专利名称：硫氰酸根检测试剂盒及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种硫氰酸根检测试剂盒及其应用。
背景技术：
卫生部发布的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第一批)》中明确规定乳及乳制品中硫氰酸钠属于违法添加物质。过量摄入，可引起急、 慢性中毒。轻度中毒表现为眼及上呼吸道刺激症状，重度中毒表现为意识丧失，常伴发脑水肿和呼吸衰竭。慢性毒性主要是抑制碘的转运和甲状腺激素合成。尤其对胎儿和婴儿的智力和神经系统发育存在较大的风险。原料乳或奶粉中掺入硫氰酸钠后可有效的抑菌、 保鲜，是不法奶户的非法添加物质之一。目前，硫氰酸钠检测方法主要有(I)色谱法包括离子色谱法和离子色谱-质谱分析法。这些方法灵敏度高，质谱法灵敏度可达O. 10μ g/L，能作为确证方法。卫生部推荐的硫氰酸盐测定方法是离子色谱法，该方法检测灵敏度O. ImgAg0但这些仪器昂贵，测定样品耗时长，检测一个样品一小时以上。不适合企业与基层单位现场检测。(2)分光光度显色法，首先，利用三氯乙酸沉淀牛奶中的蛋白质，根据硫氰酸根与三价铁离子反应呈红色的原理，460nm检测吸光率。灵敏度l_2mg/kg。由于硫氰酸根与三价铁离子络合物不稳定，该方法要求加入三价铁离子10-20分钟内检测，批量检测时受到限制。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种适合企业与基层单位现场检测和批量检测的硫氰酸根检测试剂盒及其应用。本发明采取的技术方案
一种硫氰酸根检测试剂盒，包括标准液、增敏液，沉淀剂、显色液、针式过滤器；所述标准液为硫氰酸根浓度分别为0、0. 5、I. 0,2. 5,5. 0,7. 5、10. O mg/L的硫氰酸钠溶液或硫氰酸钾溶液；所述增敏液为10g/L-200g/L的十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠或十二烷基苯磺酸纳水溶液；所述沉淀剂为10%-50% (W/V)的三氯乙酸水溶液；所述显色液为10%-50% (ff/ V)的三价铁盐溶液。所述三价铁盐为三氯化铁、硝酸铁或硫酸铁。所述试剂盒用于测定生鲜乳中硫氰酸根的含量，具体测定方法如下
(1)样品前处理
取一定量生鲜乳加入10%体积的增敏液，混匀，再加入与生鲜乳等体积的沉淀剂，混勻，离心6000rpm/min,5min,用所述针式过滤器过滤；
(2)显色
取一定量滤液，加入10%体积的显色液，混匀；
(3)检测
456nm测定步骤(2)所得溶液的吸光度，(4)分别取与所述生鲜乳等量的标准液，用步骤(I) - (3)所述方法测定吸光度，绘制吸光度-硫氰酸根含量标准曲线，根据所述标准曲线计算所述生鲜乳样品中硫氰酸根的含量。本发明试剂盒的检测原理是硫氰酸根与三价铁离子反应呈红色，加入一定量的表面活性剂可改善其灵敏度和稳定性。生鲜乳用酸沉淀蛋白质后，离心、过滤除去脂肪和沉淀，滤液加入等量的三价铁离子，456nm测定吸光度值，测得的吸光度值与样品中硫氰酸根的含量呈正比，根据标准曲线计算样品中硫氰酸根的含量。本发明试剂盒所有试剂均为配置好的工作液，可直接操作，对设备要求低，可快速、灵敏、大量检测生鲜乳。本发明沉淀蛋白质之前，鲜牛乳中加入一定剂量的阴离子表面活性剂，使灵敏度达到O. 5 mg/kg，提高了样品在检测过程中的稳定性，反应结束后，0-2小时内，产物稳定，适用于基层单位或检测机构批量检测。
图I为本发明试剂盒标准液的硫氰酸根剂量-反应曲线。
具体实施例方式实施例I :试剂盒的组成和检测方法 I.试剂盒的组成
I. I、标准液7瓶将硫氰酸钾放入80°C烘箱内烘干2小时，准确称取干燥后的硫氰酸钾I. 6732g于IOOOml容量瓶中，定容，混匀，即得IOOOppm硫氰酸根标准储备液；取硫氰酸根标准储备溶液I mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，此溶液含硫氰酸根10 mg/L，为硫氰酸标准中间液；移取0、0. 5、I. 0,2. 5,5. 0,7. 5、10. O mL硫氰酸标准中间液，用水定容于 10 mL 容量瓶中，浓度分别为 0、0· 5,1. 0,2. 5,5. 0,7. 5,10. O mg/L ；
I. 2、增敏液I瓶浓度为10g/L-200g/L十二烷基磺酸钠水溶液；
I. 3、沉淀剂I瓶浓度为10%-50% (W/V)的三氯乙酸水溶液；
I. 4、显色液I瓶浓度为10%-50% (W/V)的三氯化铁水溶液；
1.5、针式过滤器一支。试剂盒保存温度为4°C。2.检测方法
2.I、标准曲线绘制
分别准确量取实施例I. I中七种硫氰酸根标准溶液各3ml，各加入增敏液300μ1，混匀。 然后各加入沉淀剂3ml，混匀后各加入显色液300μ1，混匀，465nm测定吸光度，绘制硫氰酸根-吸光值标准曲线，计算回归方程。2. 2、样品前处理
准确量取生鲜乳各3ml，分别加入增敏剂工作液300μ1。混匀。各加入沉淀剂3ml，混匀后6000转/分钟离心5分钟。取出，取上清液用针式过滤器过滤。2. 3 显色
取滤液3ml，加入显色剂300μ1，混匀，465nm测定吸光度。2. 4.结果分析根据标准曲线回归方程，计算样品中硫氰酸根含量。实施例2试剂盒灵敏度测定
1、增敏液10g/L十二烷基磺酸钠水溶液；
2、沉淀剂30%(W/V)的三氯乙酸水溶液；
3、显色液25%(W/V)的三氯化铁水溶液。分别准确量取实施例I中七种硫氰酸根标准溶液各3ml，每个标准溶液3个重复。 各加入增敏液300μ1，混匀。然后，各加入沉淀剂3ml，混匀后各加入显色液300μ1，混匀， 465nm测定吸光度。绘制标准曲线，计算回归方程。表I试剂盒灵敏度测定
权利要求
1.一种硫氰酸根检测试剂盒，其特征在于其包括标准液、增敏液，沉淀剂、显色液、针式过滤器；所述标准液为硫氰酸根浓度分别为0、0. 5、I. 0,2. 5,5. 0,7. 5、10. O mg/L的硫氰酸钠溶液或硫氰酸钾溶液；所述增敏液为10g/L-200g/L的十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠或十二烷基苯磺酸钠水溶液；所述沉淀剂为10%-50%(W/V)的三氯乙酸水溶液；所述显色液为10%-50% (W/V)的三价铁盐溶液。
2.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述三价铁盐为三氯化铁、硝酸铁或硫酸铁。
3.权利要求I或2所述试剂盒的应用，其特征在于测定生鲜乳中硫氰酸根的含量，具体测定方法如下(1)样品前处理取一定量生鲜乳样品加入其体积10%的增敏液，混匀，再加入与所述生鲜乳等体积的沉淀剂，混勻，离心6000rpm/min, 5min,用所述针式过滤器过滤；(2)显色取一定量滤液，加入其10%体积的显色液，混匀；( 3)检测456nm测定步骤(2)所得溶液的吸光度，(4)分别取与所述生鲜乳等量的标准液，用步骤(I)- (3)所述方法测定吸光度，绘制吸光度-硫氰酸根含量标准曲线，根据所述标准曲线计算所述生鲜乳样品中硫氰酸根的含量。
全文摘要
本发明公开了一种硫氰酸根检测试剂盒，用于检测生鲜乳中硫氰酸根的含量。本发明试剂盒组成包括即用型标准液、增敏剂，沉淀剂、显色液和针式过滤器。该试剂盒具有简单、快速、灵敏度较高、稳定性好、价格低廉等优点，适合现场批量检测。
文档编号G01N21/78GK102608109SQ20121005336
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月3日 优先权日2012年3月3日
发明者吴萌, 李春生, 闫静辉, 陈英珠 申请人:河北省科学院生物研究所, 石家庄科品生物技术有限公司