一种饲料中叠氮化物的快速检测方法及检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】一种饲料中叠氮化物的快速检测方法和检测试剂盒，包括以下内容：加叠氮化物标准品到空白基质饲料中，加入蒸馏水，振荡静置后取上清液过膜，滤液加入比色管，调节pH值到酸性，加入显色试剂显色，然后根据所得的显色照片制成系列不同叠氮根浓度的标准比色卡。本发明的检测试剂盒由塑料样品勺、塑料滴管、比色管、量筒、试管架、0.45μm水系滤膜、注射器、pH试纸、标准比色卡、盐酸溶液、三氯化铁显色试剂、亚硝酸标准溶液、洗瓶组成。对试样开展测试，观察显示的颜色深浅和标准比色卡比对进行定性和半定量检测。若颜色为淡黄色，则试样没有掺加叠氮化物；若颜色为橙色或血红色，需要做验证试验，若验证实验未变色，则该饲料有掺加叠氮化物。采用本发明的方法和试剂盒显色反应快、测定条件相对宽松、灵敏度高、成本低，特别适合于现场测试。
【专利说明】一种饲料中叠氮化物的快速检测方法及检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种叠氮化物检测试剂盒及其快速检测方法的应用，尤其是对饲料中人为添加叠氮化物的定性和半定量的快速检测。
【背景技术】
[0002]近年来，为了提高粗蛋白的含量，谋取暴利，某些不法商贩所采取的方法从加入尿素、毛和皮革制品，到加入含高含量氮的化工产品，如脲醛树脂、三聚氰胺，甚至有掺加高毒的叠氮化物(如叠氮化钠、叠氮化钙)，给饲料企业和饲料安全带来了严重危害，以至于严重影响到食品安全和危害到人民的身体健康。
[0003]为了监测饲料质量安全，黑龙江省畜牧兽医局(黑牧饲[2011]43号)甚至发文加强饲料中叠氮化钠、叠氮化钙的检测。然而现有的国家标准、行业标准和地方标准中并没有饲料中叠氮化物的检测方法。为了打击非法添加非蛋白氮，净化饲料市场，加强政府监管，很必要研究一个方便可行的快速现场检测方法。
[0004]叠氮化钠，分子式为NaN3,分子量64.01,含氮量64.6%,相对分子质量65.01,无色晶性粉末，易溶于水，剧毒，半数致死量(大鼠，经口)45mg / kg ;对眼和皮肤有刺激性，如吸入、口服或经皮肤吸收，可引起中毒死亡。叠氮化I丐，分子式Ca(N3)2，分子量124.12，含氮量67.7%，白色粉末，有毒，容易爆炸，易溶于水。饲料中添加叠氮化物(如叠氮化钠、叠氮化钙等)可显著增加饲料含氮量。
[0005]叠氮根在酸性条件下可以和三价铁发生络合反应，呈现鲜明的血红色。上个世纪五十年代，F.Feigl就描述了三价铁法检测叠氮根的方法(Feigl F.Spot tests, InorganicApplication[M].1954,4th ed.New York:Elsevier)。目前，检测叠氮化物的方法主要有分光光度法、极谱法、离子选择性电极法和离子色谱法。
[0006]硫氰酸根也能与三价铁发生血红色络合反应，在用三价铁法检测叠氮根时，需要排除硫氰酸根存在的干扰。为了避免它们的干扰，需要做进一步的验证实验。根据硫氰酸根在酸性条件下可与亚硝酸根发生显色反应，呈红色；而叠氮根与亚硝酸根不发生反应，可向样品中加入酸和亚硝酸溶液观察是否显色以验证，排除干扰。
【发明内容】
[0007]本发明制备了检测叠氮化物的比色卡及快速检测试剂盒，提供了一种对饲料中叠氮化物定性和半定量的检测方法。为此本发明采用的技术方案是:
[0008]1、饲料中叠氮化物检测标准比色卡的制作方法:
[0009](I)分别精确称取Ig阴性饲料作为空白基质于比色管中，依次加入准确称量的系列叠氮化物标准品，分别加50mL蒸馏水，配制成叠氮化物的标准工作溶液系列，振荡静置，取上清液经0.45 μ m水系滤膜过滤,收集滤液。
[0010](2)取滤液7-8mL加入5mol / L盐酸溶液调节溶液pH值为4。加入lmol / L三氯化铁显色试剂ImL,用滤液定容至IOmL,混勻后,室温下显色lOmin。[0011](3)将显色的标准溶液采集照片，将梯度变化的一组彩色照片制成标准比色卡。根据颜色的深浅来定性和半定量。
[0012]验证实验方法:
[0013]取上述(I)中滤液7-8mL，加入5mol / L盐酸溶液和亚硝酸标准溶液各lmL，混匀后观察是否显色。
[0014]2、步骤(I)中所配制的空白基质加标含量梯度范围优选在0.0g / kg?20.0g /kg 之间，如 0.0g / kg、0.2g / kg、1.0g / kg、2.0g / kg、5.0g / kg、10.0g / kg、20.0g /
kg o
[0015]叠氮化物快速测定试剂盒，其组成包括:
[0016](I)塑料样品勺，装满一平勺饲料质量约Ig ；
[0017](2) 3mL塑料滴管，带有刻度；
[0018](3) 25mL, IOOmL 比色管；
[0019]⑷5OmL 量筒；
[0020](5)试管架，孔的直径适合25mL和IOOmL比色管；
[0021 ] (6) 25mm0.45 μ m 水系滤膜；
[0022](7) 5mL 注射器；
[0023](8)精密 pH 试纸(0.5-5.0)；
[0024](9)标准比色卡，标准比色卡为淡黄色至血红色呈梯度变化的系列色卡，每条下面对应相应叠氮根的含量；
[0025](10)5mol / L 盐酸溶液；
[0026](Il)Imol / L三氯化铁显色试剂；
[0027](12) 1000 μ g / mL亚硝酸标准溶液；
[0028](13)洗瓶(500mL)；
[0029]饲料中叠氮化物快速检测试剂盒的应用，其特征在于:
[0030](I)取一勺试样于IOOmL比色管中，加入50mL蒸馏水，振荡静置，取上清液经
0.45 μ m水系滤膜过滤,收集滤液；
[0031](2)取滤液7-8mL，加入5mol / L盐酸溶液用精密pH试纸调节pH为4 ;
[0032](3)加入lmol / L三氯化铁显色试剂ImL,用滤液定容到IOmL,混勻后,室温下显色IOmin,观察颜色；
[0033](4)将所得颜色与标准比色卡对照。
[0034]结果判定:
[0035]样品溶液若显淡黄色，贝Ij叠氮根< 0.2g / kg;
[0036]溶液若变为橙色或红色，需做以下验证:取滤液7_8mL，加入5mol / L盐酸溶液和1000 μ g/mL亚硝酸标准溶液各lmL，如果未显色，则为掺加有叠氮化物。在该方法条件下，含叠氮根量在0.2g / kg-20.0g / kg，相当于增加饲料0.02%-2%含氮量下未发现明显干扰。
[0037]本发明的创新点表现在:
[0038]I)本专利建立了制备饲料中叠氮化物检测标准比色卡的方法。
[0039]2)试剂盒法快速定性和半定量检测饲料中叠氮化物的方法，方法简单、快速、灵敏度高、结果鲜明。
[0040]3)利用该标准比色卡和试剂盒，便于目测定性和现场快速测定。
【专利附图】
【附图说明】
[0041]图1饲料中叠氮根含量标准比色卡【具体实施方式】
[0042]下面对本发明做进一步详细说明。
[0043]实施例1:
[0044]标准比色卡的制备
[0045]分析步骤:分别称量阴性复合饲料Ig(精确至0.0lg)于7支IOOmL比色管中，再分别称取叠氮化钠 0mg、0.31mg、l.55mg、3.10mg、7.74mg、15.48mg、30.95mg 加入到 IOOmL 比色管中，分别加入50mL蒸馏水，振荡静置后取上清液经0.45 μ m水系滤膜过滤，收集滤液；取滤液7-8mL到25mL比色管中，加入5mol / L盐酸调节pH值到4 ;加入lmol / L三氯化铁显色试剂ImL,用滤液定容至IOmL,混勻后,室温下显色IOmin,分别对应饲料中叠氮根含量为 0.0g / kg、0.2g / kg、1.0g / kg、2.0g / kg、5.0g / kg、10.0g / kg、20.0g/kg。给显色的溶液照相，采集颜色制作成标准比色卡，见图1。
[0046]实施例2:叠氮根快速测定试剂盒
[0047]试剂盒包括:塑料样品勺，2个，装满一平勺饲料质量约lg。3mL带刻度塑料滴管，100个；25mL比色管，30个；IOOmL比色管，30个；50mL量筒，I个;试管架，I个，20个孔，孔的直径适合IOOmL比色管；0.45 μ m水系滤膜，100个；5mL注射器，100个；精密pH试纸(0.5-5.0)，2盒；标准比色卡，I个，为淡黄色至血红色呈梯度变化的系列色卡，共7条，每条下面对应的叠氮根的含量；反应液:5mol / L盐酸溶液(500mL，玻璃瓶)，lmol / L三氯化铁溶液(500mL，玻璃瓶)，1000 μ g / mL亚硝酸标准溶液(20mL，塑料瓶)；500mL洗瓶，I个。
[0048]实施例3:
[0049]分析步骤:取某品牌奶牛精饲料补充料一勺于IOOmL容量瓶中，加入50mL蒸懼水，振荡静置后取上清液经0.45 μ m水系滤膜过滤，收集滤液；取滤液7-8mL至25mL比色管，用5mol / L盐酸溶液调整pH值为4,加入lmol / L三氯化铁显色试剂ImL,滤液定容至IOmL,混勻后，室温下显色IOmin,显浅橙红色。另取7_8mL滤液,加入5mol / L盐酸溶液和IOOOyg / mL亚硝酸标准试剂各lmL，没有颜色产生，说明样品中没有硫氰酸根干扰，定性该试样中含有叠氮根。三氯化铁显色的试样颜色与标准比色卡对照，与2.0g / kg的比色卡颜色接近，该样品中叠氮根估计在2.0g / kg左右，则相当于样品中含有叠氮化钠为3.1g/kg，含有叠氮化钙为3.0g / kg。
[0050]上述实施例仅供说明本发明之用，而并非是对本发明专利的限制；应当指出的是，对于本领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思范围的情况下，还可以作出各种变化和变型，这些都属于本发明的保护范围；因此，凡跟本发明权利要求范围所做的均等变化与修饰，均应属于本发明权利要求的覆盖范围。
【权利要求】
1.饲料中叠氮化物检测标准比色卡的制作方法，其特征在于: (1)称取一定量叠氮化物标准品，分别加入到Ig不含叠氮化物空白基质饲料中；加入50mL蒸馏水，振荡静置后上清液经滤膜过滤，收集滤液； (2)取滤液7-8mL加入盐酸溶液调节溶液pH值为4; (3)加入ImL三氯化铁显色试剂,用滤液定容至IOmL,混勻后,室温下显色IOmin； (4)把含不同浓度叠氮化物的一系列标准工作溶液显色后照相，制成彩色照片，采集颜色制成标准比色卡； (5)该卡最低检出浓度为0.2g / kg ο
2.饲料中叠氮化物快速检测试剂盒，其特征在于，其组成包括塑料样品勺、塑料滴管、比色管、量筒、试管架、0.45 μ m水系滤膜、注射器、pH试纸、标准比色卡、盐酸溶液、三氯化铁显色试剂、亚硝酸标准溶液、洗瓶，标准比色卡为颜色由淡黄色至血红色呈梯度变化的系列色卡。
3.饲料中叠氮化物快速检测试剂盒的应用，其特征在于，取一平勺试样于比色管中，加入50mL蒸馏水，振荡静置，上清液经滤膜过滤，取滤液7-8mL用盐酸溶液调节pH值为4 ;力口入ImL三氯化铁显色试剂，用滤液定容至10mL，混匀后，室温下显色IOmin ;将溶液所显示的颜色与标准比色卡对照；结果判定:试液的颜色如为淡黄色，则试样中没有掺加叠氮化物；如显示橙色或血红色，需做进一步的验证试验；验证试验步骤为:另取7-8mL滤液，加入盐酸溶液和亚硝酸标准溶液各lmL，如果未显色，则试样中有掺加叠氮化物，根据比色卡由试液显示颜色的深浅来估计叠氮化物的含量。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的叠氮化物标准品为叠氮化钠或叠氮化钙，纯度大于等于99%。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于标准比色卡的颜色为由浅至深分为7个档次，颜色由浅至深分别对应的叠氮根浓度为0.0g / kg至20.0g / kg,如0.0g / kg、0.2g / kg, 1.0g / kg, 2.0g / kg, 5.0g / kg, 10.0g / kg, 20.0g / kg。
6.根据权利要求1或2或3所述，其特征在于，所述三氯化铁显色试剂浓度为Imol/L0
7.根据权利要求1或2或3所述，其特征在于，所述盐酸溶液浓度为5mol/ L。
8.根据权利要求3所述，其特征在于，所述亚硝酸标准溶液浓度为IOOOyg/ mL。
【文档编号】G01N21/78GK103776824SQ201310480061
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2013年10月15日 优先权日:2013年10月15日
【发明者】宋薇 申请人:谱尼测试科技股份有限公司