专利名称：采用电化学生物传感器测定牛乳中乳糖含量的方法
技术领域：
本发明涉及乳品质量检测技术领域，尤其涉及的是一种采用电化学生物传感器测定牛乳中乳糖含量的方法。
背景技术：
我国目前的乳业与乳制品加工业的产品质量和卫生状况不容乐观。乳中掺假、疫情控制、卫生管理等方面存在的诸多问题，使乳类食品安全性存在重大隐患。由于缺乏有效的控制和检测技术，乳制品质量安全事件屡屡发生，空壳奶粉、回收奶、形形色色的乳制品掺假事件的发生，严重损害了消费者对于乳制品安全的信任，大大的削弱了市场需求。因此，为了保证乳制品的质量，出现了各种各样的检测方法。目前我国检测乳制品中乳糖的标准方法有GB/T5413. 5-2010《婴幼儿配方食品和乳粉乳糖、蔗糖和总糖的测定》以及SN/T 0871-2000《进出口乳及乳制品中乳糖的测定方法》。GB/T 5413. 5-2010方法中规定了两种针对乳糖的测定方法高压液相色谱法和莱因-埃农氏法，SN/T 0871-2000采用分光光度法直接测定乳粉中乳糖的含量。莱因-埃农氏法与分光光度法，一次只能测定小批量的样品，不适合多个样品的测定。高效液相色谱法也只能检测出牛奶中是否掺假或掺杂，如果想要确定掺假、掺杂物质，还是需要联用质谱或者是用试剂盒等化学方法来确定具体掺假、掺杂物质。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种采用电化学生物传感器测定牛乳中乳糖含量的方法。本发明的技术方案如下一种采用电化学生物传感器测定牛乳中乳糖含量的方法，包括以下步骤(1)按照酶的固定方法处理钼电极和玻碳电极；(2)把空白溶液配好，放置到样品杯中；(3)打开微电流测定仪，预热IOmin ；(4)根据空白溶液调整微电流测定仪零点；(5)待微电流测定仪调零后打开样品杯盖，把待测溶液加入样品杯中，其液面高度不低于电极的裸露部分；(6)加入待测溶液后电流即发生变化，盖上样品杯盖，待电流稳定时止；(7)从微电流测定仪显示器中读出微电流的值X,带入标准曲线y = 15. 153X+1. 5131，乳糖含量为y，电流值为X，绘制标准曲线；即可得到乳糖的含量。所述的方法，所述酶的固定方法为将适量的混合液A沉积于玻碳电极的探头部位后将该电极置于戊二醛蒸汽中放置lh，使其与酶和壳聚糖形成网状物，之后，取等量的混合液B沉积于玻碳电极的探头部位并将传感器置于戊二醛蒸汽中放置lh，使其与酶和壳聚糖形成网状物；将适量的混合液A沉积于钼电极的探头部位并将其置于戊二醛蒸汽中放置Ih,使其与酶和壳聚糖形成网状物；混合液A :取2. 5 ii L的葡萄糖氧化酶G0D，2. 5mgBSA和 5 ii L甘油，40 ii L pH为7. 5的磷酸盐缓冲液混匀；混合液B :取2. 5 y L的@ -半乳糖苷酶， 2. 5mg壳聚糖和5 ii L甘油，40 ii L pH为7. 5的磷酸盐缓冲液混匀。在自然界里乳糖只在哺乳动物的奶液中存在，S卩乳糖是原料乳中的特有成分，只要乳源一定，乳糖的含量只在一定范围之内有微量的变化，加入掺假物后原料中乳糖的含量也会随之变化，通过测定原料乳中乳糖的含量，可以直接判断原料乳是否掺假。本发明对比目前原料牛乳中乳糖測定方法，首次推出ー种电化学生物传感器在原料乳质量监测中最优测定条件以及方法的可靠性。本发明的目的即采用电化学生物传感器測定牛乳中乳糖，将该方法应用于低乳糖牛乳生产过程中乳糖的測定，首次研究了电化学生物传感器的最优測定条件以及方法的可靠性，从而建立了快捷有效的电化学生物传感器測定牛乳中乳糖的方法，达到鉴别牛乳中是否掺假或掺杂，同时可进行多个样品測定。
图I为实验装置示意图(I钼电极；2玻碳电极；3微电流测定仪)图2为标准曲线；图3为恒电位仪电路原理图；图4微电流测定仪电路原理图。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。实施例I(I)酶的固定方法在仪器中測定乳糖浓度变化是因为随着葡萄糖氧化酶(GOD)和P -半乳糖苷酶的活性来測定乳糖浓度的的双酶生物传感器，本仪器采用壳聚糖交联戊ニ醛来固定酶，具有均一稳定性，受外界影响因素小。将适量的混合液A (混合液A :取2. 5 ii L的葡萄糖氧化酶G0D，2. 5mgBSA和5 y L甘油，40ii L pH为7. 5的磷酸盐缓冲液混匀。)沉积(将玻碳电极浸泡在混合液A中30min 即可)于玻碳电极的探头部位后将该电极(图I中两电极I为钼电扱，电极2为玻碳电极) 置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其与酶和壳聚糖形成网状物。之后，取等量的混合液B (混合液B:取2.5iiL的@-半乳糖苷酶，2.511^壳聚糖和511し甘油，4011しpH为7. 5的磷酸盐缓冲液(PBS)混匀。)沉积(将玻碳电极浸泡在混合液B中30min即可)于玻碳电极的探头部位并将传感器置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其与酶和壳聚糖形成网状物。为了排除葡萄糖的干扰，将适量的混合液A沉积(将钼电极浸泡在混合液A中30min即可)于钼电极的探头部位并将传感器置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其与酶和壳聚糖形成网状物。(2)突变电压的确定取pH值为7. 5的磷酸盐缓冲液置于电解池中，放入已固定好酶的玻碳电极及钼电极，接通电源，再取PH值为7. 5磷酸盐缓冲液、乳糖标准液置于电解池中，放入已固定好酶的玻碳电极及钼电极，接通电源，调节电压为0. 1-2. 0V,待输出电流稳定后，记录对应的电流值，得出突变电压为1.2V。(3)测定电流条件实验在突变电压确定的情况下，选取反应温度、酶固定量、pH值3个因素进行单因素试验。单因素试验设计。根据单因素的水平条件，测定突变电压。并在在单因素试验结果基础上，设计正交试验。根据单因素的水平条件，测定突变电压。并在在单因素试验结果基础上，设计正交试验，实验结果见表I。表I正交试验设计方案及结果
权利要求
1.ー种采用电化学生物传感器測定牛乳中乳糖含量的方法，其特征在于，包括以下步骤(I)按照酶的固定方法处理钼电极和玻碳电极；(2)把空白溶液配好，放置到样品杯中；(3)打开微电流测定仪，预热IOmin；(4)根据空白溶液调整微电流测定仪零点；(5)待微电流測定仪调零后打开样品杯盖，把待测溶液加入样品杯中，其液面高度不低于电极的裸露部分；(6)加入待测溶液后电流即发生变化，盖上样品杯盖，待电流稳定时止；(7)从微电流测定仪显示器中读出微电流的值X,带入标准曲线y= 15. 153x+l. 5131, 乳糖含量为1，电流值为X，绘制标准曲线；即可得到乳糖的含量。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述酶的固定方法为将适量的混合液A 沉积于玻碳电极的探头部位后将该电极置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其与酶和壳聚糖形成网状物，之后，取等量的混合液B沉积于玻碳电极的探头部位并将传感器置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其与酶和壳聚糖形成网状物；将适量的混合液A沉积于钼电极的探头部位并将其置于戊ニ醛蒸汽中放置lh，使其与酶和壳聚糖形成网状物；混合液A :取2. 5 y L的葡萄糖氧化酶G0D，2. 5mgBSA和5 y L甘油，40 y L pH为7. 5的磷酸盐缓冲液混匀；混合液B 取2. 5 ii L的P -半乳糖苷酶，2. 5mg壳聚糖和5 y L甘油，40 y LpH为7. 5的磷酸盐缓冲液混匀。
全文摘要
本发明公开了一种采用电化学生物传感器测定牛乳中乳糖含量的方法，包括以下步骤(1)按照酶的固定方法处理铂电极和玻碳电极；(2)配制空白溶液；(3)打开微电流测定仪，预热10min；(4)根据空白溶液调整微电流测定仪零点；(5)待微电流测定仪调零后打开样品杯盖，把待测溶液加入样品杯中；(2)加入待测溶液后电流即发生变化，盖上样品杯盖，待电流稳定时止；(3)读出微电流的值x，带入标准曲线y＝15.153x+1.5131，乳糖含量为y，电流值为x，绘制标准曲线；即可得到乳糖的含量。建立了快捷有效的电化学生物传感器测定牛乳中乳糖的方法，达到鉴别牛乳中是否掺假或掺杂，同时可进行多个样品测定。
文档编号G01N27/36GK102608178SQ20121006600
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月14日 优先权日2012年3月14日
发明者林芳栋, 蒋珍菊 申请人:西华大学