂酸可造成DNA损伤。近年来，海产品砷超标的事件屡次见诸报端，使公众对海产品的食用安全性产生了怀疑，严重影响了水产养殖业和出口贸易的发展。因而，控制并监测海产品中砷含量具有十分重要的意义。
目前，世界各国对海产品中砷含量都有严格限制，我国海产品中的砷主要采用GB/ T 5009. 11-2003《食品中总砷及无机砷的测定》中规定的银盐法和氢化物原子荧光光度法进行检测。氢化物原子荧光光度法是我国海产品中砷检测的主要方法，此方法仅能测定无机砷和总砷含量，不能检测有机砷化物。20世纪70年代以来，电化学分析法、光谱法、色谱法、质谱法和联用技术等先进的仪器测定方法逐步被应用于砷检测。其中，色谱技术可以准确分离海产品中的有机砷化物，但检测灵敏度不尽如人意；质谱法和联用技术(如气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用等)能够准确测定海产品中各种有机砷化物的含量，但这两种方法所需仪器昂贵，且样品前处理极为复杂，实用性不高。由此可见，目前急需建立一种简便、可靠且高特异性的针对海产品中有机砷化物的检测方法，以保障海产品的食用安全。
分子印迹(molecular imprinting)是近几年基于分子识别机理发展起来的一种对特定分子(模板分子或印迹分子)具有选择性的聚合物合成技术。例如在非共价型分子印迹与可聚合的功能单体合成，并与交联剂发生聚合反应，反应结束后出去分子印迹，可在聚合物中形成功能基团精确排布的孔穴。该孔穴与印迹分子形状、大小、电荷分布具有互补性。因此制备的分子印迹聚合物(简称MIPs)对印迹分子具有良好的选择性。
整体柱具有制备简单、内部结构均匀、柱效较高和分离速度快等特点，应用广泛。 分子印迹柱结合了分子印迹技术和整体柱的优点，具有特异选择性好及传质阻力低得特发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明提供了一种基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备方法。
本发明还提供了采用所述的基于核酸适配子的分子印迹柱检测样本中有机砷化物的方法，可实现对有机砷化物简便、快速、准确的检测。
本发明是通过以下技术方案实现的一种基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与有机砷化物合成分子印迹聚合物的核酸适配子功能单体；(2)将模板分子有机砷化物、功能单体核酸适配子、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀制成基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液；(3)利用表面修饰技术，将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面上；所述模板分子有机砷化物、功能单体核酸适配子、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为 0.1 3 5 0.1 5 50 80 0. 01 0. 15 I. 0 10。
所述功能单体为核酸适配子；所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N、N-亚甲基二丙烯酰胺、3，5_ 二(丙烯酰胺)苯甲酸、二乙烯基苯、季戊四醇三丙烯酸酯、3，5_ 二 (丙烯酰胺)苯甲酸、N，N-I，4-亚苯基二丙烯酰胺；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。
本发明实施例中，所述将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面包括以下步骤(1)选用长度为5-10Cm，直径为2-10 mm的玻璃管柱，依次用I mol/L HNO3和I mol/ L NaOH清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干；(2)向玻璃管柱中注入基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液， 填满，将玻璃管柱两端封闭，浸泡5-10min，然后将玻璃管柱中的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液排出，用洗脱剂洗脱20-30min，室温下干燥5_10min ；(3)重复步骤(2)过程4-7次，制得所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱。
为除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物，本发明所述的制备方法，还包括以下步骤将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱浸入PH6. 8-7. 2缓冲液中，保存在4°C冰箱，12 24h后使用。
所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸混合液或乙腈-乙酸混合液。所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。
本发明所述的检测有机砷化物的方法，是将按上述的任意一种方法制得的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱连接到化学发光分析仪，将化学发光体系溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的有机砷化物进行检测。
所述化学发光体系溶液为鲁米诺溶液、光泽精溶液、N-溴代丁二酰亚胺溶液、 Ce(IV)_S032_溶液、鲁米诺-KMnO4溶液、鲁米诺-H2O2溶液、异烟肼-NaClO溶液或NaIO4-H2O2 溶液。
本发明的有益效果I、将表面修饰技术应用到分子印迹柱的制备当中，使得基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备具有可控性，提高了柱子的检测灵敏度和准确性。
2、本发明所得到的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱连接到化学发光分析仪用于检测有机砷化物，可以实现样本中有机砷化物的高特异性、高灵敏度、快速检测。
3、本发明的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的特异性强，样品中其它非特异性分子对检测结果无影响；灵敏度高，可以达到amol级；检测速度快，完成一个基本检测过程仅需Imin左右的时间，可在短时间内实现大量样本的高通量筛选；成本低，检测I个样品仅需几分钱。4、基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱检测有机砷化物的方法，操作快速简单，反应及结果均由仪器自动完成和记录，避免了主观因素的影响，并保证有很好的重复性，便于现场检测。
5、将化学发光技术与分子印迹技术相结合用于有机砷化物检测，既有生物传感的专一识别性，又有化学传感的机械稳定性、热稳定性。
图I为基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面的过程示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例I一种基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与一甲基胂酸合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子，功能单体，交联剂，致孔剂，引发剂，有机溶剂按摩尔比为 0. I 2. 5 0. 5 70 0. 05 2. 0混合均匀，得到基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹聚合物溶液，模板分子为一甲基胂酸，功能单体为核酸适配子，交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，致孔剂为氯仿，引发剂为偶氮二异丁腈，有机溶剂为二氯甲烷；(3)选用长度为5cm，直径为3 mm的玻璃管柱，分别用I mol/L HNO3和I mol/L NaOH 清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干，保证玻璃管柱内表面光亮无杂质；(4)如图I所示将基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中，填满，将玻璃管柱两端封闭，5min后将基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹聚合物溶液排出，用甲醇-乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面20min，直至把这一层中的模板分子一甲基胂酸完全洗掉，在室温下干燥5 min，如此循环，重复上述过程4次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 6. 8的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中18h，以便除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹聚合物，当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹柱。
将制备成功的基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹柱连接到化学发光分析仪， 将浓度2. OX 10_4 mol/L的鲁米诺溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的一甲基胂酸进行检测，结果见表I。
实施例2一种基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与甲基亚胂酸合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子，功能单体，交联剂，致孔剂，引发剂，有机溶剂按摩尔比0.5 : 2.5 : 3 : 55 : 0. I : 5，混合均匀，得到基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹聚合物溶液，模板分子为甲基亚胂酸，功能单体为核酸适配子，交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯，致孔剂为二氯甲烷，引发剂为偶氮二异丁腈，有机溶剂为二氯甲烷；(3)选用长度为8cm，直径为2mm的玻璃管柱，分别用I mol/L HNO3和I mol/L NaOH 清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干，保证玻璃管柱内表面光亮无杂质；(4)如图I所示将基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中，填满，将玻璃管柱两端封闭，5min后将基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹聚合物溶液排出，用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面25min，直至把这一层中的模板分子甲基亚胂酸完全洗掉，在室温下干燥8 min,如此循环，重复上述过程6次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 6. 8的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中12h，以便除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹聚合物，当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹柱。
将制备成功的基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹柱连接到化学发光分析仪， 采用光泽精化学发光体系，将光泽精溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的甲基亚胂酸进行检测，结果见表I。
实施例3一种基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷糖PO4合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子，功能单体，交联剂，致孔剂，引发剂，有机溶剂按摩尔比为0.I 2. 5 0. 5 70 0. 05 10混合均匀，得到基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹聚合物溶液，模板分子为砷糖PO4,功能单体为核酸适配子，交联剂为N、N-亚甲基二丙烯酰胺，致孔剂为氯仿，引发剂为偶氮二异丁腈，有机溶剂为二氯甲烷；(3)选用长度为8cm，直径为5 mm的玻璃管柱，分别用I mol/L順03和1 mol/L NaOH 清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干，保证玻璃管柱内表面光亮无杂质；(4)将基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满，将玻璃管柱两端封闭，IOmin后将基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹聚合物溶液排出，用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面30min，直至把这一层中的模板分子砷糖PO4完全洗掉，在室温下干燥10 min,如此循环，重复上述过程5次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH7. 2的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中 24h，以便除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹聚合物，当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹柱。
将制备成功的基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹柱连接到化学发光分析仪，采用亚胺类化学发光体系，将N-溴代丁二酰亚胺(NBS)溶液(5. OX 10_2 mol/L)与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的砷糖PO4进行检测，结果见表I。
实施例4一种基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷胆碱合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子，功能单体，交联剂，致孔剂，引发剂，有机溶剂按摩尔比 2 2.5 5 80 0. I 10，混合均匀，得到基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹聚合物溶液，模板分子为砷胆碱，功能单体为核酸适配子，交联剂为3，5- 二 (丙烯酰胺)苯甲酸，致孔剂为异丙醇，引发剂为偶氮二异丁腈，有机溶剂为二氯甲烷；(3)选用长度为10cm，直径为10 mm的玻璃管柱，分别用I mol/L HNO3和I mol/L NaOH清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干，保证玻璃管柱内表面光亮无杂质；(4)将基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满，将玻璃管柱两端封闭，IOmin后将基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹聚合物溶液排出，用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面28min，直至把这一层中的模板分子砷胆碱完全洗掉，在室温下干燥10 min，如此循环，重复上述过程4次。
(7)将上述玻璃管柱浸入到pH7. 2的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中 22h，以便除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹聚合物，当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹柱。
将制备成功的基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹柱连接到化学发光分析仪，采用 Ce(IV)作氧化剂的化学发光体系，将Ce ( IV )-SO/—溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，溶液中Ce( IV )浓度为I. 0X10_3 mol/L，S032_浓度为3. OX 10_4mol/L，对样品中的砷胆碱进行检测，结果见表I。
实施例5一种基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与二甲基胂酸合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子，功能单体，交联剂，致孔剂，引发剂，有机溶剂按摩尔比为1.5 2. 5 5 60 0. 01 8混合均匀，得到基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹聚合物溶液，模板分子为二甲基胂酸，功能单体为核酸适配子，交联剂为二乙烯基苯，致孔剂为甲醇，引发剂为偶氮二异丁腈，有机溶剂为四氯化碳；(3)选用长度为10cm，直径为10 mm的玻璃管柱，分别用I mol/L順03和1 mol/L NaOH 清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干，保证玻璃管柱内表面光亮无杂质；(4)如图I所示将基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中，填满，将玻璃管柱两端封闭，IOmin后将基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹聚合物溶液排出，用甲醇-乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面30min，直至把这一层中的模板分子二甲基胂酸完全洗掉，在室温下干燥10 min，如此循环，重复上述过程7次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH 7. 2的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中24h，以便除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹聚合物，当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹柱。
将制备成功的基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹柱连接到化学发光分析仪，将浓度2. 0 X 10_4 mol/L的鲁米诺-KMnO4溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的二甲基胂酸进行检测，结果见表I。
实施例6一种基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷糖OH合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子，功能单体，交联剂，致孔剂，引发剂，有机溶剂按摩尔比为0.2 2. 5 0. 5 70 0. 01 I. 0混合均勻，得到基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹聚合物溶液，模板分子为砷糖0H，功能单体为核酸适配子，交联剂为季戊四醇三丙烯酸酯， 致孔剂为二甲基亚砜，引发剂为偶氮二异丁腈，有机溶剂为四氯化碳；(3)选用长度为6cm，直径为6 mm的玻璃管柱，分别用I mol/L順03和1 mol/L NaOH 清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干，保证玻璃管柱内表面光亮无杂质；(4)将基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满，将玻璃管柱两端封闭，Smin后将基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹聚合物溶液排出，用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面25min，直至把这一层中的模板分子砷糖OH完全洗掉，在室温下干燥8 min,如此循环，重复上述过程7次。
(5)将上述玻璃管柱浸入到pH7. 2的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中 22h，以便除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹聚合物，当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹柱。
将制备成功的基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹柱连接到化学发光分析仪，将鲁米诺-H2O2溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的砷糖OH进行检测，结果见表I。
实施例7一种基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷糖SO3合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子，功能单体，交联剂，致孔剂，引发剂，有机溶剂按摩尔比0.I 2. 5 I 80 0. I 2，混合均匀，得到基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹聚合物溶液，模板分子为砷糖SO3,功能单体为核酸适配子，交联剂为3，5- 二 (丙烯酰胺)苯甲酸， 致孔剂为异丙醇，引发剂为偶氮二异丁腈，有机溶剂为二氯甲烷；(3)选用长度为8cm，直径为2mm的玻璃管柱，分别用I mol/L HNO3和I mol/L NaOH 清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干，保证玻璃管柱内表面光亮无杂质；(4)将基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满，将玻璃管柱两端封闭，IOmin后将基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹聚合物溶液排出，用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面20min，直至把这一层中的模板分子砷糖SO3完全洗掉，在室温下干燥5 min,如此循环，重复上述过程6次。
(7)将上述玻璃管柱浸入到pH7. 2的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中 12h，以便除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹聚合物，当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹柱。
将制备成功的基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹柱连接到化学发光分析仪，将异烟肼-NaClO溶液溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的砷糖SO3进行检测，结果见表I。
实施例8一种基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹柱的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷糖SO4合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子，功能单体，交联剂，致孔剂，引发剂，有机溶剂按摩尔比 2 2. 5 5 60 0. I 6，混合均匀，得到基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹聚合物溶液，模板分子为砷糖SO4,功能单体为核酸适配子，交联剂为N，N-I，4-亚苯基二丙烯酰胺， 致孔剂为异丙醇，引发剂为偶氮二异丁腈，有机溶剂为二氯甲烷；(3)选用长度为6cm，直径为2mm的玻璃管柱，分别用I mol/L HNO3和I mol/L NaOH 清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干，保证玻璃管柱内表面光亮无杂质；(4)将基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹聚合物溶液注入玻璃管柱中填满，将玻璃管柱两端封闭，IOmin后将基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹聚合物溶液排出，用甲醇和乙酸混合液洗脱玻璃管柱内表面30min，直至把这一层中的模板分子砷糖SO4完全洗掉，在室温下干燥5min，如此循环，重复上述过程7次。
(7)将上述玻璃管柱浸入到pH7. 2的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中 24h，以便除去玻璃管柱内表面过量的基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹聚合物，当玻璃管柱内表面用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹柱。
将制备成功的基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹柱连接到化学发光分析仪，将 NaIO4-H2O2溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的砷糖SO4进行检测，结果见表I。
表I本发明基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱检测效果
权利要求
1.一种基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备方法，其特征在于， 包括以下步骤(1)选择能与有机砷化物合成分子印迹聚合物的核酸适配子功能单体；(2)将有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀制成基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液；(3)利用表面修饰技术，将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面上；所述有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为 0.1 3 5 0.1 5 50 80 0. 01 0. 15 I. 0 10。
2.根据权利要求I所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备方法，其特征在于所述功能单体为核酸适配子；所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N、N-亚甲基二丙烯酰胺、3，5_ 二(丙烯酰胺)苯甲酸、二乙烯基苯、季戊四醇三丙烯酸酯、3，5_ 二(丙烯酰胺)苯甲酸、N，N-l，4-亚苯基二丙烯酰胺；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、 N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。
3.根据权利要求I或2所述的制备方法，其特征在于将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面包括以下步骤(1)选用长度为5-10cm，直径为2-10 mm的玻璃管柱，依次用I mol/L HNO3和I mol/ L NaOH清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干；(2)向玻璃管柱中注入基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液， 填满，将玻璃管柱两端封闭，浸泡5-10min，然后将玻璃管柱中的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液排出，用洗脱剂洗脱20-30min，室温下干燥5_10min ；(3)重复步骤(2)过程4-7次，制得所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱。
4.根据权利要求I或2所述的制备方法，其特征在于还包括以下步骤将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱浸入PH6. 8-7. 2缓冲液中，保存在4°C冰箱，12^24h 后使用。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸混合液或乙腈-乙酸混合液。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。
7.—种检测有机砷化物的方法，其特征在于将按上述的任意一种方法制得的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱连接到化学发光分析仪，将化学发光体系溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的有机砷化物进行检测。
8.根据权利要求7所述检测有机砷化物的方法，其特征在于所述化学发光体系溶液为鲁米诺溶液、光泽精溶液、N-溴代丁二酰亚胺溶液、Ce ( IV ) -SO/—溶液、鲁米诺-KMnO4溶液、鲁米诺-H2O2溶液、异烟肼-NaClO溶液或NaIO4-H2O2溶液。
全文摘要
本发明公开了一种基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备方法及应用制备方法包括以下步骤(1)选择能与有机砷化物合成分子印迹聚合物的核酸适配子功能单体；(2)将有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀制成基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液；(3)利用表面修饰技术，将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面上；所述有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为0.1～3∶5∶0.1～5∶50～80∶0.01～0.15∶1.0～10。将表面修饰技术应用到分子印迹柱的制备当中，使得基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹柱的制备具有可控性，提高了柱子的检测灵敏度和准确性。
文档编号G01N21/76GK102539416SQ201110449838
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者于京华, 刘素, 崔敏, 廉文静, 李 杰, 葛慎光, 邢宪荣, 颜梅, 黄加栋 申请人:济南大学