夏枯草指纹图谱的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种夏枯草指纹图谱的检测方法，采用超高效液相色谱进行检测，包括以下步骤：供试品溶液的制备：将夏枯草粉碎，精密称量，加60%-100%的甲醇溶液，超声溶解，放凉，定容，摇匀，过滤，得滤液，作为供试品溶液；对照品溶液的制备：精密称量迷迭香酸对照品，加60%-100%的甲醇溶液溶解，作为对照品溶液；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入超高效液相色谱仪中进行测定，得由15个峰构成的夏枯草指纹图谱。本发明经发明人的大量实验和研究，得出夏枯草指纹图谱的检测方法，并确定了制备供试品溶液和对照品溶液，及超高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数；所述检测方法结果准确，精密度高，且节约试剂。
【专利说明】夏枯草指纹图谱的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药材检测领域，特别是涉及夏枯草指纹图谱的检测方法。
【背景技术】
[0002]夏枯草为唇形目唇形科植物，其性寒，味甘、辛、微苦，具有清泄肝火、散结消肿、清热解毒、祛痰止咳、凉血止血的功效，适用于淋巴结核、甲状腺肿、乳痈、头目眩晕、口眼歪斜、筋骨疼痛、肺结核、血崩、带下、急性传染性黄疸型肝炎及细菌性痢疾等。现代药理研究表明，夏枯草还具有降低血压的作用。
[0003]目前，市场中存在一些已经丧失夏枯草原本形态的夏枯草粉末和种类繁多的含有夏枯草的复方药，而现有技术中对于检测这些物质是否为夏枯草或是否含有夏枯草的方法较为复杂，且结果误差较大；另外，虽然夏枯草可全草使用，但果穗的药效优于其他部位，而目前对于区分果穗和其他部位的检测方法却相对较少。
【发明内容】
[0004]基于此，本发明的目的在于提供一种夏枯草指纹图谱的检测方法。
[0005]解决上述技术问题的具体技术方案如下:
[0006]一种夏枯草指纹图谱的检测方法，采用超高效液相色谱进行检测，包括以下步骤:
[0007](I)供试品溶液的制备:将夏枯草粉碎，精密称量，加体积分数为60%_100%的甲醇水溶液，超声溶解，放凉，定容，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液，所述供试品溶液中夏枯草的浓度为0.005-0.2g/mL ；
[0008](2)对照品溶液的制备:精密称量迷迭香酸对照品，加体积分数为60%_100%的甲醇水溶液溶解，作为对照品溶液，所述对照品溶液中迷迭香酸的浓度为14-16 μ g/mL;
[0009](3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入超高效液相色谱仪中进行测定，得由15个峰构成的夏枯草指纹图谱；
[0010]色谱条件为:色谱柱=C18柱，检测器:紫外检测器，流速0.2-0.6mL.mirT1，检测波长250-380nm，柱温20_40°C，进样量1_10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，所述梯度洗脱为:0 — 5min，(5-6)%乙腈一(5-6)%乙腈，5 — 15min，(5-6)%乙腈—(14-16)% 乙臆，15 — 30min, (14-16)% 乙臆一(44-46)% 乙臆。
[0011]在其中一些实施例中，步骤⑶所述色谱条件中:流速0.25-0.6mL ?mirT1,检测波长250-260nm，柱温20_40°C，进样量1_3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，所述梯度洗脱为:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈,5 — 15min, 5%乙腈一15%乙腈，15 — 30min,15%乙腈一45%乙腈。
[0012]在其中一些实施例中，步骤(1)中所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数为74-76%。
[0013]在其中一些实施例中，步骤(1)中所述超声处理的功率为240-260W，频率30-35kHz，时间为 25-35min。[0014]在其中一些实施例中，步骤(I)中所述供试品溶液中夏枯草的浓度为
0.005-0.01g/mL。
[0015]在其中一些实施例中，步骤(2)中所述对照品溶液中迷迭香酸的浓度为15 μ g/
mLo
[0016]在其中一个实施例中，步骤⑴中所述粉碎的粒度为55-65目。
[0017]本发明所述夏枯草指纹图谱的检测方法具有以下优点和有益效果:
[0018]本发明经发明人的大量实验和研究，以迷迭香酸为主要指标得出夏枯草指纹图谱的检测方法，并确定了制备供试品溶液和对照品溶液，及超高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数；所述检测方法可快速准确地鉴定出夏枯草，还可区分夏枯草果穗和其他部位，有效的防止了用夏枯草其他部位冒充果穗入药；该方法结果准确，精密度高，且节约试剂。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1为实施例4中共有模式指纹图谱；
[0020]图2为实施例4中不同产地夏枯草的指纹图谱；
[0021]图3为实施例4中对照品溶液的色谱图。
【具体实施方式】
[0022]以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0023]实施例1
[0024]一种夏枯草指纹图谱的检测方法，包括以下步骤:
[0025](I)供试品溶液的制备:将夏枯草粉碎过60目筛，精密称量0.5g，置于IOOmL三角瓶中，加体积分数为75%的甲醇水溶液，超声溶解(功率250W，频率33kHz)，30min，放凉，定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
[0026](2)对照品溶液的制备:精密称量迷迭香酸对照品，加体积分数为75%的甲醇溶液溶解，制成每ImL中含迷迭香酸15 μ g的溶液，作为对照品溶液；
[0027](3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入超高效液相色谱仪中，测定，得夏枯草的指纹图谱，(其15个共有峰，经指认7号峰为迷迭香酸)；
[0028]色谱条件为:色谱柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，检测器:紫外检测器，流速0.4mL.min—1，检测波长254nm,柱温30°C，进样量I μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，所述梯度洗脱为:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5 — 15min, 5%乙腈—15% 乙臆，15 — 30min, 15% 乙臆一45% 乙臆。
[0029]实施例2
[0030]一种夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0031](I)供试品溶液的制备:将夏枯草粉碎过55目筛，精密称量lg，置于IOOmL三角瓶中，加体积分数为60%的甲醇水溶液，超声溶解(功率240W，频率30kHz)，25min,放凉，定容，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
[0032](2)对照品溶液的制备:精密称量迷迭香酸对照品，加体积分数为60%的甲醇溶液溶解，制成每ImL中含迷迭香酸14 μ g的溶液，作为对照品溶液；
[0033](3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入超高效液相色谱仪中，测定，得夏枯草的指纹图谱(其15个共有峰，经指认7号峰为迷迭香酸)；
[0034]色谱条件为:色谱柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，检测器:紫外检测器，流速0.2mL.min—1，检测波长250nm,柱温20°C，进样量3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，所述梯度洗脱为:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5 — 15min, 5%乙腈—14% 乙臆，15 — 30min, 14% 乙臆一44% 乙臆。
[0035]实施例3
[0036]一种夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:
[0037](I)供试品溶液的制备:将夏枯草粉碎过65目筛，精密称量2g，置于IOmL三角瓶中，加甲醇，超声溶解(功率240W，频率30kHz)，35min,放凉，定容，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；
[0038](2)对照品溶液的制备:精密称量迷迭香酸对照品，加甲醇溶解，制成每ImL中含迷迭香酸16 μ g的溶液，作为对照品溶液；
[0039](3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入超高效液相色谱仪中，测定，得夏枯草的指纹图谱(其15个共有峰，经指认7号峰为迷迭香酸)；
[0040]色谱条件为:色谱柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，检测器:紫外检测器，流速0.6mL.mirT1,检测波长380nm，柱温40°C，进样量10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，所述梯度洗脱为:0 — 5min, 6%乙腈一6%乙腈，5 — 15min, 6%乙腈—16% 乙臆，15 — 30min, 16% 乙臆一46% 乙臆。
[0041]实施例4夏枯草指纹图谱的构建方法
[0042]一、实验目的
[0043]夏枯草指纹图谱的构建方法。
[0044]二、实验方法
[0045]1、实验试剂盒药材
[0046]甲醇(色谱纯，TEDIA公司)，乙腈(色谱纯，TEDIA公司)，水为哇哈哈纯净水，磷酸(色谱纯，北京化工厂)。
[0047]对照品迷迭香酸(中国食品药品检定研究院，批号:111871-201102)；
[0048]不同产地的夏枯草药材13批，均由湖南中医药大学生药学教研室潘清平教授鉴定夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗。
[0049]表I夏枯草药材来源
[0050]
【权利要求】
1.一种夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，采用超高效液相色谱进行检测，包括以下步骤: (1)供试品溶液的制备:将夏枯草粉碎，精密称量，加体积分数为60%-100%的甲醇水溶液溶解，超声处理，放凉，定容，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液，所述供试品溶液中夏枯草的浓度为0.005-0.2g/mL ； (2)对照品溶液的制备:精密称量迷迭香酸对照品，加体积分数为60%-100%的甲醇水溶液溶解，作为对照品溶液，所述对照品溶液中迷迭香酸的浓度为14-16 μ g/mL ； (3)分别精密吸取步骤(I)所述供试品溶液和步骤(2)所述对照品溶液，注入超高效液相色谱仪中进行测定； 色谱条件为:色谱柱=C18柱，检测器:紫外检测器，流速0.2-0.6mL.mirT1，检测波长250-380nm，柱温20_40°C，进样量1_10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，所述梯度洗脱为:0 — 5min，(5-6)%乙腈一(5-6)%乙腈，5 — 15min，(5-6)%乙腈—(14-16)% 乙臆，15 — 30min, (14-16)% 乙臆一(44-46)% 乙臆。
2.根据权利要求1所述的夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤(3)所述色谱条件中:流速0.25-0.6mL.min—1，检测波长250_260nm，柱温20-40°C，进样量1-3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，所述梯度洗脱为:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5— 15min, 5% 乙臆一15% 乙臆，15 — 30min, 15% 乙臆一45% 乙臆。
3.根据权利要求1或2所述的夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤(I)中所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数为74-76%。
4.根据权利要求1或2所述的夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤(I)中所述供试品溶液中夏枯草的浓度为0.005-0.01g/mL。
5.根据权利要求1或2所述的夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述对照品溶液中迷迭香酸的浓度为15μ g/mL。
6.根据权利要求1或2所述的夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤(I)中所述超声处理的功率为240-260W，频率30-35kHz，时间为25_35min。
7.根据权利要求1或2所述的夏枯草指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤(I)中所述粉碎的粒度为55-65目。
【文档编号】G01N30/02GK103926344SQ201410158067
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月18日 优先权日:2014年4月18日
【发明者】蒋莉娟, 姚江雄, 许招懂, 方铁铮, 林丽美, 黎志坚 申请人:广州白云山星群(药业)股份有限公司