专利名称：一种快速检测水产养殖水中孔雀石绿或结晶紫的方法
技术领域：
本发明涉及一种快速检测水产养殖水中的孔雀石绿或结晶紫的方法，属于食品动物禁用添加剂检测技术。
背景技术：
孔雀石绿和结晶紫均属于三苯甲烷类染料，其色泽鲜艳，成本低廉，被广泛用于水产养殖、食品、医疗和纺织业。随着科学技术的发展，人们逐渐发现这两种化合物对人体的危害。由于孔雀石绿和结晶紫有杀菌和抗寄生虫作用，可以防治各种鱼病，被广泛应用于水产养殖业。但其本身和代谢产物均有致癌，致畸，致突变，使染色体断裂和呼吸系统毒性等作用。孔雀石绿和结晶紫已被欧盟和美国FDA禁用于水产养殖业。为了避免食用动物对消费者的身体健康造成危害，2002年，我国农业部第193号公告《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》中也将孔雀石绿列为禁用药物。但是，由于其抗菌效果好，价格便宜，不少养殖户仍在违规使用，因此，孔雀石绿和结晶紫的残留监控就显得格外重要。目前检测孔雀石绿和结晶紫的方法主要有:高效液相色谱法(HPLC)，液相色谱-质谱法(HPLC-MS)，液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS-MS)，同位素内标法。这些方法需要用到HPLC、MS等大型仪器，成本高，耗时长，不适用于现场检测。快速协同萃取技术是一种新型的环境友好的溶质富集和分离方法，目前还未见利用快速协同萃取对孔雀石绿和结晶紫进行萃取分离的报道，已报道的是浊点萃取对孔雀石绿和结晶紫的萃取富集，需要加热，分析时间需要几十分钟才能完成。本发明采用了表面活性剂助萃剂-萃取剂-水快速协同萃取养殖水中的孔雀石绿和结晶紫，具有常温操作，检测快速5-10min即可完成检测、结果准确，灵敏度高，成本低等特点。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种快速检测水产养殖水中孔雀石绿或结晶紫的方法，在保证检测准确度和灵敏度的同时，降低检测成本，缩短检测时间。本发明的目的通过以下技术方案予以实现:
(1)取5mL含孔雀石绿或结晶紫的样品溶液和5mL孔雀石绿或结晶紫的标准溶液置于IOmL具塞离心管中，在标准溶液和样品溶液中分别加入助萃剂表面活性剂和萃取剂，涡旋，离心；
(2)比较离心后两者上层有机相的颜色，如果样品溶液的颜色深于标准溶液，则说明样品溶液中孔雀石绿或结晶紫含量大于标准溶液中的孔雀石绿或结晶紫的含量，反之则说明样品溶液中孔雀石绿或结晶紫含量小于标准溶液中的含量。本发明中步骤(I)中所述的含孔雀石绿或结晶紫样品溶液是指水产品养殖水，孔雀石绿或结晶紫标准溶液浓度为0.05-0.2 u g/mL。本发明中萃取剂为辛醇、异辛醇、任醇、异壬醇中一种，用量为0.2-0.5mL。本发明中助萃剂为表面活性剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-100或Triton-114)、壬基酹聚氧乙烯醚(Np-7或Np_9)、支链仲醇聚氧乙烯醚(TMN-6)中一种,助萃剂体积百分比浓度为5%-10%(v/v)，用量为10-50 yl。本发明中涡旋时间5-30S，离心时间3-8min，离心速率2500-5000r / min。相对于现有技术，本发明具有以下显著优点:
1、本发明利用助萃剂-萃取剂-水快速协同萃取作为样品富集的前处理方法，将孔雀石绿或结晶紫富集在体积很小的萃取剂中，富集倍数达50倍，富集前，溶液无色，富集后，离心管上层出现蓝绿色或紫色环，颜色明显，易于观察，检测限可达0.05 u g/mL ；
2、无需购置HPLC、MS等昂贵检测设备，实验所需仪器简单，条件温和，操作简便，准确度高，非专业人员亦可完成，5-10min即可完成整个分析检测过程，为质检部门提供一种快速、简便、直观、经济的检测水产养殖水中孔雀石绿或结晶紫的方法，适用于食用水产品安全的检测，本方法具有很大的应用潜力和广阔的市场应用前景。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步地说明，但本发明的保护范围并不限于此。实施例1:快速检测水产养殖水中的孔雀石绿的方法，具体操作如下:
①将5mL鳗鱼养殖水和浓度分别为0.05，0.1,0.15，0.2 u g/mL的孔雀石绿标准系列溶液各5mL置于IOml具塞离心管中，每只离心管中加入300 异辛醇和IOyl聚乙二醇辛基苯基醚Triton -100(体积百分比浓度为10%);涡旋5s，形成均匀的乳浊体系；在3500r/min条件下离心3 min，破乳、分相，萃取剂在离心管上部形成一层环，孔雀石绿被萃取到这一层环中；②相同条件下，将鳗鱼养殖水在离心管上部形成的一层蓝绿色环和标准系列溶液形成的一层色环色阶比较，鳗鱼养殖水形成的色环的颜色比0.2 u g/mL标准孔雀石绿形成的颜色深，鳗鱼养殖水中孔雀石绿含量高于0.2 u g/mL。实施例2:快速检测水产养殖水中的结晶紫的方法，具体操作如下:
①将5mL鲤鱼养殖水和浓度分别为0.05,0.1,0.15 u g/mL的结晶紫标准系列溶液各5mL置于IOml具塞离心管中，每只离心管中加入200 辛醇和50 壬基酚聚氧乙烯醚Np-7 (体积百分比浓度为5%),润旋20s,形成均勻的乳池体系；4000 r/min条件下离心5min，破乳，分相，萃取剂在离心管上部形成一层环，结晶紫被萃取到这一层环中相同条件下，将鲤鱼养殖水在离心管上部形成的一层紫色环和标准系列溶液形成的色环比较，鲤鱼养殖水形成的色环的颜色比0.05 u g/mL标准结晶紫形成的颜色浅，鲤鱼养殖水中结晶紫含量低于0.05 u g/mL。实施例3:快速检测水产养殖水中的孔雀石绿的方法，具体操作如下:
①将5mL虾养殖水和浓度分别为0.05，0.1,0.15，0.2 u g/mL的孔雀石绿标准系列溶液各5mL置于具塞离心管中，每只离心管中加入500 u I任醇和20 U I支链仲醇聚氧乙烯醚TMN-6(体积百分比浓度为10%);涡旋15s，形成均匀的乳浊体系；在2500 r/min条件下离心6min，破乳，分相，萃取剂在离心管上部形成一层环，孔雀石绿被萃取到这一层环中；②相同条件下，将虾养殖水在离心管上部形成的一层蓝绿色环和标准系列溶液形成的一层色环色阶比较，虾养殖水形成的环的颜色介于0.05-0.1 u g/mL标准孔雀石绿形成的色环间，虾养殖水中孔雀石绿的含量介于0.05-0.1 u g/mL间。以上实施例与高效液相色谱法比较结果见表I。
表1:实施例结果与高效液相色谱法比较结果
权利要求
1.一种快速检测水产养殖水中孔雀石绿或结晶紫的方法，包括以下步骤: (1)取5mL含孔雀石绿或结晶紫的样品溶液和5mL孔雀石绿或结晶紫的标准溶液置于具塞离心管中，在标准溶液和样品溶液中分别加入助萃剂和萃取剂，涡旋，离心； (2)比较离心后两者上层有机相的颜色，如果样品溶液的颜色深于标准溶液，则说明样品溶液中孔雀石绿或结晶紫含量大于标准溶液中的孔雀石绿或结晶紫的含量，反之则说明样品溶液中孔雀石绿或结晶紫含量小于标准溶液中的含量。
2.根据权利要求1所述的快速检测水产养殖水中孔雀石绿或结晶紫的方法，其特征在于:步骤(I)中所述的含孔雀石绿或结晶紫样品溶液为水产品养殖水，孔雀石绿或结晶紫标准溶液浓度为0.05-0.2 u g/mL。
3.根据权利要求1所述的快速检测水产养殖水中的孔雀石绿或结晶紫的方法，其特征在于:萃取剂为辛醇、异辛醇、任醇、异壬醇中的一种，用量为0.2-0.5mL。
4.根据权利要求1所述的快速检测水产养殖水中的孔雀石绿或结晶紫的方法，其特征在于:助萃剂为表面活性剂聚乙二醇辛基苯基醚Triton-100、聚乙二醇辛基苯基醚Triton-114、壬基酹聚氧乙烯醚Np-7、壬基酹聚氧乙烯醚Np_9、支链仲醇聚氧乙烯醚TMN-6中的一种，助萃剂体积百分比浓度为5-10%，用量为10-50 ill。
5.根据权利要求1所述快速检测水产养殖水中的孔雀石绿或结晶紫的方法，其特征在于:涡旋时间为5-30s，离心时间为3-8min，离心速率为2500-5000r / min。
全文摘要
本发明公开了一种快速检测水产养殖水中孔雀石绿或结晶紫的方法，即助萃剂-萃取剂-水构成的快速协同萃取体系，使结晶紫或孔雀石绿萃取到离心管上部有机相中，对比标准孔雀石绿或结晶紫含量，进行样品中孔雀石绿或结晶紫的检测，方法检测限为0.05μg/mL；与已有检测方法相比，该方法萃取条件温和，检测快速，5-10min即可完成整个分析检测过程，成本低廉，无需大型仪器，准确度高，适用于食用水产品安全的检测，具有很大的应用潜力和广阔的市场前景。
文档编号G01N21/25GK103105367SQ20131002633
公开日2013年5月15日 申请日期2013年1月24日 优先权日2013年1月24日
发明者杨亚玲, 王佩瑾, 焦扬 申请人:昆明理工大学